«ФИЗИОЛОГИЯ И ПАТОЛОГИЯ ПОЧЕК И ВОДНО-СОЛЕВОГО ОБМЕНА»,

1 Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Северо-Осетинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации МАТЕРИАЛЫ Международной научной конференции «ФИЗИОЛОГИЯ И ПАТОЛОГИЯ ПОЧЕК И ВОДНО-СОЛЕВОГО ОБМЕНА», посвященной 100-летию со дня рождения профессора Н.Н.Прониной декабря 2012 г. г.владикавказ

2 ББК М а т е р и а л ы Международной научной конференции «Физиология и патология почек и водно-солевого обмена», посвященной 100-летию со дня рождения профессора Н.Н.Прониной. Владикавказ: ИПК «Литера», с. Печатается в соответствии с решением научного координационного совета СОГМА от 16 июля 2012 г., протокол 7. ISBN Редакционная коллегия: проф. Т.М.Гатагонова, проф. В.Б.Брин (ответственный за выпуск), проф. З.Т.Астахова. ISBN СОГМА, 2012

3 ВВЕДЕНИЕ 3 В сборник научных работ включены материалы исследований в области физиологии и патологии почек и водно-солевого обмена, выполненных в научных лабораториях России (гг. Владикавказ, Новосибирск, Тула, Ставрополь, Махачкала), Украины (гг. Донецк, Черновцы) и США (Университет штата Огайо), представленных на международную конференцию, посвященную 100 летию со дня рождения профессора Н. Н. Прониной. 19 декабря 2012 года исполняется 100 лет со дня рождения Нины Николаевны Прониной, доктора медицинских наук, профессора, заслуженного деятеля науки Северо-Осетинской АССР, кавалера Ордена Трудового Красного Знамени. Выпускница Куйбышевского медицинского института, Н. Н. Пронина несколько лет работала ассистентом кафедры патологической физиологии в Куйбышеве, затем в Орджоникидзе, а в 1950 году в звании доцента она возглавила кафедру нормальной физиологии Северо-Осетинского государственного медицинского института, в 1957 году защитила докторскую диссертацию. В течение 18 лет Н. Н. Пронина была проректором по научной работе института, много сил и энергии вложив в развитие научного кадрового потенциала ученых-медиков Северной Осетии. Н. Н. Пронина является основоположником научного направления исследований на Юге России в области физиологии физиологии гормональной регуляции функции почек и водно-солевого обмена и пищеварения, при этом система пищеварения рассматривается ею как одно из звеньев регуляции водно-солевого обмена. Несмотря на то, что организатором кафедры нормальной физиологии в 1940 году в Северо-Осетинском государственном медицинском институте был профессор В. Е. Робинсон, профессор Н. Н. Пронина по праву может считаться основоположником научной физиологической школы. Под ее руководством выполнены и защищены 3 докторские и 15 кандидатских диссертаций, ее ученики возглавляли кафедры и научные лаборатории во многих городах нашей страны.

4 4 Вышедшая в 1969 году в издательстве «Наука» ее монография «Гормоны в регуляции водно-солевого обмена. Антидиуретический гормон» сыграла существенную роль в развитии этого раздела физиологии в нашей стране и за рубежом. И сегодня эта монография входит в число обязательных оригинальных экземпляров в библиотеке Калифорнийского университета. Проф. Н. Н.Пронина была куратором Всесоюзной программы Академии медицинских наук СССР по гормональной регуляции функции почек, Почетным членом Всесоюзного физиологического общества им. И. П. Павлова.

5 ВМЕСТО ПРЕДИСЛОВИЯ 5 Интервью академика РАН Юрия Викторовича Наточина главному редактору газеты «Интерфарммедика» издательства «Соверо Пресс» Марии Олеговне Бочаровой (правнучке Н. Н. Прониной) ФИЗИОЛОГИЯ ВЧЕРА, СЕГОДНЯ И ВСЕГДА Академик-секретарь отделения физиологии и фундаментальной медицины РАН, зав.лабораторией физиологии почки и водно-солевого обмена Института эволюционной физиологии и биохимии им. И. М. Сеченова РАН, основатель и декан медицинского факультета СПБГУ, профессор Юрий Викторович Наточин один из наиболее выдающихся специалистов по физиологии водно-солевого обмена, чья работа на протяжении уже практически полувека во многом определяет развитие этой науки. В свое время ему довелось тесно сотрудничать и с Ниной Николаевной Прониной. В преддверии конференции я встретилась с Юрием Викторовичем, и он рассказал мне о вызовах, которые современный мир бросает физиологии, о неизменном достоинстве, с которым она принимает их, снова и снова находя ответы на загадки нашего организма, а также поделился воспоминаниями о Нине Николаевне. Как состоялось Ваше знакомство с Ниной Николаевной Прониной? В 1965 году создавался Научный совет по физиологическим наукам АН СССР. Академик В. Н. Черниговский предложил мне возглавить комиссию по физиологии почки и водно-солевого обмена. Мне предстояло объединить всю работу, которая велась в нашей стране в этой области. На следующий год наша Проблемная комиссия организовала в Новосибирске первую в СССР Всесоюзную конференцию по физиологии почек и водно-солевого обмена. Я пригласил Нину Николаевну принять

6 6 участие в её работе, поскольку она развивала одно из важных направлений нашей науки. Она привлекла к этой работе двух аспиранток Эмму Абхазовну Тотрову и Тамару Сергеевну Сулаквелидзе, которые впоследствии стали докторами наук, внесли большой вклад в развитие физиологии водно-солевого обмена. А в 1971 году конференция по физиологии почек и водно-солевого обмена состоялась уже в Орджоникидзе. Ее возглавила сама Нина Николаевна. Строгая, изящная, умная, интеллигентная такой я впервые увидел Нину Николаевну, такой и запомнил на всю жизнь. Она обладала очень мягкой манерой ведения заседаний и вместе с тем четко следовала сложившемуся у нее образу проблем и задач. Нине Николаевне очень многое удалось. Ей принадлежит большая роль в понимании общей конструкции регуляции водно-солевого обмена как нервной, так и гуморальной составляющих этого процесса. Как с тех пор изменилась физиологическая наука? Образ физиологии за последние несколько десятилетий сильно поменялся. В наши дни происходит все большее углубление в молекулярные процессы, происходящие в организме в норме и патологии. Но важно не забывать, что они происходят не сами по себе, они подчинены контролю, регуляции. Без понимания механизмов последних невозможно трактовать данные о молекулярных процессах, обеспечивающих осуществление функции. И то, и другое физиология, она позволяет проникнуть в механизмы функции в организме здорового и больного человека: это классическая, фундаментальная наука. Мне кажется довольно нелепой современная тенденция менять название, сохраняя прежней суть, обособлять различные субкатегории физиологии в отдельные науки. Недавно я принимал делегацию из Великобритании и спросил их, зачем нужно это дробление. Они ответили, что парламент просто не даст им денег, если они будут развивать науки со «старым» названием. Каким, на Ваш взгляд, должно быть образование современного врача, чтобы непрерывно и в полной мере осу-

7 7 ществлялась интеграция достижений фундаментальной науки в клиническую практику? Год назад меня попросили написать новую программу медицинского образования. На мой взгляд, в нем должны быть два основных варианта. Первая подготовка практикующих врачей, с бессмертным принципом обучения «у постели больного». В сущности, это то образование, которое сегодня осуществляют в большинстве медицинских вузов. Другой вариант меньшее число студентов с большим объёмом знаний в области фундаментальной науки, те, кто будут заниматься научными исследованиями а лаборатории или клинике. Им потребуется усложненная программа с углубленным освоением фундаментальных наук, но ключевое значение все же будет иметь реализация полной программы для получения диплома по специальности «Лечебное дело», который даст им право вести больных, а не только работать в лаборатории. Когда я создавал факультет, на курсе было человек, и мне удалось внедрить этот принцип, более того найти индивидуальный подход к каждому студенту. Разумеется, при наборе человек это невозможно, и сегодня в медицинских вузах акцент сделан на практическую медицину. Будущее за взаимодействием тех и других групп врачей. Именно взаимодействием, а не объединением двух направлений: я убежден, что две линии подготовки отражают и потребность общества, и интересы студентов. Исследовательская работа в клинике и лаборатории требует много времени, необходимо непрерывно овладевать новыми знаниями, в муках искать объяснение фактам, которые наблюдаются при той или иной форме патологии, но для объяснения их механизма нужна свежая идея, которая в дальнейшем может привести к открытию. Мне вспоминается пример из собственного опыта. В середине 90 х, когда в стране царила абсолютная нищета, нашей лаборатории понадобилась кровь для исследований. Нам удалось получить 80 проб сыворотки крови, оставшейся в клинике нервных болезней. Исходная цель нашей работы была иной, но при анализе проб осмотическое давление крови её осмоляльность оказалось неожиданно очень высокой в диа-

8 8 пазоне от 295 до 360 мосм / кг Н 2 О. Выше 360 значений не было: затем наступают гиперосмолярная кома и смерть. Выяснилось, что все эти пробы сыворотки крови принадлежали пациентам с инсультом. Подумав и перебрав несколько вариантов, мы предприняли попытку сопоставить эти данные с временем пребывания пациента в клинике. Оказалось, корреляция очень сильная: чем дольше пациент находится в клинике, тем выше показатели осмотического давления. Оказалось, что используя гипертонический раствор для снятия отека мозга, врачи обычно не контролируют осмотическое давление крови. Поскольку больной без сознания, у него отсутствует чувство жажды, и по мере вливания гипертонического раствора нарастает осмотическое давление крови. Поэтому часто пациенты погибали от гиперосмолярной комы, виной тому неадекватная терапия. Мы предложили вводить таким пациентам 5 % раствор глюкозы для поддержания осмоляльности плазмы крови на верхней границе нормы. Результаты оказались впечатляющими: удалось сократить время пребывания пациентов в клинике до 17 дней, летальность в городских больницах у этой категории пациентов снизилась в 2 3 раза. Конечно, речь не идет о стволовых поражениях. Но вы видите, насколько насколько необходимо постоянное совершенствование подходов в практической медицины. А она, в свою очередь, каждый день предъявляет новые загадки. Каковы сегодня наиболее актуальные вопросы физиологии водно-солевого обмена? Проблема воды и ионов, проблема значения водно-солевого обмена для реализации практически любой функции говорит о том, что в каждом разделе медицины могут возникать нерешенные задачи. К таким областям относится космическая медицина и нефрология, лечение ночного энуреза у детей и глаукомы Не счесть форм патологии и проблем физиологии, где требуются решение вопросов, касающихся участи почек и нормализации водно-солевого баланса. Выше был упомянут феномен ночного энуреза у детей. Удивительна широкая распространенность этой патологии: в некоторых странах ночным энурезом страдают до 28 % детей! Ясно, что это может быть сопря-

9 9 жено с массой проблем, начиная от нарушения сна и заканчивая психологическими последствиями. Причину видели в снижении ночью секреции вазопрессина, вследствие чего уменьшается реабсорбция воды. Исследования показали, что у части пациентов ночью уменьшается и реабсорбция натрия, а вместе с ним выводится больше воды. На основе этих данных были разработаны схемы лечения, которые позволили значительно повысить эффективность терапии ночного энуреза у детей. Становится все более очевидным, что достижения в области молекулярной генетики, молекулярной биологии позволяют понять механизмы физиологических функций, но, безусловно, физиологию не заменит ничто. Организм существует как целое, это огромная проблема обеспечения взаимодействия частей для адекватной реакции организма на его собственные вызовы и внешние воздействия. Совсем недавно в исследованиях нашей лаборатории было показано значение в регуляции водно-солевого обмена инкретинов и аутакоидов. Следовательно, кроме влияний нервной системы и гормонов эндокринных желез, важную роль играют физиологически активные вещества иной природы. Какова физиологическая значимость этих явлений? Они говорят о существовании в организме человека и животных иных уровней регуляции, которые могут иметь значение для клинической медицины. Та область науки, которой посвятила свои исследования и жизнь Нина Николаевна, дарит нам все новые открытия, в клинику приходят благодаря этому новые способы диагностики и лечения. Год за годом удается все глубже познать организм человека, но открываются новые грани и очевидна необходимость в познании функций живого классических наук, к числу которых принадлежит физиология.

10 10 УДК: СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О МЕХАНИЗМАХ РЕГУЛЯЦИИ ГОМЕОСТАЗА КАЛИЯ Айзман Р. И. Новосибирский государственный педагогический университет, Россия, г.новосибирск Рассматриваются все звенья внешнего и внутреннего контуров регуляции гомеостаза калия: поступление его в организм, всасывание в желудочно-кишечном тракте, экскреция почками, а также распределение в организме и депонирование в тканях. Особое внимание уделяется анализу механизмов регуляции транспорта катиона в указанных звеньях. MODERN VIEWS ON MECHANISMS OF POTASSIUM HOMEOSTASIS REGULATION Aizman R. I. Novosibirsk state pedagogical university, Russia, Novosibirsk All structures of external and internal contours of potassium homeostasis regulation are considered: its intake to an organism, absorption in a intestine, renal excretion, and also distribution in an organism and deposition in tissues. The special attention is given to the analysis of mechanisms of regulation of cation transport in the specified structures. Калий один из наиболее важных внутриклеточных катионов, играющий важную роль в осуществлении многих функций клеток: росте и дифференцировке клеток, синтезе белков, регуляции активности различных ферментов, контроле кислотно-щелочного равновесия и объема клеток, поддержании электрических свойств клеточных мембран и т.д. [6]. Поэ тому сохранение гомеостаза калия является жизненно необходимым условием для нормального функционирования организма. Ги-

11 11 покалиемии приводят к мышечной слабости, парезам кишечника, метаболи ческому алкалозу, аритмии сердечной деятельности, а гиперкалиемии вызывают паралич вплоть до остановки сердца [8]. Гомеостаз калия включает в себя механизмы сохранения содержания катиона в организме, так называемый внешний контур, состоящий из поступления катиона в организм, всасывания его из пищеварительного тракта и экскреции с мочой и калом. Кроме того, существует внутренний контур регуляции, включающий неравномерное распределение катиона между внутри- и внеклеточным пространством в отношении 98:2. Поддержание концентрации калия в плазме в нормальных пределах 3,8 4,8 ммоль / л зависит как от внешнего, так и внутреннего контуров регуляции и является общепринятым показателем, характеризующим калиевый гомеостаз. 1. Поступление калия В настоящее время нет строгих доказательств существования в орга низме гомеостатической регуляции приема калия в ответ на его изме нение в плазме и тканевых калиевых депо. Большинство данных указывает на отсутствие специфического калиевого аппетита при его дефиците в организме. 2. Всасывание калия в пищеварительном тракте В желудочно-кишечном тракте всасывается около 85 % от принятого с пищей калия. Установлено, что в тонком отделе кишечника концентрация калия низкая (в пределах 6 15 ммоль / л), и он всасывается вместе с жидкостью. Мало сведений о переносчиках калия в тонкой кишке. Показано наличие электронейтрального оуабаин-независимого механизма абсорбции калия в этом сегменте, что может быть связано с Н + / К + обменом на люми нальной поверхности [4]. Более подробно изучены механизмы транспорта калия в толстом кишечнике, который рассматривается как основной сегмент пищева рительной системы, ответственный за регуляцию экскреции катиона с калом. В связи с тем, что большая часть жидкости абсорбируется в вышележащих отделах кишечной трубки, концентрация калия в дистальном отделе толстого

12 12 кишечника достигает 90 ммоль / л. Транспорт калия в толстом кишечнике состоит из двух противоположных потоков секреции и абсорбции [4 6] (рис.1). Секреция калия обеспечивается Na +, К + -АТФазой и Na +, К +, 2С1 -транспортером, локализованными на базолатеральной мембране клеток дистального отдела толстого кишечника. Эти белки стимулируют перенос калия через базолатеральную мембрану в клетки, что приводит к повышению внутриклеточной концентрации катиона и последующей его секреции через калиевые каналы в апикальной мембране. Абсорбция калия осуществляется с помощью калийзависимых АТФаз, локализованных в апикальной мембране клеток дистального отдела толстого кишечника. В настоящее время имеется ряд доказательств существования по крайней мере двух калий-абсорбирующих насосов оуабаин-нечувствительной Н +, К + -АТФазы и оуабаин-чувствительной Na + -независимой К + -АТФазы [1, 5, 6]. До настоящего времени неизвестно, осуществляются ли эти противоположные процессы в разных клетках и сегментах кишечника, или в одних и тех же структурах. Кроме трансцеллюлярного транспорта К +, перенос катиона может осуществляться также по межклеточному пути. Однако полагают, что межклеточные контакты в эпителии толстого кишечника достаточно плотные и анион-селективные, поэтому в нормальных условиях вкладом этого транспорта в конечный результат экскрецию катиона можно пренебречь. Соотношение активности базолатеральных и апикально расположенных насосов обеспечивает результирующий вектор транспорта калия, направленный на секрецию. Известно, что различные физиологические и фармакологические факторы могут влиять на секрецию и абсорбцию калия в толстом ки шечнике. Секреция калия увеличивается при активации Na +, К + -АТФазы, Na +, К +, 2С1 -транспортера и / или повышении апикальной К + -проводимости. Этот эффект индуцируется альдостероном, глюкокортикоидами, норадреналином, простагландинами, высокой калиевой диетой [1, 3].

13 К + Na + Na + А Б 13 Ba + К + Cl - К + К + H + К + Рис.1. Модель транспорта К+ в дистальном отделе толстого кишечника крыс А апикальная мембрана; Б базолатеральная мембрана В последние годы было установлено, что описанные выше факторы стимулируют в клетках дистального отдела толстого кишечника и собирательных трубках нефрона экспрессию нового трансмембранного белка, названного CIIIF (Corticosteroid Hormone Induce Factor, или Channel Induce Factor) [3]. Сначала была высказана мысль, что этот белок выполняет роль калиевых каналов, однако впо следствии было показано, что он локализован в базолатеральной мем бране и связан с Na +, К + -АТФазой. В настоящее время имеется достаточное количество доказательств, что CIIIF повышает активность насоса, и таким образом стимулирует секрецию катиона в кишке и почках (табл.1). Естественно, что факторы, ингибирующие активность базолатеральных насосов и апикальных каналов, снижают секрецию калия. К таким факторам относятся: индометацин, оуабаин, низкая калиевая диета, Ва + -ионы в просвете кишечника. Менее известно о регуляции абсорбции калия. Показано, что соматостатин-гормои, обнаруженный в желудочно-кишечном тракте, и нейропептид Y повышают всасывание воды и электролитов и подавляют секреторные процессы [6]. Этот эффект ассоции-

14 14 руется с ингибированием циклической АМФ-зависимого и Са + - зависимого К + -транспорта. Норадреналин и β-адренергические агонисты стимулируют апи кальную H +,К + -АТФазу, что повышает абсорбцию катиона [1]. Таблица 1 Активность Na +, К + -АТФазы в клетках дистального отдела толстого кишечника (ДОТК) и собирательных трубок нефрона (СТН) нормальных и CHlF-knockout мышей (собственные данные) Тип клетки ДОТК СТН Показатели Захват 86 Rb Активность АТФазы Захват 86 Rb Активность АТФазы нмоль / мин. мг белка мкмоль Pi / мин. мг белка нмоль / мин. мг белка мкмоль Pi / мин. мг белка Единица измерения Нормальные мыши 126,1±12,8 0,17±0,04 89,2±8,7 0,33±0,07 CHIF-knock- out 71,4±7,3 0,11±0,02 28,5±2,9 0,19±0,04 P <0,01 <0,05 <0,001 <0,05 3. Экскреция калия Около % от принятого калия экскретируется с мочой, а остав шиеся % выводятся с калом. Изменения количества поступившего в организм К + сопровождается адекватными перестройками экскреции катиона почками и желудочно-кишечным трактом, которые наступают в течение нескольких часов. Почкам принадлежит ключевая роль в поддержании гомеостаза калия при изменении его содержания в орга низме. Однако при нарушениях почечных функций (почечная недо статочность со снижением скорости клубочковой фильтрации, канальцевый дефект секреции катиона и др.) происходит адаптивное увеличение экскреции катиона через желудочно-кишечный тракт [7]. Таким образом, между двумя основными калий-экскреторными органами имеется тесная взаимосвязь, обеспечивающая баланс катиона в орга низме.

15 15 Почечная экскреция калия имеет циркадный ритм у человека, обезьян, крыс и других экспериментальных животных [7]. В нормальных условиях околосуточный ритм экскреции катиона почками характеризуется акрофазой в период активности организма (у людей в дневное время суток, у крыс в ночное время) и не зависит от приема пищи и воды, гормональной активности, концентрации калия в плазме, экскреции других ионов. В настоящее время приняты две гипотезы, объясняющие гомеостатическую регуляцию почечной экскреции калия [7]. Согласно одной из них, гомеостаз калия поддерживается периферическими механизмами без участия центральной нервной системы: поступление калия в орга низм вызывает повышение концентрации катиона в плазме, что, в свою очередь, приводит к прямому увеличению фильтрационной загрузки нефрона, и стимуляции инкреции альдостерона гормона, повышающего секрецию калия в почках и толстой кишке. Ограничение калия в рационе, наоборот, приводит к уменьшению калийуреза. Вторая гипотеза постулирует, что в основе гомеостатической регуляции калия лежит рефлекторный механизм, афферентное звено которого представлено специфическими калийчувствительными рецепторами печени и / или портальной системы. В нормальных условиях при всасывании калия из пищеварительного тракта происходит повышение его концентрации только в системе воротной вены и печени. Это вызывает раздражение соответствующих рецепторов, информация от которых по блуждающим нервам поступает в центральную нервную систему, вероятнее всего, гипоталамус, где предполагается наличие «калийрегулирующего центра». Эфферентный путь рефлекса представлен рядом гормональных фак торов (АДГ, АКТГ, альдостероном и, по видимому, другими, еще не уста новленными), которые увеличивают экскрецию катиона почками [2]. В упрощенном виде механизм почечной экскреции калия может быть представлен как результат трех процессов: клубочковой фильтрации, канальцевой реабсорбции и канальцевой секреции. Ионы калия сво бодно проходят через капиллярную

16 16 мембрану и гломерулярный фильтр в полость клубочка. Несмотря на возможные вариации СКФ, которые вызывают пропорциональные изменения фильтрационного заряда К +, уровень его экскреции мало зависит от этого и определяется главным образом канальцевыми процессами. Однако, если СКФ очень низкая (менее 25 % от нормы), выведение катиона с мочой тоже снижается. Примерно % профильтровавшегося калия реабсорбируется в проксимальных извитых канальцах [6]. Большая часть проксимальной реабсорбции осуществляется путем диффузии (около 60 %), на долю активного транспорта и в виде солевого раствора (solvent drag effect) приходится примерно по 20 %. В этом отделе нефрона транспорт калия существенно зависит от переноса воды и натрия. В петле Генле транспорт калия состоит из двух взаимно противоположиых потоков: активной реабсорбции в восходящем колене с помощью Na +, К +, 2С1 -котранспортера, и пассивного поступления в просвет нисходящего колена. Этот феномен рециркуляции калия сни жает поступление калия в дистальный сегмент нефрона до % от фильтрационной загрузки. Дистальный извитой каналец и особенно собирательная трубка являются главными участками регуляции почечной экскреции катиона. В собирательной трубке два вида клеток вовлечены в этот процесс. Главные клетки, которые особенно многочисленны в начальной части этого сегмента, способны секретировать калий. Обкладочные клетки располагаются между главными в корковой и наружной мозговой части собирательных трубок. Они участвуют в реабсорбции катиона в обмен на ионы водорода или бикарбоната. Транспорт калия в этом сегменте нефрона осуществляется аналогичными механизмами, что и в дистальном отделе толстого кишечника. Различные факторы, действующие со стороны люминальной или базолатеральной поверхности, могут влиять на транспорт К + в этом сегменте нефрона [1, 7]. Высокая скорость тока жидкости и ее состав, а именно, концентрация натрия и анионов, особенно плохо реабсорбируемых, таких как SO 4 -, НPO 4 -, стиму-

17 17 лируют секрецию калия. Анало гичный эффект вызывается повышением концентрации К + в плазме, альдостероном, вазопрессином, гиперволемией, метаболическим алка лозом, диуретиками (амилоридом). Реабсорбция К + в дистальном нефроне может также регулироваться. Дефицит калия или метаболический ацидоз вызывают ультраструк турные перестройки в обкладочных клетках: значительное увеличение поверхности апикальной мембраны, повышение количества везикул в ней и уменьшение их в цитоплазме. Эти морфологические данные являются косвенным подтверждением увеличения количества апикально расположенных К + - транспортеров, быстрее всего, оуабаин-нечувcтвительной Н +, К + -АТФазы и оуабаин-чувствительной К + -АТФазы. 4. Депонирование и распределение калия в организме Примерно 98 % общего количества организменного калия располо жено во внутриклеточном пространстве, из которого почти 80 % нахо дится в мышцах в концентрации 150 ммоль / л. Остальная часть внутри клеточного калия содержится, в основном, в печени, костях и эритро цитах. Около 2 % всего организменного калия находится во внеклеточной жидкости в концентрации 3,5 5,0 ммоль / л. Основной биологический механизм, ответственный за неравномер ное распределение калия между внутри- и внеклеточным секторами, определяется соотношением между транспортом калия внутрь клеток (обеспечиваемым К + -АТФазами и Na +, K +, 2С1 -транспортерами) и пас сивным выходом катиона через калиевые каналы [8]. Регуляция внутреннего баланса калия определяется способностью тканевых депо абсорбировать К + из внеклеточного пространства или отдавать его при понижении концентрации катиона в плазме. Депони рование или отдача калия клетками зависит от трансмембранного градиента К +, активности К + - транспортеров, проводимости К + -каналов, внутри- и внеклеточного рн. Метаболический алкалоз, альдостерон, катехоламины (β-агонисты), инсулин стимулируют депонирование калия в тканях, тогда как α-агонисты, допамин, ацидоз и пониженная

18 18 концентрация калия в плазме усиливают выход К + из клеток. В настоящее время считается общепризнанным, что активность ионных транспортеров регулируется гормонами через каскад реакций фосфорилирование / дефосфорилирование. Таким образом, совокупность изложенных механизмов обеспечивает в нормальных условиях калиевый гомеостаз. Литература 1. Aizman R. I., Aizman O. R., Celsi G. p-adrenergic stimulation of K + transport in rat distal colon // Acta Physiol. Scand. 2. Aizman R. I., Finkinshtein Ya. D., Terner A. Ya. Reflex mechanism of potassium homeostasis regulation // Nefrologia (Spain) V Р Aizman R. I., Garty H., Lindzen M., Fuzesi M., Goldshleger R., Asher C., Karlish S. A specific functional interaction between CHIF and Na,K-ATPase: role of FXYD proteins in the cellular regulation of the pump. Ann. N. Y. Acad. Sci., 2003, 986: p Binder H. J., Sandle G. I. Electrolyte absorption and secretion in the mammalian colon //Johnson L. R., editor. Physiology of the gastrointestinal tract. N. Y.: Raven Press, P Del Castillo J. R., Rajendran V. M., Binder H. J. Apical membrane localization of ouabain-sensitive K + -activated ATPase activities in rat distal colon // Am. J. Physiol G.1005 G Giebisch G., Wang W. Potassium transport: from clearance to channels and pumps // Kidney Int P Rabinowitz L., Aizman R. I. The central nervous system in potassium homeostasis. Frontiers in Neuroendocrinology. N. Y.: Raven Press, P Wright F. S., Giebisch G. Regulation of potassium excretion // Seldin D. W., Giebisch G., editors. The kidney. Physiology and pathophysiology. N. Y.: Raven Press, P

19 УДК : ПРОФИЛАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ НАНОКОМПОЗИТНЫХ ЭНТЕРОСОРБЕНТОВ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХНЕФРОПАТИЯХ, ВЫЗВАННЫХ СОЛЯМИ ЦВЕТНЫХ МЕТАЛЛОВ Албегова Ж. К., Молдован Т. В., Беликова З. Ф., Албегова Н. Р., Гаглоева Э. М. Северо-Осетинская государственная медицинская академия, Россия, г.владикавказ На крысах линии Вистар изучалось влияние энтеросорбентов на ионо-водовыделительную функцию почек на фоне интоксикации солями цветных металлов. Показано, что введение солей цветных металлов (Ni, Mo, W) вызывает токсическую нефропатию. Использование нанокомпозитных сорбента Ирлит и НУМС профилактирует эти изменения, что выражается в уменьшении полиурии и экскреции катионов. THE PREVENTIVE USE OF ENTEROSORBETNS AT EXPERIMENTAL NEPHROPATHY CAUSED BY NON-FERROUS METALS SAULTS Albegova Zh. K., Moldovan T. V., Belikova Z. F., Albegova N. R., Gagloeva I. M. North Ossetian State Medical Academy, Russian Federation, Vladikavkaz Тhе preventive influence of enterosorbents on iono-water secretory function of kidneys against intoxication by salts of non-ferrous metals was studied on Vistar rats. It is shown that introduction of salts of non-ferrous metals (Ni, Mo, W) causes toxic nephropathy. Use of Irlit sorbent and the NCMS (nanocomposit carbon modified sorbent) renders a preventive effect of these changes which is expressed in poliuriya and excretion of cations reduction. Здоровье человека во многом определяется состоянием окружающей среды. Ее вклад в формирование и сохранение

20 20 здоровья населения составляет около %. Экопатогенные факторы, особенно в сочетании с другими причинными агентами, увеличивают риск развития хронических болезней (Реутова Н. В. 2007; Рохас Риоха И. Е. 2009). Эффекты ксенобиотиков определяются, в первую очередь, классом токсичности вещества, длительностью его действия. Почки как главный экскреторный орган являются мишенью многих ксенобиотиков. Высокий уровень кровоснабжения и большая протяженность тубулярного аппарата обусловливают длительность контакта токсических веществ с почечным эндотелием, эпителием и клетками интерстиция. Целью настоящего исследования было изучение эффектов профилактического использования нанокомпозитных сорбентов на ионо-водовыделительную функцию почек у крыс при хронической интоксикации солями металлов. Проблема загрязнения окружающей среды тяжелыми, цветными металлами, их токсическое действие на физиологические системы, отсутствие на современном этапе развития медицины эффективных и вместе с тем простых и доступных способов профилактики и ускоренного выведения ксенобиотиков из организма сделала насущной необходимостью их создание и разработку. Известные детоксиканты, способные выводить тяжелые металлы из организма, могут вызывать различные побочные эффекты, выводят из организма микроэлементы и жизненно важные ионы, что затрудняет их длительное применение. Наше внимание привлекли цеолито-подобные глины, месторождения которых описаны В. Б. Цогоевым, назвавшим эти глины Ирлитами. Считается абсолютно доказанным, что при попадании в пищеварительный тракт они адсорбируют тяжелые металлы, свободные радикалы, продукты распада и токсины внутренней среды (Brin V. B., Albegova N. R., Albegova Zh. K. 2002; Цогоев В. Б., Качмазов К. Б., Бекузарова С. А. 1998; Албегова Н. Р. и др. 2002; Кокаев Р. И. 2004) Большие запасы и доступность Ирлитов, их ионообменные, сорбционные и молекулярно-ситовые свойства позволяют обо-

21 21 сновать целесообразность их изучение при использовании в качестве энтеросорбентов в условиях экспериментальных моделей интоксикации, создаваемы введением в организм животных соединений металлов. Другим сорбентом выбран разработанный в Институте Неорганической химии им. А. В. Николаева СО РАН новый углеродный нанокомпозитный модифицированный сорбент, который сейчас проходит испытания. Материалы и методы Исследования проведены на крысах-самцах линии Вистар массой граммов. Эксперименты выполнены в трех сериях с введением хлорида никеля (25 мг / кг), молибдата аммония (50 мг / кг), паравольфрамата аммония (50 мг / кг). В каждой серии опыты проведены в 6 группах животных: 1 группа интактные животные; 2 группа животные с внутрижелудочным введением ксенобиотика в течение месяца; 3 группа животные с внутрижелудочным введением ксенобиотика в течение 2х месяцев; 4 группа животные с внутрижелудочным введением ксенобиотика в течение 1 месяца и интрагастральным введением Ирлита в виде 6 % взеси количестве 2,5 массы тела через день; 5 группа животные с внутрижелудочным введением ксенобиотика в течение 2-х месяцев и интрагастральным введением Ирлита 6 % взвеси в количестве 2,5 % массы тела через день; 6 группа животные с внутрижелудочным введении ксенобиотика в течение месяца и интрагастральным введением НУМС в виде 6 % взвеси в количестве 2,5 массы тела через день. Гранулометрический анализ применяемых сорбентов на лазерном дифракционном анализаторе «Analysette 22 Nano Tec» с использованием блока мокрого диспергирования в суспензиях показал, что размеры 80,0 % частиц составляют менее 20 нм, т.е. относятся к нано частицам и способны in vitro более чем на 90,0 % извлекать металлы из растворов соответствующих концентрациям металла, создаваемым в эксперименте. Животные находились на стандартном пищевом рационе,

22 22 питьевой режим свободный. У контрольных и опытных животных в условиях 6 часового спонтанного диуреза исследовали водовыделительную функцию почек, экскрецию элитролитов с мочой и содержание их в плазме крови через каждые две недели эксперимента. Содержание натрия, калия в плазме крови и моче определяли методом пламенной фотометрии. Концентрацию креатинина в моче и плазме определяли спектрофотометрически с помощью наборов «Креатнин» ООО «Агат-Мед» (г.москва, Россия). Результаты всех серий опытов обработаны статистически с применением t критерия студента. Различия считались достоверными при р<0,05. Корреляционный анализ проводился с расчетом коэффициента корреляции Пирсона. При рассмотрении значимости коэффициентов корреляции пользовались общепринятыми критериями: r<0,3 слабая связь, от 0,31 до 0,69 средняя и от 0,7 до 0,99 сильная степень связи. Результат исследования Особенностью тяжелых металлов является их способность накапливаться в различных органах, вызывая их поражение. Учитывая, что мы изучаем влияние всех исследуемых солей металлов на функции почек, поэтому считали целесообразным определить содержание этих металлов в них. Проведенные исследования показали, что содержание никеля в почках у интактных крыс было 0,118 ± 0,02 мкг г сухого веса. Введение никеля увеличило долю никеля в ткани почек через 2 месяца в 26 раз, молибдена в 31 раз по сравнению с фоном (0,24 ± 0,218 мкг г сухого веса). Совместное введение сорбентов и ксенобиотиков снижало содержание никеля в почке на 39,1 %, через один месяц и на 34,7 % при месячном введении НЦМС. При совместном введении молибдата аммония и глины Ирлита в течение одного месяца содержание металл снизилось в 2 раза, а в конце второго месяца интоксикации на 42,6 %. Введение НУМС и молибдата аммония в течение месяца снижало уровень металла в ткани почек на 42,5 %

23 23 Таким образом, профилактическое использование сорбентов уменьшало накопление металлов в ткани почек, ограничивая всасывание из ЖКТ и способствуя выведению из организма, что не могло не влиять на их функциональное состояние. Рис.1. Влияние сорбентов НУМС О 3 БМЦ и Ирлита-1 на основные процессы мочеобразования у крыс в условиях спонтанного диуреза при хронической интоксикации хлоридом никеля Изучение функциональной способности почек показало, что у животных с хронической никелевой интоксикацией происходило достоверное увеличение объема 6 часового спонтанного диуреза во все сроки экспериментов, при этом скорость клубочковой фильтрации (СКФ) имела тенденцию к снижению через 2 недели и месяц эксперимента. Прирост диуреза был обусловлен снижением канальцевой реабсорбции (КР), а к концу второго месяца и ростом СКФ (рис.1). Изучение ионовыделительной функции почек выявило увеличение экскреции натрия через 1 2 месяца эксперимента. Рост экскреции натрия был обусловлен снижением канальцевой реабсорбции катиона (р<0,05 и р<0,01). Экскреция кальция у животных на фоне интоксикации хлоридом никеля увеличивалась уже через 2 недели и была достоверно выше фона через 1 месяц (р<0,001). Причиной усиления кальцийуреза было достоверное снижение канальцевой реаб-

24 24 сорбции катиона (р<0,001). Фильтрационный заряд из за гипокальциемии, продолжал уменьшаться. Через 2 месяца эксперимента отмечено более существенное снижение канальцевой реабсорбции кальция на фоне менее выраженного снижения фильтрационного заряда, что способствовало кальцийурезу. Экскреция калия была выше фоновых значений через 1 и 2 месяца (р<0,05 и р<0,01). Рост экскреции калия в условиях гиперкалиемии был обусловлен увеличением фильтрационного заряда катиона. У крыс при хронической молибденовой интоксикации происходит увеличение 6 часового спонтанного диуреза, несмотря не некоторое снижение скорости клубочковой фильтрации через 1 и 2 месяца эксперимента. Полиурия была обусловлена уменьшением канальцевой реабсорбции воды (р<0,01, р<0,001, р<0,001) (рис.1). Изучение ионовыделительной функции почек при экспериментальном молибденозе выявило через 1 месяц интоксикации увеличение экскреции натрия вследствие уменьшения канальцевой реабсорбции катиона (р<0,05). К концу эксперимента выведение натрия с мочой продолжало увеличиваться. Причиной натриуреза было снижение канальцевой реабсорбции (р<0,001), при этом одновременно продолжал снижаться фильтрационный заряд. Экскреция калия повышалась во все сроки эксперимента вследствие увеличения фильтрационного заряда катиона (р<0,02). Экскреция кальция также увеличивалась во все сроки эксперимента. Увеличение выведения кальция было обусловлено уменьшением его канальцевой реабсорбции. Наши исследования показали, что при длительном введении паравольфрамата аммония у экспериментальных животных показатели основных процессов мочеобразования достоверно не менялись относительно интактного контроля на протяжении всего эксперимента. Выявлялась лишь тенденция к увеличению диуреза вследствие уменьшения относительной канальцевой реабсорбции воды. Экскреция электролитов, основные показатели почечной

25 25 обработки натрия, калия и кальция достоверно не менялись через 2 недели и 1 месяц эксперимента. Через 2 месяца наблюдалось увеличение экскреции натрия вследствие уменьшения относительной канальцевой реабсорбции катиона. Использование энтеросорбентов на фоне никелевой интоксикации способствовало меньшему приросту диуреза, что было следствием менее выраженного снижения канальцевой реабсорбции воды (рис.1). Проводился корреляционный анализ степени зависимости изменений показателей основных процессов мочеобразования при хронической интоксикации от влияния применяемых сорбентов с расчетом коэффициента корреляции Пирсона (r). Выявлялась отрицательная линейная корреляционная связь между уровнем диуреза и канальцевой реабсорбцией воды у крыс с применением сорбентов Ирлита и НУМС на фоне никелевой интоксикации (r= 0,886 и r= 0,774); на фоне молибденовой интоксикации (r= 0,752 и r= 0,815). Рис. 2. Зависимость изменения диуреза от уровня канальцевой реабсорбции воды на фоне профилактического введения нанопористого сорбента Ирлит при никелевой интоксикации Построенный график (рис.2) это доказывает линией тренда и коэффициентом детерминации. Изменения (восстановление) диуреза при введении сорбента Ирлит-1 у крыс при хронической никелевой интоксикации (рис.1.) на 78 % определялись

26 26 восстановлением канальцевой реабсорбции воды (коэффициент детерминации = 0,785). На фоне профилактического использования сорбентов происходило восстановление измененных под влиянием хлорида никеля фильтрационного заряда и канальцевой реабсорбции натрия и кальция через 1 и 2 месяца эксперимента. Применение сорбента Ирлит препятствовало росту экскреции калия через 1 месяц опыта. Аналогичные результаты были получены и при профилактическом использовании энтеросорбентов при хронической молибденовой интоксикации. На фоне введения глины Ирлит полиурия была достоверно ниже, чем у животных с интоксикацией. Экскреция натрия достоверно не отличалась от фона во все сроки эксперимента. Ирлит-1 являлся достаточно эффетивным средством коррекции гиперкалиемии при хроническом воздействии нефротоксиканта, а также способствовал профилактике изменений экскреции кальция, восстанавливая канальцевую реабсорбцию катиона и уменьшая фильтрационную загрузку нефрон. Энторосорбция профилактировала изменения экскреции натрия через 2 месяца эксперимента. Таким образом, изучение влияния энтеросорбентов на ионо-водовыделительную функцию почек на фоне хронической интоксикации солями цветных металлов выявило способность сорбентов снижать степень нарушения процессов мочеобразования в условиях спонтанного диуреза, показало положительное влияние глины Ирлит и НУМС на измененную почечную обработку электролитов. При этом профилактические эффекты у глины Ирлит более выражены. Литература 1. Албегова Н. Р., Брин В. Б., Албегова Ж. К. Влияние глины ирлит-1 на почечные эффекты хлорида кобальта, его распределение в организме и экскрецию с мочой // Вестник МАНЭБ. Владикавказ, Том 7, 2 (50). С Кокаев Р. И. Влияние природного цеолита ирлита-1 на почечные эффекты хронической интоксикации сульфатом кадмия

27 27 // Тезисы докладов третьей научной конференции молодых ученых СОГМА. Владикавказ, С Реутова Н. В. Анализ заболеваемости населения в районе расположения вольфрамомолибденового комбината // Гигиена и санитария С Рохас Риоха И. Е. Влияние загрязнения окружающей среды никелем на живые организмы // Вестник Воронежского государственного технического университета Т С. 5. Цогоев В. Б., Качмазов К. Б., Бекузарова С. А. Ирлиты природная кормовая добавка животным и птице для увеличения продуктивности и улучшения экологической обстановки // Вестник МАНЭБ С Brin V. B., Albegova N. R., Albegova Zh. K. Effects of different cobalt chloride doses and introduction pathways on renal excretion in Wistar line rats. Influence of Irlit-1 Zeolite entero-sorbent // Abstracts of Sixth International Nickel Conference. Murmansk, P.79. УДК: : ВОЗМОЖНОСТИ КОРРЕКЦИИ НАРУШЕНИЯ ФУНКЦИИ ПОЧЕК У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКОЙ СЕРДЕЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТЬЮ В СОЧЕТАНИИ С САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ 2 ТИПА ИНГИБИТОРАМИ АНГИОТЕНЗИНПРЕВРАЩАЮЩЕГО ФЕРМЕНТА Астахова З. Т., Газзаева С. А., Тогузова З. А. Северо-Осетинская государственная медицинская академия, г. Владикавказ Дисфункция почек у больных с хронической сердечной недостаточностью является предиктором неблагоприятного клинического исхода. В настоящее время действие основных факторов прогрессирования почечной дисфункции, к которым большинство авторов относят артериальную гипертензию и протеинурию, напрямую связывают с повышением активности системной и локальной (почечной) ренин-ангиотензин-альдостероновой системы (РААС). Кроме того, увеличение количества больных с сахар-

28 28 ным диабетом увеличивает вероятность развития нефропатии. Терапия, эффективно улучшающая функцию почек, способна замедлить прогрессирование хронической сердечной недостаточности и продлить жизнь пациентов. Фармакологическая ингибиция РААС с применением ингибитора ангиотензин-превращающего фермента (иапф) является патогенетически обусловленным механизмом нефропротекции. Своевременное их назначение способствует сохранению функции почек у больных хронической сердечной недостаточностью. CORRECTION OF THE POSSIBILITY OF VIOLATIONS OF THE KIDNEY PATIENTS WITH CHRONIC HEART FAILURE IN COMBINATION WITH DIABETES TYPE 2 ACE INHIBITORS Astahova Z. T., Gazzaeva S. A., Toguzova Z. A. Renal dysfunction in patients with chronic heart failure is a predictor of unfavorable clinical outcome. Nowadays the action of the main factors of progression of renal dysfunction, which are arterial hypertension and proteinuria, is directly connected with rising activity of systemic and local (renal) rennin-angiotensine-aldosterone system (RAAS). Besides, the increase in the number of patients with diabetes mellitus increases the risk of nephropathy. Therapy, which improves effectively the renal function, decelerate the progression of chronic heart failure and prolong patients lives. Pharmacological inhibition of RAAS with the use of angiotensine converting enzyme (ACE) inhibitors is caused by pathogenetic mechanism of nephroprotection. The well-timed prescription of ACE inhibitors promotes the preservation of renal function in patients with chronic heart failure. Введение. В последние десятилетия хроническая сердечная недостаточность (ХСН) стала важнейшей эпидемиологической и социальной проблемой как в России, так и во всем мире. Главными причинами развития ХСН являются артериальная гипертензия и или ишемическая болезнь сердца, а также сахарный диабет 2 типа, который вместе с другими факторами определяет все возрастающее количество пациентов с ХСН (1,2). На прогноз и исход ХСН большое влияние оказывает функция почек (3,4).

29 29 Пациенты с нарушением функции почек это, в основном, пожилые лица с сахарным диабетом, артериальной гипертензией и длительно текущей хронической сердечной недостаточностью (ХСН). Значимость почечной дисфункции как предиктора неблагоприятного прогноза так же велика, как и других известных факторов, включая значение фракции выброса левого желудочка и функциональный класс по NYHA. Хотя нарушение функции почек в большей степени предсказывает общую смертность, данный фактор играет важную роль и в смерти от прогрессирующей сердечной недостаточности (4). Считается, что при ХСН функция почек страдает из за падения сердечного выброса. При этом многочисленными исследователями выделяются следующие основные патогенетические факторы, ведущие к поражению почек: 1. Активация системы ренин-ангиотензин-альдостерон (РААС). 2. Дисбаланс между системой NO и активными формами кислорода. 3. Воспаление. 4. Гиперактивация симпатической нервной системы. Следует отметить, что все они являются тесно взаимосвязанными и приводят к параллельным изменениям в сердце и сосудах почек, что в конечном итоге приводит к формированию кардиоренального синдрома (5) В современных клинических рекомендациях предполагается использовать основные характеристики, отражающие функциональное состояние почек: определения креатинина сыворотки, уровень экскреции белка с мочой и скорость клубочковой фильтрации (СКФ), которые являются независимым фактором риска развития сердечно-сосудистых заболеваний (6). С этой точки зрения понятно, что своевременная нефропротекция может способствовать торможению дисфункции почек с предотвращением развития в последующем хронической почечной недостаточности. Ингибиторы АПФ в настоящее время являются одним из наиболее часто используемых классов препаратов в кардиологиче-

30 30 ской практике. Доказана их высокая антигипертензивная активность, необходимость применения у больных с ХСН, а также у пациентов с сахарным диабетом (СД) и нефропатией различной этиологии. В руководствах к препаратам группы иапф производители указывают на то, что эти лекарственные средства должны применяться с осторожностью у пациентов со сниженной функцией почек. К сожалению, нередко это служит поводом для полного отказа от этой группы препаратов у больных с дисфункцией почек, что согласно данным современных исследований абсолютно неверно и может привести к ускорению темпов прогрессирования ХПН и ухудшению прогноза больных (6). ИАПФ, необходимый для лечения пациентов с кардиоренальным синдромом, должен обладать высоким профилем эффективности и безопасности. К числу таких препаратов заслуженно относится фозиноприл. Одно из положительных свойств фозиноприла его высокая липофильность и двойной путь выведения (7). В отличие от каптоприла, эналаприла, лизиноприла и периндоприла, которые выводятся из организма главным образом почками, у фозиноприлата два основных пути элиминации почечная экскреция и выведение с желчью и калом. При снижении функции почек увеличивается выведение фозиноприлата с желчью. (8) Цель исследования. Изучение нефро- и кардиопротективных свойств иапф фозиноприла у больных с ХСН II ФК в сочетании с СД 2 типа. Материалы и методы. В исследование было включено 37 пациентов с установленным диагнозом ХСН II ФК в сочетании с сахарным диабетом 2 типа. Возраст больных колебался от 62 до 73 лет. Мужчин было 14, а женщин 23 больных. Длительность хронической сердечной недостаточности в среднем составила 7 лет. Сахарным диабетом больные страдали в течение 5,5 лет. Критериями исключения пациентов явились наличие мочекаменной болезни, болезни почек, декомпенсированный сахарный диабет. До момента рандомизации всем больным проводились клинические и лабораторно-инструментальные исследования, оценивались биохимические показатели крови, проводился расчет скорости клубочковой фильтрации по Кокроф-

31 31 ту-гаулту и МDRD, определялся креатинин сыворотки и уровень микроальбуминурии, выполнялась эхокардиография. Все пациенты в качестве базисной терапии получали ингибиторы АПФ. После проведения стандартного обследования пациенты были разделены на две группы. Первая группа больных в количестве 18 человек принимала иапф фозиноприл в дозе мг в сутки. Вторая группа пациентов (16 человек) эналаприл в дозе 5 20 мг в сутки. Контрольное обследование пациентов проводилось через 5 месяцев наблюдения и лечения. Статистическую обработку данных проводили с помощью программ STATISTICA 6,0. Рассчитывали средние величины (М), их стандартные ошибки (m), стандартные отклонения (SD) и доверительный 95 % интервал. Достоверность различий оценивали по t-критерию Стьюдента. Результаты и обсуждение. На фоне лечения через 5 месяцев у большинства больных (89%) были достигнуты целевые уровни артериального давления мм.рт.ст. Строгий контроль АД, по данным многочисленных исследований, является одним из основных терапевтических подходов для замедления прогрессирования хронических заболеваний почек и уменьшения смертности особенно у пациентов с сахарным диабетом. Проведенный анализ изменений данных эхокардиограммы выявил достоверную положительную динамику основных параметров, отражающих ремоделирование левого желудочка. Так, в первой группе пациентов, принимавших фозиноприл отметилось снижение толщины задней стенки левого желудочка (ТЗСтЛЖ) с 1,26±0,5 до 1,12±0,11см (р=0,01) и толщины межжелудочковой перегородки (ТМЖП) с 1,25±0,08 до 1,11±0,09 см (р=0,01). Во второй группе пациентов также отмечалось улучшений данных показателей: ТЗСтЛЖ с 1,25 ±0,06 до 1,15±0,06см (р=0,01), ТМЖП с 1,22±0,06 до 1,16±0,05см (р=0,01). Основной показатель систолической функции миокарда фракция выброса в обеих группах имел стойкую достоверную тенденцию к увеличению. Остальные эхокардиографические показатели не имели достоверных различий.

32 32 Исходно у обследуемых больных не отмечалось повышение уровня креатинина сыворотки, в первой группе он составил в среднем 113мкмоль л, во второй 109 мкмоль л. Ни в одной из групп на фоне лечения не отмечалось статистически значимого увеличения уровня креатинина сыворотки, что свидетельствует о безопасности проводимой терапии. К тому же необходимо помнить о влиянии многих факторов на концентрацию креатинина сыворотки (потребление мяса, ожирение, развитая мускулатура и т.д.). Наиболее точным показателем, отражающим функциональное состояние почек, является СКФ. В последние годы все чаще применяют расчетные методы оценки СКФ, которые учитывают различные влияния на продукцию креатинина. Формулы Кокрофта-Гаулта и MDRD позволяют выявить незначительные нарушения функции почек даже при нормальной уровне креатинина. В первой группе больных, принимавших фозиноприл, уровень СКФ по Кокрофту-Галту до начала терапии составил 113,99± 21,46 мл мин, через 5 месяцев проводимой терапии динамика показателя не была столь существенной и составила 113,19±18,05 мл мин. Во второй группе больных, до терапии СКФ была 112,82 ±19,37мл мин, контрольное исследование выявило незначительное снижение показателя 109,17± 12,05 мл мин. СКФ, рассчитанная по формуле MDRD исходно в первой группе составила 80,76±14,39 мл / мин / 1,73 м 2, на фоне терапии отмечалась тенденция к её увеличению до 81,17±14,77мл / мин / 1,73м 2. У больных, принимавших эналаприл, до лечения СКФ по MDRD 86,48±12,08 мл / мин / 1,73м 2, через 5 месяцев терапии 81,87±11,95 мл / мин / 1,73м 2. Все обсуждаемые показатели статистически не различались. Многие авторы связывают положительное влияние иапф на функцию почек посредством уменьшения экскреции альбумина с мочой. Распространенность альбуминурии варьирует в зависимости от многих причин. У пациентов с сахарным диабетом частота альбуминурии выше, что является серьезным предиктором сердечно-сосудистой смертности (9). В нашем ис-

33 33 следовании исходный уровень микроальбуминурии в первой группе больных составил 53,07±14,16мг / л, во второй группе 554,89±12,37мг / л. Проводимая терапия выявила достоверное улучшение показателей, более выраженное у пациентов принимавших фозиноприл. В первой группе отмечалось снижения микроальбуминурии до 22,19±8,19 мг / л (р меньше 0,01), во второй до 32,29±8,71 мг / л (р меньше 0,01), Помимо динамики показателей креатинина, СКФ и микроальбу-минурии, у пациентов определялся уровень калия. Следует отметить, что прием иапф не приводил к увеличению темпов роста гиперкалиемии. Применение ИАПФ не приводило к изменениям углеводного профиля в виду метаболической нейтральности препаратов. Заключение. В настоящее время зарубежные и отечественные специалисты сходятся во мнении, что блокада РААС с применением иапф является одним из основных доступных механизмов нефропротекции (9,10). По современным представлениям основным фактором, определяющим ренопротективный эффект иапф, является не степень исходной почечной дисфункции, а длительность их применения. Однако, не все иапф обладают одинаковой эффективностью и безопасностью. В нашей работе применение фозиноприла оказало более выраженное действие на показатели функционального состояния почек в сравнении с эналаприлом. Прием фозиноприла у пациентов, относящихся к группе высокого риска позволяет предотвратить развитие кардиоренальнонго синдрома. Литература 1. Мареев В. Ю., Даниелян М. О., Беленков Ю. Н. От имени рабочей группы исследования ЭПОХА-О-ХСН. Сравнительная характеристика больных с ХСН в зависимости от величины ФВ по результатам Российского многоцентрового исследования ЭПОХА-О-ХСН. Журнал Сердечная недостаточность. 2006; Агеев Ф. Т., Даниелян М. О., Мареев В. Ю., Белен-

34 34 ков Ю. Н. Больные с хронической сердечной недостаточностью в российской амбулаторной практике: особенности контингента, диагностики и лечения. (по материалам исследования ЭПРХА-О-ХСН. Журнал Сердечная недостаточность 2004; Dries DL, Exner DV, Domanski MJ et al. The prognostic implications of renal insufficiency in asymptomatic and symptomatic patients with left ventricular systolic dysfunction. J Am Coll Cardiol 2000; 35: Mahan NG, Blackstone EH, Francis GS et al. The prognostic value of estimated creatinine clearance alongside functional capacity in patients with chronic congestive heart failure. J Am Coll Cardiol 2002; 40: Строжаков Г. И., Томилина Н. А. Гендлин Г. Е. и др. Применение иапф у больных с хроническими заболеваниями почек не можно, а нужно. Журнал Сердечная недостаточность 2006; Национальные клинические рекомендации М г. 7. Жиров И. В., Терещенко С. Н. Место ингибиторов АПФ в лечении кардиоренального синдрома. Эффективная фармакотерапия. 2011; Ding P. Y., Chu K. M., Hu O. Y. et al. Fosinopril: pharmacokinetics and pharmacodynamics in Chinese subjects // J. Clin. Pharmacology Vol. 39. P Е. В. Резник, Г. Е. Гендлин, Г. И. Сторожаков. Дисфункция почки у больных хронической сердечной недостаточностью: патогенез, диагностика, лечение. Журнал сердечная недостаточность. том6,36,2005, с Кутырина И. М. Применение ингибиторов ангиотензинпревращающего фермента при первичных поражениях почек и диабетической нефропатии. Consilium medicum.2002; 4 (7)

35 УДК: : ОСОБЕННОСТИ ТЕЧЕНИЯ ПОЧЕЧНЫХ ФУНКЦИЙ У СПИНАЛЬНЫХ ЖИВОТНЫХ Ахмедханова А. А., Билалова Р. Р., Нурмагомедова Х. А. Дагестанская государственная медицинская академия, Россия, г. Махачкала Резюме. В хроническом эксперименте у собак (n = 14) и крыс (n = 39) с полной поперечной перерезкой спинного мозга (ПППСМ) уровень Т7 8 выявлены фазные изменения парциальных почечных функций. Низкий уровень диуреза в первые минуты, часы и дни у спинальных животных был обусловлен гемодинамическими сдвигами в почках, о чем свидетельствует уменьшение (р < 0,001) скорости клубочковой фильтрации (СКФ) и эффективного почечного плазмотока (ЭПП). В более поздние сроки отмечена стадийная динамика нарушений функций почек: периоды олигурии сменялись полиурией или нормализацией уровня диуреза. В фазы олигурии мочеотделение оставалось низким за счет усиления (р < 0,001) канальцевой реабсорбции воды, но сохранялась способность почек выводить мочу с высоким содержанием в ней натрия и калия. Отсутствие реакции почек на водную нагрузку в фазы олигурии создавало условия для развития отеков. Высказано предположение, что у собак и крыс в динамике после ПППСМ происходит своеобразная перестройка компенсаторных механизмов функций почек. Полученные данные подчеркивают необходимость физиологического обоснования для коррекции деятельности почек и водно-солевого обмена (ВСО) в различные периоды после перерыва СМ у больных. PECULIARITIES OF RENAL FUNCTIONS IN SPINAL ANIMALS Akhmedhanova A. A., Bilalova R. R., Nurmagomedova H. A. Summary. In chronic experiment in dogs (n = 14) and rats (n = 39) with full gross cutting of spinal cord (FCCSC) level T7 8 different phase changes of partial renal functions are revealed. Low level of diure-

36 36 sis at the first minutes, hours and days in spinal animals was conditioned by hemodynamic movements in kidneys, it was caused by hemodynamic changes in kidneys that proved by decreasing (p < 0,001) glomerular filtration rate and effective renal plasma flow. At later period stage dynamics of renal functions disorders: periods of oliguria changed by poliuria and normal level of diuresis at the phase of oliguria detached urine was low because of intensification (p < 0,001) canaliculated water re absorption, but kept kidney capacity to urinate with high content of potassium and sodium. Lack of renal reaction on water burden at the phase of oliguria created conditions for development of edema. We supposed that in dogs and rats in dynamics after full cross cutting of FCCSC occurs definite reconstruction of compensatory mechanisms of renal functions. Receipt data underlines the necessity of physical basis in correction renal function and water-saline metabolism in different periods after full cutting of spinal cord in patients. Травматическое повреждение спинного мозга (СМ) является одним из актуальных вопросов современной медицины. Высокая частота позвоночно-спинальной травмы сочетается со сложностью патогенеза, возникающих осложнений и недостаточной эффективностью методов лечения. Практически полная инвалидность больного и огромные затраты на лечение и реабилитацию выводят эту проблему за рамки чисто медицинских аспектов [1]. Непременным компонентом повреждения СМ является развитие тяжелых нарушений функций тазовых органов, включая почки [2]. Неблагоприятный прогноз, рост травматизма ЦНС, в особенности СМ, и нередко с его полным перерывом [3] вызывает необходимость работать на экспериментальных моделях травмы СМ с его полной поперечной перерезкой. Высокая смертность, связанная с урологическими осложнениями, достигала ранее 78,3 %. Благодаря достижениям фармакологии и нейрохирургии в последние годы значительно увеличилась продолжительность жизни спинальных больных и изменилось качество их жизни [2,4]. Однако изменения в системе мочевыведения настолько серьезны, что делает проведение полноценной реабилитации спинальных больных почти невозможной. Тяжесть течения посттравматической болезни СМ усугубляется трофическими расстройствами во всех денервированных тканях и органах. Имеющиеся в литературе многочисленные

37 37 клинические наблюдения охватывают, в основном, ближайший посттравматический период. Поэтому многие стороны механизмов нарушения мочевыведения у спинальных больных остаются невыясненными. Целью исследования было изучение в хроническом эксперименте у животных парциальных почечных функций в различные сроки после ПППСМ на уровне Т7 8. Материал и методики. Под наблюдением находилось 14 собак и 39 крыс. Основные процессы мочеобразования изучали (собаки 11, крысы 23) после предварительной операции наложения фистул на желудок и мочевой пузырь. Суточный диурез определяли у крыс (n = 23) в специальных обменных клетках. СКФ определяли по клиренсу инулина, который считается эталонным маркером для исследования СКФ [5]. ЭПП и секреторную способность канальцев определяли с помощью ПАГ (Тм ПАГ). Процент канальцевой реабсорбции воды, клиренс электролитов (натрия и калия), фильтрационную фракцию (ФФ) рассчитывали по формулам. У 16 крыс изучали состояние свободнорадикального окисления липидов в гомогенатах почечной ткани до и в различные сроки после ПППСМ по содержанию малонового диальдегида (МДА) [6]. Все животные содержались на одинаковом водном и пищевом режимах, ежедневно взвешивались. Результаты исследования. Длительное наблюдение за спинальными крысами было затруднено: большинство из них погибало в ближайшие дней после ПППСМ. На фоне общего истощения у спинальных животных наблюдались отеки, особенно в области парализованных конечностей. Урологические осложнения ухудшали состояние спинальных крыс. Уже в день ПППСМ резко (до 1,5 2,0 мл) снизился уровень суточного диуреза; у двух была выявлена анурия при переполненном мочевом пузыре. Лишь на 5 6 е сутки объем суточного диуреза восстанавливался до исходной величины (7,0±1,2 мл), а на 8 9 е и, далее, на е сутки отмечалась полиурия. В динамике после спинальной травмы у крыс наблюдалась тенденция к общей дегидратации организма, когда на фоне периодически развива-

38 38 ющихся отеков на парализованных задних лапках, увеличивался вес тела животного. В эти периоды парциальные почечные функции не были подвержены регуляции (табл.1), ибо 3 %-ная водная нагрузка (вода, из расчета 3 мл на 100 г массы тела, вводилась крысам через желудочную фистулу) легко вызывала задержку воды в тканях. Подобные явления имели место и у спинальных собак, у которых степень выраженности отеков зависела от фазы посттравматического периода. Результаты наблюдения за клиническим состоянием спинальных собак показали разнообразную картину, но, в целом, она укладывалась в ту, которая отражена в литературе и в диссертациях от нашей кафедры. У собак в первые минуты после ПППСМ мы выявили резкое снижение СКФ и ЭПП (р < 0,02). Спустя 1 2 часа после травмы СКФ и ЭПП восстанавливались до исходного уровня. Реабсорбция воды в канальцах увеличилась до 97,2±0,4 %, что значительно снижало (р < 0,001) объем диуреза. На вторые сутки находили повторное снижение фильтрации и плазмотока. А в более поздние сроки после ПППСМ обнаружились фазные изменения показателей почечной гемодинамики, в большинстве случаев асинхронные с величинами диуреза; ФФ не изменялась. Фазы олигурии (табл. 2), сопровождавшиеся стойким увеличением канальцевой реабсорбции воды, сменялись в различные периоды после травмы полиурией, нормализацией диуреза, вновь олигурией и т.д. Следует отметить, что Тм ПАГ в фазы олигурии снижалась более, чем в 4 5 раз. Одновременно увеличивался приток крови к функционирующей ткани нефрона (с 8,6±0,4 до 30,9±2,7 мл / мин / м²), что можно рассматривать как своеобразную перестройку компенсаторных механизмов для восполнения сниженной секреторной способности канальцев. Если водно-солевая нагрузка (внутривенное капельное введение 0,85 % раствора хлорида натрия) у интактных животных была физиологически адекватна и давала высокий диурез, то у спинальных собак реакция почек на водную и водно-солевую нагрузки носила также фазный характер. При этом выявлялись

39 39 значительные изменения экскреции электролитов. Так, в фазы олигурии калий выводился более интенсивно, чем натрий. Однако содержание натрия в плазме крови оставалось в пределах нормы даже в фазы резкого снижения диуреза. Таблица 1 Диурез и основные процессы мочеобразования у интактных и спинальных крыс Изучаемый процесс До спинальной травмы в первые минут После спинальной травмы через 60 минут на вторые сутки Диурез в мл / мин / м² 1,61±0,26 n = 23-0,80±0,15 n = 23 p < 0,001 0,59±0,15 n = 23 p < 0,001 1,89±0,33 n = 10 p < 0,5 СКФ в мл / мин / м² 38,2±4,6-24,3±3,5 p < 0,01 32,0±6,0 p < 0,2 27,4±4,8 p < 0,1 Канальцевая реабсорбция воды в % 93,7±1,6-95,8±0,6 p < 0,2 97,9±0,4 p < 0,001 92,5±1,1 p < 0,5 ЭПП в мл / мин / м² 53,1±8,2 n = 17-28,9±7,3 n = 17 p < 0,02 39,5±14,0 n =17 p < 0,2 32,4±11,5 n =10 p < 0,1 Фазные сдвиги в показателях основных процессов мочеобразования у животных в динамике после ПППСМ соотносятся с данными литературы [7] с особыми фазными изменениями в состоянии центров. Авторы считают, что в основе наступления периодов угнетения и активации центров изолированного перерезкой СМ лежат метаболические процессы, интенсивность которых может изменяться под воздействием продуктов распада поврежденных структур нервной ткани. В отдельной серии опытов нами обнаружено увеличение продуктов липопероксидации (по содержанию МДА) в гомогенатах почечной ткани у крыс с ПППСМ (n = 16), параллельно срокам перерезки (1,02±0,06 мг / г ткани в контроле и 1,85±0,1 мг / г на 12 е сутки по травмы). В условиях полного перерыва СМ

40 40 эти нарушения не могли подвергнуться достаточной коррекции со стороны надсегментарных отделов ЦНС, хотя на какое то время брали перевес, когда и наступали фазы нормализации почечных функций. Таблица 2 Основные процессы мочеобразования до и после водной нагрузки у интактных собак и в периоды олигурии у спинальных собак Изучаемый процесс Животные До водной нагрузки Время после нагрузки в минутах: Диурез в мл / мин / м² интакт спинал р 0,59±0,19 0,40±0,06 < 0,2 0,72±0,24 0,57±0,08 < 0,001 3,88±0,42 0,74±0,13 < 0,001 2,70±0,41 0,76±0,21 < 0,001 СКФ в мл / мин / м² интакт спинал р 66,6±6,7 39,9±3,7 < 0,01 86,8±7,6 40,0±4,7 < 0,001 69,0±4,3 52,0±5,8 < 0,025 64,1±4,9 44,0±2,6 < 0,5 Канальц. реабсорб. воды в % интакт спинал р 99,2±0,1 98,9±0,2 < 0,2 96,0±0,8 98,4±0,3 <0,01 93,8±0,8 98,2±0,5 <0,001 96,0±0,5 97,7±0,6 < 0,05 Заключение. Полученные данные дают возможность предположить, что у животных в динамике после ПППСМ происходит своеобразная перестройка компенсаторных механизмов функций почек. Спинальные центры регуляции деятельности почек «отключены» от нисходящих влияний ЦНС, а центры регуляции ВСО находятся в условиях дезинформации о состоянии периферических рефлекторных звеньев, что приводит к рассогласованию в работе этих систем и требований организма в поддержании гомеостазиса воды и электролитов. Результаты исследования подчеркивают необходимость физиологического обоснования при попытке коррекции деятельности почек и ВСО в посттравматическом периоде. Накопление продуктов свободнорадикального окисления в тканях почек может быть обоснованием к применению антиоксидантной терапии у спинальных

41 41 больных. Дальнейшие исследования должны быть направлены, в том числе, и на поиск средств, которые могли бы остановить деструктивный каскад вторичных спинальных повреждений. Литература 1. Георгиева С. А., Бабиченко И. Е., Пучиньян Д. М. Гомеостаз, травматическая болезнь головного и спинного мозга. Саратов, Лопаткин Н. А., Салюков Р. В. Расстройства мочеиспускания у пациентов, перенесших позвоночно-спинномозговую травму // Урология С Ramer L. M., Ramer M. S., Steeves J. D. Setting the stage for functional repair of spinal cord injuries: a cast of thousands. // Spinal Cord , 1. Р Шевелев И. Н., Басков А. В., Яриков Д. Е., Борщенко И. А. Восстановление функции спинного мозга: современные возможности и перспективы исследования // Вопросы нейрохирургии С Новикова М. С., Кутырина И. М., Шилов Е. М. Современные методы определения скорости клубочковой фильтрации у лиц с нормальной и избыточной массой тела // Терапевтический архив С Владимиров Ю. А. Физиологическая роль свободных радикалов. Руководство к экспериментальным работам. М.: «ГЕОТАР- МЕДИА», С Подачин В. Н., Мусалов Г. Г., Незлина Н. И. Структурно-функциональные основы компенсации функций при травме спинного мозга. М., 1983.

42 42 УДК: 615.9: ИЗМЕНЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ КАЛЬЦИЯ И СВИНЦА В БЕДРЕННЫХ КОСТЯХ КРЫС С ХРОНИЧЕСКОЙ СВИНЦОВОЙ ИНТОКСИКАЦИЕЙ В УСЛОВИЯХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ГИПО- И ГИПЕРКАЛЬЦИЕМИИ Ахполова В. О., Брин В. Б. Северо-Осетинская государственная медицинская академия, Россия, г. Владикавказ Исследовалось содержание кальция и свинца в костной ткани крыс с хронической свинцовой интоксикацией, как изолированно, так и в сочетании с гипо- и гиперкальциемией. Показано, что при внутрижелудочном введении металла наиболее выраженные изменения состава костной ткани имели место в сочетанных с инъекциями кальцитонина и гипервитаминозом D моделях, а при подкожном введении ксенобиотика у паратиреоидэктомированных крыс. CHANGES OF CALCIUM AND LEAD CONTENT IN THE FEMUR OF RATS WITH CHRONIC LEAD INTOXICATION IN THE CONDITIONS OF EXPERIMENTAL HYPO- AND HYPERCALCEMIA Ahpolova V. O., Brin V. B. North Ossetian State Medical Academy, Vladikavkaz The content of calcium and lead in bone tissue of rats with chronic lead intoxication, both isolated and in combination with hypo-and hypercalcemia was studied. It is shown that the intragastric administration of the metal combined with injections of calcitonin and hypervitaminosis D produces the most pronounced changes in the composition of bone, as well as subcutaneous injections of lead to rats with parathyroidectomy. Введение. Хроническая свинцовая интоксикация тяжелое заболевание, поражающие различные органы и системы [4]. Многочисленные литературные данные указывают на взаимосвязи между

43 43 обменом кальция и токсикокинетикой свинца в организме человека и животных. Так, например, на уровне желудочно-кишечного тракта всасывание металла усиливается в условиях дефицита кальция [1]. Свинец же, поступая в организм, способствует повышенной экскреции кальция с мочой [2]. Костная ткань, как основное депо кальция, в условиях хронической свинцовой интоксикации может подвергаться деминерализации и резорбции. Сдвиги в кальциевом гомеостазисе также влияют на состав кости, и, вероятно, способны изменять накопление в ней свинца [3]. Это мы и попытались выяснить в данном исследовании. Целью работы было изучение содержания кальция и свинца в бедренных костях крыс с экспериментальной гипо- и гиперкальциемией в условиях хронической свинцовой интоксикации. Материал и методы исследования. Работа выполнена на крысах самцах линии Вистар, массой грамм. Эксперименты проводились в 16 группах животных (по 10 крыс в каждой): 1) интактные животные; 2) ложнооперированные животные; 3) паратиреоидэктомированные животные; 4) животные с подкожным введением кальцитонина; 5) животные с экспериментальным гипервитаминозом D; 6) животные с интрагастральным введением раствора хлорида кальция; 7) животные с внутрижелудочным введением ацетата свинца; 8) ложнооперированные животные с внутрижелудочным введением ацетата свинца; 9) паратиреоидэктомированные животные с внутрижелудочным введением ацетата свинца; 10) животные с интрагастральным поступлением ацетата свинца на фоне подкожного введения кальцитонина; 11) животные с интрагастральным поступлением ацетата свинца на фоне экспериментального гипервитаминоза D; 12) животные с подкожным введением ацетата свинца; 13) ложнооперированные животные с подкожным введением ацетата свинца; 14) паратиреоидэктомированные животные с подкожным введением ацетата свинца; 15) животные с подкожным введением ацетата свинца на фоне экспериментального гипервитаминоза D; 16) животные с подкожным введением ацетата свинца на фоне интрагастрального поступления 10 % раствора хлорида кальция.

44 44 Модель экспериментального гипопаратиреоза получали удалением у крыс паращитовидных желез. Через 1,5 месяца после паратиреоидэктомии исследовался уровень кальция в крови и отбирались животные с наиболее выраженной гипокальциемией для дальнейших экспериментов. Контрольной группой служили ложнооперированные крысы, с аналогичным объемом оперативного вмешательства за исключением выжигания паращитовидных желез. Другая модель гипокальциемии создавалась путем ежедневного подкожного введения препарата «Миакальцик» синтетического кальцитонина лосося в дозировке 0,6 МЕ / 100 г веса животного в течение 20 дней. Экспериментальный гипервитаминоз D получали ежедневным введением препарата «Аквадетрим» через атравматичный зонд в желудок в дозировке 3000 МЕ / 100 г массы тела животного в течение 30 дней. Еще одна модель гиперкальциемии воспроизводилась ежедневным внутрижелудочным введением 10 % раствора хлорида кальция в количестве 0,15 мл на 100 г массы крысы в течение 20 дней. Ацетат свинца вводили интрагастрально и подкожно в дозировке 40 мг / кг массы тела животного. Животные в течение эксперимента находились на стандартном пищевом рационе со свободным доступом к воде и пище. Световой режим естественный. Перед определением элементов в костной ткани проводилась минерализация проб по ГОСТ и приготовление испытуемого раствора по ГОСТ Кальций определяли после предварительного разведения с помощью спектрофотометра (PV 1251C), свинец на атомно-абсорбционном спектрофотометре («Квант- АФА»). Цифровые данные обработаны параметрическим методом вариационной статистики с применением критерия «t» Стьюдента. Результаты и их обсуждение Исследование содержания кальция и свинца в костной ткани интактных животных позволило установить контрольный уровень, принятый нами за 100 %. Он составил 246,1 ± 6,7 г / кг и 18,6 ± 1,7 мг / кг сухого веса трубчатой кости, соответственно.

45 45 Значения ложнооперированных животных практически не отличались от фоновых показателей (97% Са, 108 % Рв). У паратиреоидэктомированных крыс содержание кальция в костях снижалось (82% Са), свинца недостоверно возрастало (119% Рв). Инъекции кальцитонина увеличивали кальцификацию костной ткани (110% Са), содержание свинца осталось в пределах значений интактных крыс (104% Рв). Гипервитаминоз D и внутрижелудочное введение хлорида кальция так же повышали концентрацию кальция в костном матриксе (109% и 108 % Са). Содержание свинца в бедренных костях крыс обеих групп достоверно не отличалось от фоновых значений (95% и 88 %Рв). Внутрижелудочное введение ацетата свинца интактным и ложнооперированным крысам приводило к достоверному уменьшению кальцификации костной ткани (65% и 63 %Са) и накоплению в ней свинца (272% и 273 %Рв). Паратиреоидэктомированные крысы, получавшие металл интрагастрально, характеризовались сниженным относительно фона, но более высоким, чем в описанных выше 2 группах, содержанием кальция в костной ткани (78% Са). Кумуляция свинца в этой сочетанной модели была выражена в меньшей степени (232% Рв). Сочетание внутрижелудочного введения металла с инъекциями кальцитонина уменьшало кальцификацию костей (61% Са). Концентрация в них свинца, напротив, значительно возрастала (362% Рв). Интрагастральное поступление металла на фоне экспериментального гипервитаминоза D способствовало усиленной кумуляции свинца в костном матриксе (341% Рв). Минерализация костей при этом падала (58% Са) (рис. 1,2). У интактных и ложнооперированных животных с подкожным введением ацетата свинца отмечалось значительное снижение содержания кальция (40 и 38 % Са) и рост концентрации свинца (500 и 489 % Рв) в трубчатых костях по сравнению с фоном. У паратиреоидэктомированных крыс, получавших металл парентерально, отмеченные ранее сдвиги приобретали максимальную выраженность. Содержание кальция в костном матриксе падало до 33 % от уровня интактных животных, кумуляция свинца увеличивалась (565% Рв). Животные, получавшие инъекции

46 46 ацетата свинца на фоне экспериментального гипервитаминоза D и внутрижелудочного введения хлорида кальция характеризовались более высоким, по сравнению с контрольной группой, содержанием кальция (55 % и 60 %Са) и меньшим накоплением свинца (434 % и 418 % Рв) в трубчатых костях (рис. 1,2). Таким образом, при интрагастральном поступлении металла наиболее выраженные изменения состава костной ткани наблюдались в сочетанных с кальцитониновой гипокальциемией и гипервитаминозом D моделях, а при подкожном введении ксенобиотика у паратиреоидэктомированных крыс. Литература 1. Fullmer C. S. Intestinal interactions of lead and calcium // Neurotoxicology. 1992; p Navarro-Moreno LG et al. Effects of lead intoxication on intercellular junctions and biochemical alterations of the renal proximal tubule cells // Toxicol In Vitro Oct;23 (7): Palaniappan P. L. et al. / The study of the changes in the biochemical and mineral contents of bones of Catla catla due to lead intoxication.//environ Toxicol Feb;25 (1): Patrick L. Lead Toxicity, A Review of the Literature. Part I: Exposure, Evaluation, and Treatment // Altern Med Rev Vol Р

47 УДК : ОПРЕДЕЛЕНИЕ УРОВНЯ АУТОАНТИТЕЛ К КОЛЛАГЕНУ IV ТИПА ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ПОЧЕК Батурин В. А. *), Мамцева Г. И. **), Нерсесьянц З. В. **), Редько Ю. П. ***), Чумаков П. И. *), Русинова В. Н. **) *) Ставропольская государственная медицинская академия, Россия, г.ставрополь **) ООО НПО «Иммунотэкс», Россия, г.ставрополь ***) МУЗ Городская больница скорой медицинской помощи 4, Россия, г.ставрополь Изучали изменение уровня аутоантител к коллагену IV типа у больных с хроническим гломерулонефритом и пиелонефритом до и после лечения, а также у здоровых добровольцев. Установлено, что у всех больных с хроническими заболеваниями почек титр аутоантител к коллагену IV типа был значительно повышен по сравнению со здоровыми испытуемыми, а после лечения достоверно снизился. Ключевые слова: хроническипй гломерулонефрит, хронический пиелонефрит, аутоантитела, коллаген IV типа. DEFINITION OF LEVEL OF AUTOANTIBODIES TO TYPE COLLAGEN IV AT DISEASES OF KIDNEYS Baturin V. A., Mamtseva G. I., Nersesyants Z. V., Redko Y. P., Chumakov P. I., Rusinova V. N. The level change autoantibodies to type collagen IV at patients with a chronic glomerulonephritis and pyelonephritis before and after treatment, and also at healthy volunteers was studied. It is established that at all patients with chronic diseases of kidneys the titre autoantibodies to collagen IV of type was considerably raised in comparison with healthy experimental, and after treatment authentically decreased. Keywords: chronic glomerulonephritis, chronic pyelonephritis, autoantibodies, type collagen IV.

48 48 Многие распространенные аутоиммунные заболевания сопровождаются нарушением в синтезе и распаде коллагена. Характерная особенность этих изменений такова, что наступают они на раннем этапе, еще до появления клинических признаков заболевания. Поэтому выявление в плазме крови человека аутоантител к коллагенам разных типов имеет диагностическое и прогностическое значение [1]. Коллаген IV находится в базальной мембране сосудов, почечных клубочков, печени. В почках коллаген IV формирует большую часть гломерулярной базальной мембраны. Коллаген IV является новым, чувствительным маркером почечного фиброза и повреждения почечных клубочков. Уровень коллагена IV увеличен при ренальных фиброзах и хронической почечной недостаточности. Определение уровня аутоантител к коллагену IV имеет диагностическое значение у пациентов на ранней стадии нефропатии, когда еще не выражена микроальбуминурия. Уровень аутоантител к коллагену коррелирует со стадией болезни [2]. Целью нашего исследования явилось изучение изменения уровня аутоантител к коллагену IV типа на разных стадиях хронических заболеваний почек, сопровождающихся фиброзом. Материлы и методы. Обследовано 95 больных (52 женщины и 43 мужчины), находившихся на лечении в стационарах г. Ставрополя, в возрасте от 39 до 72 лет с хроническим гломерулонефритом и с хроническим пиелонефритом в стадии обострения до лечения и после проведения стандартной для каждого диагноза фармакотерапии. Диагнозы были верифицированы с помощью клинико-лабораторных и инструментальных методов исследования. В контрольную группу входили здоровые люди 38 человек (20 мужчин и 18 женщин) в возрасте от 18 до 67 лет. Уровень антител к коллагену человека IV типа определялся методом твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) с использованием тест-системы «ИФТС-аутоколлаген IV», производителем которой является ООО НПО «Иммунотэкс», г. Ставрополь. Тест-система предназначена для полуколичественного

49 49 определения уровня аутоантител к коллагену человека IV типа в плазме (сыворотке) человека. При статистической обработке данных использовали дисперсионный анализ повторных изменений с вычислением парногt-критерия Стьюдента, где достоверными считали различия при р < 0,05. Результаты и обсуждение. Согласно полученным результатам, уровень аутоантител к коллагену IV типа у здоровых лиц составил 97±9 мкг / мл. Было установлено, что у всех больных до лечения титр аутоантител к коллагену IV типа был существенно увеличен, при этом средние значения в группе больных хроническим гломерулонефритом составили 1245±95 мкг / мл, а у больных хроническим пиелонефритом 1298±97 мкг / мл. После проведения лечения состояние пациентов улучшалось, как по клиническим данным, так и по результатам инструментального обследования. Положительная динамика в течение заболевания совпадала с существенным снижением титров аутоантител к коллагену IV типа у всех обследованных больных. Так, у больных хроническим гломерулонефритом уровень аутоантител к коллагену IV типа после лечения достоверно снизился и составил 580±41 (р<0,05) мкг / мл. У больных хроническим пиелонефритом уровень аутоантител снизился до 495±39 (р<0,05) мкг / мл, хотя и оставался заметно выше, чем в контрольной группе здоровых лиц. Таким образом, выявление у пациентов аутоантител к коллагену IV типа подтверждает сам факт антителообразования к структурам коллагена при хронических заболеваниях почек, сопровождающихся фиброзом, и отражает преимущественное вовлечение коллагена IV типа в процесс формирования фиброза [3]. Результаты наших исследований совпадают с данными Чуелова С. Б. и соавт. [4], которые показали что естественные аутоантитела могут быть информативными предикторами различных заболеваний (и не только аутоиммунных). При этом изменения в содержании органоспецифических естественных аутоантител в большинстве случаев на месяцы и годы опережают клиниче-

50 50 скую манифестацию соответствующих форм патологии. Следовательно, определение уровня аутоантител к коллагену IV типа можно рекомендовать в алгоритме комплексной диагностики и мониторинга лечения хронических заболеваний почек, а также для оценки степени активности аутоиммунного процесса и дальнейшей коррекции специфической терапии аутоиммунных заболеваний почек. Литература 1. Structural molecules of connective tissues. In: Schumacher H. R. Jr. (ed.). Primer on the Rheumatic Diseases, 10th ed Atlanta, Arthritis Foundation, 1993, Лапин С. В. Диагностика поражения почек при системных аутоиммунных заболеваниях / С. В. Лапин, А. А. Тотолян // Нефрология Т.6, 3. С Корой П. В., Ягода А. В., Павленко В. В. Антитела к коллагенам при хронических вирусных заболеваниях печени. Влияние противовирусной терапии//медицинский вестник Северного Кавказа Т. 25, 1. С Чуелов С. Б. и соавт. Сывороточные маркеры фиброза печени у детей: диагностическое и прогностическое значение// Педиатрия Т С

51 УДК ИССЛЕДОВАНИЕ МОЛЕКУЛЯРНЫХ МЕХАНИЗМОВ ТРАНСПОРТА ВОДЫ В ГЛАВНЫХ КЛЕТКАХ СОБИРАТЕЛЬНЫХ ТРУБОК ПОЧКИ МЛЕКОПИТАЮЩИХ Батурина Г. С., Каткова Л. Е., Соленов Е. И. Институт цитологии и генетики СО РАН, Россия, Новосибирск Целью данной работы являлось исследование роли вторичных посредников цамф и Ca ++ в регуляции водной проницаемости (Pf) базолатеральной мембраны клеток собирательных трубок наружного мозгового вещества почки. Инкубация изолированных собирательных трубок наружного мозгового вещества почки с селективным агонистом V 2 рецепторов вазопрессина (ddavp) приводила к повышению водной проницаемости. Этот эффект устранялся прединкубацией канальцев с хелатором Ca ++ BAPTA-AM. В то же время, BAPTA-AM не влияла на вызванное ddavp повышение экспрессии AQP3 в базолатеральной мембране клеток собирательных трубок крысы. Инкубация изолированных фрагментов собирательных трубок крысы с мембранопроникающим аналогом цамф (дбцамф) так же, как и ddavp, приводила к повышению Pf базолатеральной мембраны. Полученные нами данные позволяют предположить, что в механизме регуляции водной проницаемости базолатеральной мембраны собирательных трубок ключевую роль играют как цамфзависимый, так и кальций-зависимый пути трансдукции гормонального сигнала вазопрессина. MOLECULAR MECHANISMS OF THE RENAL COLLECTING DUCT CELLS WATER PERMEABILITY REGULATION Baturina G. S., Katkova L. E., Solenov E. I. Intitute of cytology and genetics SB RAS, Novosibirsk, Russian Federation It is known, that the acute increases in plasma antidiuretic hormone [8 arginine] vasopressin (AVP) concentration leads to translocation of AQP2 from intracellular storage vesicles to the apical plasma membrane and results in increased collecting ducts water permeability. These responses

52 52 depend on the binding of AVP to basolateral V 2 receptors in collecting duct cells, which leads to the activation of adenylyl cyclase and an increase of cyclic AMP level in the cells. It is shown that AVP binding to V 2 receptors also leads to mobilizations of Ca ++ from intracellular storages. AQP3 and AQP4 are basolateral water channels located in the kidney collecting duct. We have previously established that a water permeability of basolateral membrane of collecting ducts principal cells is also upregulated with the agonist of V 2 vasopressin receptor (ddavp). The purpose of the present work was to investigate the role of secondary messengers camp and Ca ++ in regulation of collecting duct cells water permeability by AVP. Apparent water permeability coefficient (Pf) of total cell surface or basolateral membrane was evaluated in isolated fragments of outer medulla collecting ducts. The permeability of the basolateral cell membrane was determined in the tubules where apical membrane was blocked with oil injected into the lumen. The rate of the cell swelling after step from hyperosmotic (600 mosm) to isoosmotic (300 mosm) environment was measured. In this study we demonstrate that camp analog (dbcamp) significantly increase the water permeability of total surface or basolateral membrane of collecting duct cells. We show that preliminary incubation with BAPTA-AM abolished the effect of ddavp and dbcamp on the water permeability of collecting duct total cells surface or basolateral membrane. At the same time the inhibitor of protein kinase C (Ro ) abolished the effect of ddavp, but not dbcamp. As analyzed by Western blotting, ddavp added to the medium, increased AQP2 and AQP3 content in membrane fraction of rat renal outer medulla slices. In the presence of BAPTA-AM ddavp was ineffective to increase the AQP2, but not AQP3, content. Finally, our studies indicate, that both camp and Ca ++ dependent mechanisms are important for AVP regulation of collecting duct cells water permeability. Антидиуретический гормон (АДГ, вазопрессин) у позвоночных животных является главным фактором, стимулирующим реабсорбцию осмотически свободной воды в почке путем повышения проницаемости эпителия собирательных трубок. Открытие белков акапоринов стало важным событием для понимания многих фундаментальных физиологических процессов, в том числе и внутриклеточных механизмов регуляции водной проницаемости собирательных трубок под действием АДГ [6]. Согласно современным представлениям, в реакцию на АДГ включаются AQP2, опосредующий транспорт воды через апикальную мембрану клеток собирательных трубок, а также аквапорины 3 и 4 типов, локализованные в базолатеральной мембране.

53 53 Долгое время считалось, что трансцеллюлярный поток воды через эпителий собирательных трубок определяется проницаемостью апикальной мембраны клетки, а водная проницаемость базолатеральной мембраны не является скорость-лимитирующей и не регулируется. Исследования в этой области в значительной мере сдерживались отсутствием адекватных методических подходов к дифференцированной оценке транспорта воды через апикальную и базолатеральную клеточные мембраны. Нами был разработан метод для оценки транспорта воды через клетки эпителия собирательных трубок, основанный на видеозаписи изменения объема клеток микродиссектированной собирательной трубки в ответ на создание трансмембранного осмотического градиента и последующей автоматической обработки изображения. Блокада транспорта воды через апикальную мембрану клеток, позволила оценить водную проницаемость базолатеральной поверхности клеток [3,7]. С использованием этого методического подхода, нами было показано, что водная проницаемость базолатеральной мембраны собирательных трубок мозгового вещества почки подвержена регуляции в зависимости от состояния водно-солевого баланса организма, а также при действии АДГ [3,1]. Таким образом, комплексный механизм регуляции водной проницаемости эпителия собирательных трубок включает регуляцию проницаемости апикальной мембраны путем обратимого встраивания в нее AQP2, а также регуляцию базолатеральной водной проницаемости путем изменения экспрессии или конформации белков AQP3 и AQP4. В данной работе приведены результаты цикла работ, посвященных исследованию механизма гормональной регуляции водной проницаемости базолатеральной мембраны клеток осморегулирующего эпителия почки. Cпособность аденилатциклазной системы регулировать водную проницаемость базолатеральной мембраны представляется не столь очевидной. Известно, что цамф и протеинкиназа А участвуют в регуляции транскрипции гена AQP3. Однако, в литературе нет данных о регуляции цамф / протеинкиназа А системой аквапоринов 3 и 4 на белковом уровне.

54 54 В наших экспериментах мы исследовали влияние экзогенного мембранопроникающего аналога цамф (дибутирильное производное цамф (дбцамф)) на водную проницаемость базолатеральной мембраны собирательные трубок почки крыс линии Вистар. Инкубация с дбцамф (100 mm, 20 мин, 37 С в среде MEM, содержащей 10 ммоль HEPES и аэрируемой смесью воздуха и CO 2 (5%)) приводит к достоверному повышению значений P f (контроль 88,22±16,4; дбцамф 126,61±24, p<0.05, n=9). Полученные нами данные позволяют предположить, что в механизме регуляции водной проницаемости базолатеральной мембраны собирательных трубок значительную роль играет цамф-зависимый путь передачи гормонального сигнала АДГ. Известно, что в присутствии АДГ в главных клетках собирательных трубок, наряду с повышением уровня цамф, кратковременно увеличивается содержание Ca 2+ [4]. Согласно современным представлениям, АДГ вызывает высвобождение внутриклеточного кальция из рианодин чувствительного депо [5]. Вопрос о роли внутриклеточного Ca 2+ и кальций-зависимой протеинкиназы в механизме гормональной регуляции водной проницаемости плазматической мембраны клеток собирательных трубок остается актуальным. Усилия нашего авторского коллектива были сфокусированы на исследовании возможной роли внутриклеточного кальция в гормональной регуляции проницаемости базолатеральной мембраны клеток собирательных трубок. Согласно полученным результатам, в присутствии агониста V2 рецепторов (ddavp) коэффициент осмотической водной проницаемости базолатеральной мембраны клеток эпителия собирательных трубок увеличивался в среднем на 30 %, что совпадает с полученными нами ранее данными (рис.1) [2]. Предварительная загрузка агентом хелатирующим внутриклеточный кальций (ВАРТА-AM, 50 mm) ) приводила к значительному подавлению гидроосмотического действия ddavp на эпителий собирательных трубок. При этом нестимулированная водная проницаемость базолатеральных мембран оставалась неизменной (рис.1).

55 P f м/с ** контроль ddavp BAPTA BAPTA+dDAVP Рис. 1. Влияние десмопрессина (ddavp) и внутриклеточного хелатора кальция (ВАРТА) на водную проницаемость базолатеральной мембраны собирательных трубок почки крысы. По оси ординат величины Pf (мкм / сек), по оси абсцисс контроль, Pf интактной ткани, ddavp (10 8 M), контроль после загрузки ВАРТА (5 мкм), ВАРТА (5 мкм) и ddavp (10 8 M). Линиями соединены измерения водной проницаемости в контроле и после инкубации с ddavp для каждой собирательной трубки. **p<0.05 по сравнению с контролем Инкубация срезов мозгового вещества почки с ddavp вызывала повышение содержания белков как AQP2, так и AQP3, что, по видимому, обусловливало повышение водной проницаемости базолатеральной мембраны клеток эпителия собирательных трубок в присутствии ddavp (рис.2 А, Б). Связывание ионов Ca 2+ подавляло стимулирующий эффект ddavp на содержание AQP2 в мембранной фракции мозгового вещества почки крыс (рис.2а), но не отменяло повышения экспрессии белка AQP3 (рис.2 Б). Можно предположить, что в данном случае повышение содержания белка AQP3 недостаточно для усиления транспорта воды в присутствии хелатирующего Ca 2+ агента. Одним из

56 56 предположительных путей регуляции транспорта воды через водные каналы является изменение водной проницаемости индивидуальных аквапоринов. В настоящее время вопрос об участии этого пути остается открытым. Таким образом, повышение внутриклеточного кальция является необходимым условием для гормональной регуляции водной проницаемости как апикальной, так и базолатеральной мембраны клеток собирательных трубок. А. Б * * * контроль ddavp BAPTA BAPTA+dDAVP 20 контроль ddavp BAPTA BAPTA+dDAVP Рис. 2. Результаты Вестерн-блот анализа влияния внутриклеточного хелатора кальция ВАРТА на десмопрессинзависимое повышение содержания AQP2 (А) и AQP3 (Б) в мембранной фракции наружного мозгового вещества почки крысы. По оси ординат относительная оптическая плотность Литература 1. Батурина Г. С., Исаева Л. Е., Ходус Г. Р., Нестеров В. В., Соленов Е. И, Иванова Л. Н. Водная проницаемость базолатеральной мембраны собирательных трубок наружного и внутреннего мозгового вещества почки крыс в условиях дегидратации и при действии ddavp// Росс. физиол. журнал им. Сеченова Т. 90 (7). С Соленов Е. И., Батурина Г. С., Нестеров В. В., Ходус Г. Р., Иванова Л. Н. Влияние дегидратации и ddavp на проницаемость для воды базолатеральной мембраны клеток эпителия соби-

57 57 рательных трубок почки. Российский физиологический журнал им. И. М. Сеченова. Т. 88, 3. С , Соленов Е. И., Г. С. Батурина, Л. Н. Иванова. Влияние вазопрессина на водную проницаемость клеток эпителия собирательных трубок почки в постнатальном онтогенезе крыс// Росс. физиол. журнал им. И. М. Сеченова Т. 87 (7). С Соленов Е. И., Н. С. Логвиненко, Н. Г. Свиташева, Л. Н. Иванова. Влияние альдостерона и вазопрессина на активность внутриклеточного Са 2+ в кортикалных собирательных трубках почки крысы. Биологические мембраны, 8, , Chung-Lin Chou, Kay-Pong Yip, Luis Michea, Karl Kador, Joan D. Ferraris, James B. Wade, and Mark A. Knepper. Regulation of Aquaporin-2 trafficking by vasopressin in the renal collecting duct. roles of ryanodine-sensitive Ca stores and calmodulin. The Journal Of Biological Chemistry 275, , Preston G. M., Agre P. Isolation of the cdna for erythrocyte integral membrane protein of 28 kilodaltons: member of an ancient channel family// Proc Natl Acad Sci USA Vol. 88. P: Solenov EI, Nesterov VV, Baturina GS, Khodus GR, Ivanova LN. Effect of ddavp on basolateral cell surface water permeability in outer medullary collecting duct// Eur. Biophys. J Vol. 32. P:

58 58 УДК: РАЗВИТИЕ ИДЕЙ Н. Н. ПРОНИНОЙ В РАБОТАХ ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЙ ШКОЛЫ СОГМА ЗА ПОСЛЕДНИЕ 30 ЛЕТ Брин В. Б. Северо-Осетинская государственная медицинская академия, Россия; г.владикавказ . В статье рассматриваются обобщенные результаты исследований кафедры нормальной физиологии Северо-Осетинской государственной медицинской академии за последние 30 лет, посвященные экспериментальному изучению функции почек и водно-солевого обмена, системной гемодинамики в норме и патологии. DEVELOPMENT OF IDEAS OF N. N. PRONINA IN THE WORKS OF NOSMA PHYSIOLOGICAL SCHOOL FOR THE LAST 30 YEARS Brin V. B. In this paper we consider the generalized results of studies of normal physiology department of the North Ossetian State Medical Academy in the past 30 years, devoted to experimental studies of renal function and water-salt metabolism, systemic hemodynamics in health and disease. В исследованиях кафедры, проводившихся под руководством проф. Н. Н. Прониной, был установлен ряд важнейших физиологических закономерностей относительно регуляции функции почек и водно-солевого обмена: 1) регуляторные эффекты большинства гормонов на водовыделительную функцию почки, являясь эфферентным звеном нейрогуморальной регуляции водно-солевого обмена, реализуются при участии антидиуретического гормона либо путем изменения его секреции в кровь, либо благодаря изменению чувствительности к нему структур нефрона; 2) антидиуретический гормон активирует

59 59 реабсорбцию воды не только в структурах нефрона, но и в ряде внешнесекреторных образований пищеварительного тракта, обеспечивая тем самым не только регуляцию водно-солевого гомеостазиса, но и регуляцию пищеварительной функции желудочно-кишечного тракта и система пищеварения рассматривается как одно из звеньев регуляции водно-солевого гомеостазиса; 3) в механизмах действия внутреннего приема минеральных вод разного состава существенная роль принадлежит изменению гормонального профиля внутренней среды организма, прежде всего секреции антидиуретического гормона. После перехода Н. Н. Прониной на должность консультанта, с 1980 по 1982 гг. кафедру возглавляла ее ученица, проф. Э. А. Тотрова. Исследования гормональной регуляции функции почек были продолжены. Развивая творческое наследие проф. Н. Н. Прониной, начиная с 1983 года, когда Н. Н. Пронина перешла на работу научным консультантом в ЦНИЛ, аспирантами и сотрудниками кафедры под руководством зав.кафедрой проф. В. Б. Брина проводятся исследования, посвященные изучению малоизвестных эффектов гормонов на функции почек не только у интактных животных, но и в условиях артериальной гипертензии. Постепенно на кафедре формируются несколько основных научных направлений. Первое из них, продолжающее развивать наследие Н. Н. Прониной, посвящено исследованиям роли гормонов в регуляции водно-солевого обмена в норме и при артериальной гипертензии. Второе направление, посвящено гормональной регуляции системной гемодинамики. Позднее вектор проводимых исследований перемещается в сторону изучения экспериментальной патологии почек и системной гемодинамики, формируется третье направление исследований моделирование токсических нефро- и кардиопатий, разработка принципов их профилактики и терапии. Исследования, проводимые совместно с кафедрой патологической анатомии СОГМА, формируют четвертое направление исследований кафедры моделирование экспериментального амилоидоза почек и сердца с разработкой принципов профилактики и терапии. С первых лет описываемого 30 летнего периода пятым направлением на-

60 60 учных исследований кафедры является изучение роли кальциевого гомеостазиса в реализации регуляторных гормональных эффектов на почки и системное кровообращение, а в последние годы проводится исследование роли измененного кальциевого гомеостазиса в формировании токсических нефропатий, моделируемых в эксперименте введением тяжелых металлов. Общим итогом проведенных исследований явилось создание свыше 10 моделей экспериментальных нефро- и кардиопатий, разработка нескольких способов их профилактики, что нашло отражение в 35 патентах на изобретения, полученных сотрудниками кафедры за эти годы. В настоящем обзоре описываются только результаты исследований аспирантов и сотрудников кафедры, исследования, выполненные в других подразделениях и кафедрах академии, под руководством В. Б. Брина, в данный обзор не включены. В рамках первого и второго научного направления исследования проводились на интактных нормотензивных крысах линии Вистар, спонтанно-гипертензивных крысах линии Okamoto-Aoki, генетически лишенных вазопрессина крысах линии Brattleboro. Были изучены особенности почечных и гемодинамических эффектов хорионического гонадотропина (К. Г. Митциев, 1989; С. В. Бродский, 1994), почечные и гемодинамические эффекты окситоцина, паратирина, кальцитонина (О. З. Басиева, 1999) у интактных, спонтанно-гипертензивных и лишенных вазопрессина крыс, исследованы механизмы изменения функции почек при экспериментальной гиперпролактинемии (Л. С. Таболова, 2001), почечные и гемодинамические эффекты кальцитонина, паратирина и верапамила у спонтанно-гипертензивных крыс (А. С. Татров, 1991; З. Т. Цаболова, 1991; Ж. К. Гулуева, 1991). В опытах на крысах линии Вистар были исследованы функциональные взаимосвязи эффектов паратгормона и глюкокортикоидов (Н. А. Игонина, 1985), паратгормона и пептидов нейрогипофиза (Т. В. Молдован, 1990) в регуляции функции почек. В результате проведенных исследований было установлено, что глюкокортикоидные гормоны усиливают эффекты паратирина на содержание кальция в плазме крови и его реабсорб-

61 61 цию в канальцах почек. Паратирин устраняет активацию реабсорбции воды и тормозящее действие вазопрессина на диурез, ослабляет действие вазопрессина, повышающее содержание альдостерона в крови, усиливает диуретический и натриуретический эффекты окситоцина. Хорионический гонадотропин повышает осмотическую проницаемость мембраны мочевого пузыря лягушки, у крыс линии Вистар повышает в крови содержание вазопрессина и снижает уровень альдостерона и активность ренина, вызывает задержку в организме воды, усиливая канальцевую её реабсорбцию и снижая диурез, активирует реабсорбцию натрия, калия и кальция. У спонтанно гипертензивных крыс и крысах с ДОКА-солевой гипертензией хорионический гонадотропин обладает гипотензивным эффектом. Антидиуретический эффект хорионического гонадотропина опосредован вазопрессином, поскольку в опытах на крысах линии Brattleboro в нашей лаборатории показано, что при отсутствии вазопрессина антидиуретический и активирующий реабсорбцию воды эффект хорионического гонадотропина исчезает. Кальцийрегулирующие гормоны усиливают реактивность нефрона к активирующему реабсорбцию ионов действию хорионического гонадотропина. Окситоцин обладает гипотензивным действием как у нормотензивных крыс, так и у спонтанно гипертензивных животных и крыс с наследственным несахарным диабетом. У нормотензивных и спонтанно гипертензивных крыс окситоцин обладает диуретическим эффектом, угнетая канальцевую реабсорбцию воды, в то время как у крыс линии Brattleboro окситоцин, напротив, вызывает антидиурез, повышая канальцевую реабсорбцию воды за счет вазопрессиноподобного действия. Эффекты окситоцина существенно модифицируются под влиянием кальцийрегулирующих гормонов. В опытах на спонтанно-гипертензивных крысах показано, что паратирин оказывает отчетливый гипотензивный эффект, резко усиливающийся при его сочетании с блокадой кальциевых каналов из за снижения общего периферического сосуди-

62 62 стого сопротивления. В механизмах гипотензивного эффекта паратирина у спонтанно гипертензивных крыс определенную роль играют диуретический и натриуретический эффекты, а также сдвиг трансмембранного градиента кальция, поскольку в опытах ин витро показано, что паратирин снижает в тромбоцитах спонтанно гипертензивных крыс уровень цитозольного ионизированного кальция, увеличивая в них содержание свободного кальмодулина. Изучение эффектов кальцитонина у спонтанно-гипертензивных крыс выявило отчетливый гипотензивный эффект из за прямого действия гормона на миокард, приводящего к снижению сердечного выброса. У нормотензивных крыс линии Вистар гемодинамические эффекты кальцитонина практически отсутствуют. Спонтанный 6 часовой диурез под влиянием кальцитонина у гипертензивных крыс существенно возрастает из за угнетения канальцевой реабсорбции воды при снижении содержания вазопрессина в крови. Объемная скорость кровотока, определяемая методом водородного клиренса, в мозговом веществе у спонтанно-гипертензивных крыс под влиянием кальцитонина снижалась, в отличие от нормотензивных крыс, где сдвигов почечного кровотока не отмечено. При изучении почечных эффектов пролактина у крыс использовались две модели гиперпролактинемии: эндогенная и экзогенная. Эндогенную гиперпролактинемию создавали у крыс длительным введением галоперидола, а экзогенную введением животным препарата лактин. Установлено, что как экзогенная, так и эндогенная гиперпролактинемия вызывает отчетливый антидиурез за счет усиления канальцевой реабсорбции воды при повышении в крови уровня вазопрессина и росте чувствительности к нему канальцевого аппарата почек. Гиперпролактинемия сопровождается приростом в крови содержания альдостерона и кальцитонина, снижением экскреции натрия, повышением экскреции калия, кальция и магния. В рамках третьего научного направления сотрудниками

63 63 кафедры созданы модели токсических нефро- и кардиопатий при введении животным соединений кобальта (Албегова Н. Р., 2004; Бузоева М. Р., 2008), кадмия (Кокаев Р. И., 2004), ртути (Гаглоева Э. М., 2008), свинца (Митциев А. К., 2009), никеля, молибдена и вольфрама (Албегова Ж. К., ), показана профилактическая активность применения цеолитоподобных нанокомпозитных природных соединения Ирлитов в качестве энтеросорбентов, а также антигипоксического и антиоксидантного препарата ацизол. В этих исследованиях установлено, что энтеральное или парентеральное введение крысам в хронических опытах соединений тяжелых металлов ведет к их накоплению в тканях почек, миокарда, печени, увеличению концентрации металлов в крови, моче и кале. При этом гистологическое изучение структур указанных органов выявляет отчетливые некробиотические изменения, а функционально отмечаются признаки выраженных нефро- и кардиопатий. Так, в моче резко повышается содержание белка, из за угнетения канальцевой реабсорбции воды нарастает спонтанный и водный диурез, существенное меняется экскреция электролитов. Имеет место повышение артериального давления, вследствие роста общего периферического сосудистого сопротивления, несмотря на отчетливое дозозависимое падение сердечного выброса. Применение в этих условиях энтеросорбента Ирлит-1 либо антиоксиданта ацизола существенно ослабляет и замедляет формирование токсических нефро- и кардиопатий, способствуя резкой активации экскреции металлов с калом, уменьшению их содержания в тканях и повреждения последних (при использовании Ирлита), либо снижая степень активации перекисного окисления липидов при использовании ацизола. Результаты проведенных исследований дали основание для построения следующей патогенетической схемы действия Ирлита (рис.).

64 64 ВВЕДЕНИЕ МЕТАЛЛА ИНТРАГАСТРАЛЬНО + ИРЛИТ-1 Per os ПОДКОЖНО АДСОРБЦИЯ МЕТАЛЛА ИРЛИТОМ-1 Поступление металла в ЖКТ Снижение накопления металла в ЖКТ Снижение поступления и накопления металла в печени Выделение в ЖКТ с желчью ПЕРЕНОС С ТО- КОМ КРОВИ СНИЖЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ В КРОВИ Уменьшение фильтрации, реабсорбции и накопления металла в почках Снижение накопления металла в сосудах и миокарде Уменьшение повреждения миокарда и сдвигов реактивности Уменьшение повреждения печени и ЖКТ УСТРАНЕНИЕ ГИПЕРТЕНЗИИ ОСЛАБЛЕНИЕ ПРИЗНАКОВ КАРДИОПАТИИ ПОВЫШЕНИЕ ВЫВЕДЕНИЯ МЕТАЛЛА С КАЛОМ УМЕНЬШЕНИЕ ПОВРЕЖДЕНИЯ КЛУБОЧКОВ И КАНАЛЬЦЕВОГО АППАРАТА ПОЧЕК Уменьшение выведения белка с мочой ОСЛАБЛЕНИЕ ВЫРАЖЕННОСТИ ТОКСИЧЕСКОЙ НЕФРОПАТИИ Рис. Влияние внутрижелудочного введения Ирлита-1 на метаболизм и повреждающее действие металлов в организме при подкожном и интрагастральном их введении

65 65 Введенный в организм металл как в случае энтерального поступления, так и выделяющийся из крови в желудочно-кишечном тракте при парентеральной иньекции, адсорбируется Ирлитом, вступая с ним в ионно-обменные взаимоотношения. Тем самым, ограничивается циркуляция металла в крови, его поступление и накопление в тканях, и, соответственно, повреждающее действие в органах. Адсорбированный в желудочно-кишечном тракте металл в избытке выделяется с калом. Следствием этих эффектов является уменьшение морфологических и функциональных признаков токсических нефро- и кардиопатии. Четвертое научное направление отражает исследования, проводимые совместно с кафедрой патологической анатомии, посвященные моделированию и изучению экспериментального амилоидоза почек и сердца. С помощью введения избыточных количеств чужеродного белка (яичного белка, плазмы крови коров, свиней, овец, человека) были получены защищенные патентами модели амилоидных нефропатий (Заалишвили Т. В., 2005; Пухова И. У., 2010) и кардиопатий (Гиоева З. В., 2008), впервые применен адьювант Фрейнда для моделирования амилоидоза (Габуева А. А., 2011; Беликова А. Т., 2011). В этих исследованиях также было установлено существенное протективное влияние милдроната, ацизола и янтарной кислоты. В последние годы анализ роли метаболизма кальция в реализации регуляторных и токсических влияний получил новый импульс в виде исследований влияния экспериментальных гипо- и гиперкальциемий на токсические эффекты металлов. Экспериментальная гипокальциемия создавалась с помощью удаления у крыс околощитовидных желез или длительным введением избытка кальцитонина, а экспериментальная гиперкальциемия воспроизводилась внутрижелудочным ежедневным введением хлорида кальция и кальцитриола (раздельно и в сочетании). Еще в 2002 году О. Т. Кабисовым было показано, что гипервитаминоз Д 3 практически нивелирует различия в экскреции воды и электролитов у спонтанно гипертензивных крыс линии Окамото-Аоки и нормотензивных крыс линии Вистар. В

66 66 исследованиях свинцовой (В. О. Ахполова, 2011) и кадмиевой (М. П. Хадарцева,2012) интоксикации было показано, что гиперкальциемия, вызванная гипервитаминозом Д 3, при интрагастральном поступлении металла ведет к росту нефротоксичности и повышенному накоплению металлов в костной ткани, а при парентеральном поступлении металла, напротив, снижает степень развития нефропатии. Нефротоксичность возрастает и при гипокальциемии, вызываемой инъекциями кальцитонина, в случае интрагастрального поступления металла, при этом растет и кумуляция металла в костной ткани. Одновременно с накоплением металла в костной ткани имело место существенное снижение содержания кальция. Близкие результаты были получены в 2012 году и с применением соединений кобальта и ртути в условиях экспериментальных гипо- и гиперкальциемий. Тяжелые металлы конкурируют с кальцием за мембранные транспортные системы, эффекторы и органы депонирования. Литература 1. Албегова Ж. К. Брин В. Б., Молдован Т. В., Гаглоева Э. М. Влияние нанокомпозитных энтеросорбентов на накопление молибдена в тканях крыс. Кубанский научно-мед. вестник, 2011, 3, С Албегова Н. Р. Физиологический анализ влияния цеолита Ирлит-1 на почечные эффекты хлорида кобальта, его распределение и выведение из организма. Автореф. дисс. канд. Ростовна-Дону, Ахполова В. О. Особенности развития почечных проявлений свинецовой интоксикации у крыс в условиях измененного кальциевого гомеостазиса. Автореф. дисс.канд., Владикавказ, Басиева О. З. Почечные и гемодинамические эффекты окситоцина и кальцийрегулирующих гормонов у крыс со спонтанной гипертензией и наследственным несахарным диабетом. Автореф.дисс.канд. Владикавказ, 1999

67 67 5. Беликова А. Т. Брин В. Б., Козырев К. М. Функциональноморфологичес-кая характеристика экспериментального генерализованного амилоидоза нефропатического типа. Вестник новых мед. технологий, , С Бродский С. В. Почечные и гемодинамические эффекты хорионического гонадотропина у нормотензивных и гипертензивных крыс. Автореф.дисс.канд. Краснодар, Бузоева М. Р. Экспериментальный анализ профилактического влияния цеолитоподобных глин ирлитов на почечные эффекты хлорида кобальта, его распределение и выведение из организма. Автореф.дисс.канд. Владикавказ, Габуева А. А. Функционально-морфологическая характеристика и экспериментальная профилактика развития модели нефропатического амилоидоза у крыс. Автореф.дисс.канд., Владикавказ, Гулуева Ж. К. Влияние паратгормона и верапамила на водно-солевой обмен и системную гемодинамику у нормотензивных и спонтанно гипертензивных крыс. Автореф.дисс.канд., Краснодар, Заалишвили Т. В. Функционально-морфологический анализ эксперимен-тальной модели амилоидоза почек у мышей. Влияние монотерапии милдронатом. Автореф.дисс.канд. Владикавказ, Игонина Н. А. Функциональные взаимосвязи паратгормона и глю кокортикоидов в регуляции функции почек и водно-солевого обмена. Автореф.дисс.канд. Краснодар, Кабисов О. Т. Влияние гипервитаминоза Д на реактивность сердечно-сосудистой системы и почек к действию агонистов и антагонистов адреноре цепторов у нормотензивных и спонтанно гипертензивных крыс. Автореф. дисс.канд., Владикавказ, Кокаев Р. И. Экспериментальный анализ влияния ирлита-1 на почечные эффекты сульфата кадмия, его распределение и выведение из организма. Автореф.дисс.канд., Владикавказ, Митциев А. К. Влияние ацизола на гемодинамические и

68 68 почечные проявления экспериментальной свинцовой интоксикации. Автореф. дисс. канд, Владикавказ, Митциев К. Г. Участие хорионического гонадотропина в регуляции водно-солевого гомеостаза. Автореф.дисс.канд., Краснодар, Молдован Т. В. Функциональные взаимосвязи эффектов паратгормона и пептидов нейрогипофиза в регуляции функции почек. Автореф. дисс.канд. Краснодар, Пухова И. У. Экспериментальная профилактика развития модели нефропатического амилоидоза у сирийских хомяков. Автореф.дисс.канд., Владикавказ, Таболова Л. С. Механизмы изменения функции почек при экспериментальной гиперпролактинемии у крыс. Автореф. дисс.канд., Владикавказ, Татров А. С. Влияние паратгормона на реактивность системной и почечной гемодинамики у нормотензивных и спонтанно гипертензивных крыс. Автореф.дисс.канд., Краснодар, Хадарцева М. П. Влияние измененного кальциевого гомеостазиса на развитие почечных проявлений кадмиевой интоксикации. Автореф. дисс. канд. Владикавказ, Цаболова З. Т. Особенности почечных и гемодинамических эффектов кальцитонина у нормотензивных и спонтанно гипертензивных крыс. Автореф.дисс.канд. Краснодар,1991.

69 69 EXESSIVE ANTICOAGULATION WITH VITAMIN K ANTAGONISTS RESULTS IN ACUTE KIDNEY INJURY AND GLOMERULAR HEMORRHAGE IN 5 / 6 NEPHRECTOMY RATS RESEMBLING WARFARIN RELATED NEPHROPATHY IN HUMANS Sergey V Brodsky, MD, PhD. Department of Pathology, The Ohio State University, Columbus, OH, USA Abstract: Recently we reported that acute increase in International Normalized Ratio (INR) to >3.0 in chronic kidney disease (CKD) patients is often associated with unexplained acute increase in serum creatinine (SC) levels and accelerated progression of CKD. Kidney biopsies in a subset of these patients showed renal tubular obstruction by red blood cell (RBC) casts. We proposed that this is the dominant mechanism of the acute kidney injury (AKI), which we termed warfarin-related nephropathy (WRN). As we had demonstrated, WRN is remarkably common and has serious consequences. Patients with WRN have increased mortality. However, very little is known about the WRN pathogenesis and no animal model to study WRN is available. Herein we report that WRN is reproducible in the 5 / 6 nephrectomy model of CKD. Treatment with Vitamin K antagonists results in increased SC levels in 5 / 6 nephrectomy rats, but not in control. In addition, morphologic findings in 5 / 6 nephrectomy rats includes glomerular hemorrhage, occlusive RBC casts and acute tubular injury, similar to the renal biopsy findings in patients with WRN. Our findings indicate hat it is possible to remodel WRN in at least one animal model (5 / 6 nephrectomy), but additional detailed studies are required. Keywords: Vitamin K antagonists, acute kidney injury, animal model УДК : ПРИМЕНЕНИЕ АНТАГОНИСТОВ ВИТАМИНА «К» ВЫЗЫВАЕТ У КРЫС С НЕФРЭКТОМИЕЙ 5 / 6 ПОЧЕК ОСТРОЕ ПОЧЕЧНОЕ ПОВРЕЖДЕНИЕ И КЛУБОЧКОВОЕ КРОВОИЗЛИЯНИЕ, НАПОМИНАЮЩИЕ ВАРФАРИН-СВЯЗАННУЮ НЕФРОПАТИЮ У ЛЮДЕЙ Сергей В. Бродский, MD, PhD. Отдел патологии Университета штата Огайо, Колумбус, США

70 70 Резюме. Недавно мы сообщили, что острое увеличение Международного нормализованного отношения (МНО) более 3.0 у больных хронической болезнью почек (ХБП) часто связывается с необъясненным острым увеличением уровней креатинина сыворотки крови (СК) и ускоренного прогрессирования ХБП. Биопсия почек у большинства этих пациентов выявила почечно-канальцевую обструкцию обломками эритроцитов. Мы предложили, чтобы это является доминирующим механизмом острого повреждения почки (ОПП), которое мы назвали варфарин связанной нефропaтией (ВСН). Как мы продемонстрировали, ВСН весьма широко распространена и имеет серьезные последствия. Пациенты с ВСН увеличивают показатель смертности от патологии почек. Однако, очень мало известно о патогенезе ВСН, и не существует экспериментальной модели на животных, чтобы изучить механизмы ВСН. В данной работе мы сообщаем, что ВСН создается при модели ХБП путем нефрэктомии 5 / 6 почки. Лечение антагонистами витамина K приводит к увеличенным уровням сывороточного креатинина у крыс с моделью нефрэктомии 5 / 6 почек, но не в контроле. Кроме того, морфологические результаты у 5 / 6 нефрэктомированных крыс выявляют клубочковое кровоизлияние, способствующее попаданию обломков эритроцитов и острому повреждению канальцев, подобно результатам биопсии почек у пациентов с ВСН. Наши результаты указывают на возможность воспроизведения ВСН по крайней мере в одной модели животных (с нефрэктомией 5 / 6 почек), но требуются дополнительные детальные исследования. Ключевые слова: антагонисты витамина К, острое почечное повреждение, экспериментальная модель Introduction: We recently had reported that warfarin therapy can result in acute kidney injury (AKI) by causing glomerular hemorrhage and renal tubular obstruction by red blood cell (RBC) casts (1). We termed this newly recognized syndrome warfarin related nephropathy (WRN). WRN can have dire consequences, particularly in chronic kidney disease (CKD) patients. WRN is a not an uncommon complication of warfarin therapy, which is the most commonly used oral anticoagulant in North America. Warfarin is widely used in patients with different disorders to prevent thrombosis, including patients with chronic atrial fibrillation, prosthetic heart valves, venous thromboembolism, and coronary artery disease. Several adverse effects of warfarin overdose on kidney function have been described,

71 71 including hemorrhages, vasculitis, interstitial nephritis and hematuria (2,3). Most recent publications revealed correlation between the severity of chronic kidney disease and warfarin-associated hemorrhagic complications (4). Our data demonstrated that WRN is a potentially serious complication of warfarin therapy, especially in older patients with underlying chronic kidney injury. Subsequent analysis of 103 patients with chronic kidney disease (CKD) in our Nephrology program revealed that 37 % of patients with the international normalized ratio (INR) >3.0 had a coincidentally unexplained increase in serum creatinine (SC) 0.3 mg / dl (5). These patients, which we designated as the WRN group, had accelerated progression of CKD, as compared to patients without changes in SC associated with INR>3.0. Moreover, our recent data indicates that WRN is common in the general patient population as well. Hence, analysis of consecutive patients treated with warfarin at The Ohio State University Medical Center (OSUMC) showed that 4059 of those had INR>3.0 and approximately 20 % of these patients also had an increase in SC 0.3 mg / dl associated with INR > 3.0 (WRN group). The WRN group had a 1 year mortality rate of 31 % versus 18.9 % in non-wrn group (p<0.001), and a 5 year mortality rate of 42 %, as compared to 27 % for the no-wrn group (p<0.001). For both WRN and no-wrn groups, the 5 year mortality rate was consistently higher in those with CKD compared to those with no-ckd (50.1 % vs % for the WRN cohort; 39.7 % vs % for the no-wrn cohort; p<0.0001) (6). The aim of this study was to develop an animal model of WRN and to characterize kidney morphologic findings and renal function in experimental animals subjected to excessive anticoagulation. Material and methods: All experiments were conducted in accordance with the NIH Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (U. S. Department of Health and Human Services Public Health Services, National Institutes of Health, NIH Publication No , 1985). Male Sprague Dawley rats weighing g were allowed food and water ad libitum. The 5 / 6 nephrectomy was performed under a ketamine / xylazine (6.0 mg / 0.77 mg / 100 g) anesthesia by a nephrectomy of the right kidney and a resection of 2 / 3

72 72 of the left kidney, as it was described earlier (ware). Weekly monitoring of serum creatinine, proteinuria and hematuria was performed. Anticoagulants (brodifacoum (superwarfarin) or warfarin) were given per os (brodifacoum in food pellets, warfarin in drinking water). After anticoagulants administration, of the prothrombin time, SC, proteinuria and hematuria was performed. Statistical analysis was performed using two-way ANOVA and t-test. Results: Brodifacoum affects renal function and results in glomerular hematuria in 5 / 6 nephrectomy rats. Treatment with brodifacoum resulted in progressive hematuria in 5 / 6 nephrectomy, but not in control rats (Figure 1, B). Figure 1. Changes in Serum Creatinine (SC) levels and hematuria in experimental animals treated with brodifacoum (superwarfarin) A Control (square) and 5 / 6 nephrectomy (7 weeks post-surgery, circle) rats were treated with brodifacoum. Serum creatinine levels were measured before (day 0) and daily after the treatment. SC was elevated in 5 / 6 nephrectomy at day 0 and for the duration of the study. B Control (square) and 5 / 6 nephrectomy (7 weeks post-surgery, circle) animals were treated with brodifacoum. Hematuria was measured before and daily after the treatment using DiaScreen reagent strips (Chronimed Inc., Minnetonka, MN). Hematuria was graded using a semiquantitative scale of Score 0 was designated for negative hematuria, score 1+ for mild hematuria, score 2+ for moderate hematuria and score 3+ for large hematuria. * P<0.05 compared to day 0 levels for Panel A and P<0.005 compared to control for Panel B.

73 73 Administration of brodifacoum (superwarfarin) resulted in a significant prothrombin time increase in all experimental animals (5 fold increase from baseline by day 2 and more than 10 fold increase from baseline by day 3). No animal survived beyond day 5 post-treatment. Treatment with brodifacoum (superwarfarin) did not affect renal function in control Sprague Dawley rats either with unilateral nephrectomy (sham operated) or bilateral intact kidneys. SC did not increase (Figure 1, A) and the kidney morphologic findings did not show glomerular hemorrhage or RBC in tubules (Figure 2, B). In contrast, in animals with 5 / 6 nephrectomy, treatment with brodifacoum resulted in a significant increase in SC levels (Figure 1, A) and the kidney morphologic findings included glomerular hemorrhage, occlusive RBC casts and ATN, similar to those identified in patients with WRN (Figure 2, A). Approximately 3 5 % of the nephrons had RBC casts, which is comparable to our data on kidney biopsies from patients (1). Warfarin treatment affects renal function and kidney morphology in 5 / 6 nephrectomy rats in a dose-dependent manner. Warfarin was given in drinking water in the dose of 0.20 mg / kg / 24h for the first week of treatment, 0.5 mg / kg / 24 for the second week of treatment and 1.0 mg / kg / 24 h for the third week of treatment. This regimen resulted in a gradual increase in PT in all experimental groups (p=0.9994) (if a higher warfarin dose was used initially, the PT increase rapidly occurred with the possibility of a life-threatening bleeding). Increase in PT was accompanied by increased hematuria both in control and 5 / 6 nephrectomy rats, but hematuria was more prominent in 5 / 6 nephrectomy rats.

74 74 Figure 2. Morphologic findings in the kidneys obtained from experimental animals treated with brodifacoum are similar to those in patients with warfarin related nephropathy Control (panel B) and 5 / 6 nephrectomy (7 weeks post-surgery, panel A) rats were treated with brodifacoum. The kidneys were obtained on the day 4 post-treatment. Control animals had congested peritubular capillaries (arrows), but no glomerular hemorrhage or red blood cells (RBC) in the proximal or distal convoluted tubules were seen. In contrast, 5 / 6 nephrectomy animals had red blood cells (RBC) in the Bowman s space and RBC casts in the corresponding tubules. Magnification 200x. Hematoxylin- Eosin stain. Warfarin treatment significantly and dose-dependently increased SC levels in 5 / 6 nephrectomy rats treated at weeks 3, 8 or 19 after the ablative surgery. In control rats (without the ablative surgery), warfarin treatment resulted only in fluctuations of serum creatinine (Figure 3, A). Changes in SC levels were correlated with PT changes in 5 / 6 nephrectomy, but not in control rats (Figure 3, B). We hypothesized that AKI associated with excessive anticoagulation with warfarin can be prevented by vitamin K administration. Animals were treated together with warfarin (1.0 mg / kg / 24h) and vitamin K (40 mg / kg / 24h) or vehicle. Warfarin-treated animals receiving vehicle had rapid increase in PT; whereas animals, treated together with warfarin and Vitamin K, did not have increase in PT (Figure 3, C). Treatment with Vitamin K prevented warfarin-associated increase in SC in 5 / 6 nephrectomy rats (Figure 3, D). Animals treated with warfarin and Vitamin K did not have tubular RBC casts and morphologic features of ATN in the kidneys, which were observed in animals treated with warfarin only.

75 75 Figure 3. Changes in serum creatinine levels in animals treated with warfarin and vitamin K. A Serum Creatinine was increasing with PT increase in 5 / 6 nephrectomy (5 / 6 NE), but not in control rats. B serum creatinine (SC) changes were correlated with PT changes in 5 / 6 nephrectomy (square, solid line), but not in control animals (triangle, dotted line). C Warfarin (1.0 mg / kg / 24h) results in increased PT. Co-treatment with warfarin (1.0 mg / kg / 24 h) and vitamin K (40 mg / kg / 24h) prevents this PT increase. D Serum creatinine was increased in 5 / 6 nephrectomy rats treated with warfarin only, but not with warfarin and Vitamin K together Discussion: Herein, we report that WRN can be reproduced in an experimental model. Animals with 5 / 6 nephrectomy (ablative nephropathy) developed AKI after treatment with vitamin K antagonists (brodifacoum (7) and warfarin). They had increased SC levels and acute tubular injury by kidney morphology. In addition, glomerular hemorrhage and occlusive RBC casts were present, which is similar to the findings in kidney biopsies from patients with WRN (1). In contrast, vitamin K antagonists did not affect renal function in control animals, which confirmed our previous observation that in

76 76 order to develop WRN an underlying kidney condition should be present (1, 2). It is difficult to determine pathophysiologic mechanisms of WRN based on these preliminary data. It appears that hematuria is one of the hallmarks of WRN. According to one of the early hypotheses, the formation of microscopic calcium oxalate stones leads to irritation and / or ulceration of the luminal wall of the distal collecting ducts, renal papillae or calyx, resulting in gross hematuria (8). However, this hypothesis can not explain the presence of RBC in the Bowman s space and proximal tubules, which has been observed in our previous studies and in experimental animals. Although glomerular hemorrhage causing tubular obstruction may be an important mechanism, we suggest that likely it is not the only mechanism. Warfarin has been shown to have influences on glomerular mesangial cells by interfering with the activation of the product of growth arrest-specific gene 6 (Gas-6), which may affect glomerular hemodynamics or aggravate the underlying glomerular disease (9, 10). However, we did not find significant differences in GAS-6 expression in the kidneys obtained from animals with excessive anticoagulation and control (data not shown). What we did find that vitamin K antagonists result in an increased number of apoptotic cells, both of endothelial and nonendothelial origin, especially in the glomeruli. This may reflect the basic pathogenic mechanism of WRN, when damage in glomerular endothelial and epithelial cells may lead to glomerular hemorrhage. These factors alone, or in combination, could constitute the WRN syndrome. In conclusion, we are entering complete terra incognita of a previously unrecognized kidney condition. At this moment, very little is known about its pathogenesis and therapeutic approaches for the treatment. Nevertheless, we had demonstrated that this is not an uncommon disease, involving at least 30 % of CKD patients on warfarin therapy who experienced excessive anticoagulation with INR>3.0. These patients have increased mortality rate. The need of an animal model for better understanding the mechanisms of this serious kidney condition is emerging. Our findings indicate that it is

77 77 possible to remodel WRN in at least one animal model of CKD (5/ 6 nephrectomy), but additional detailed studies are required. References: 1. Brodsky SV, Satoskar A, Chen J, Nadasdy G, Eagen JW, Hamirani M, Hebert L, Calomeni E, Nadasdy T. Acute kidney injury during warfarin therapy associated with obstructive tubular red blood cell casts: a report of 9 cases. Am J Kidney Dis. 2009; 54 (6): Avidor Y, Nadu A, Matzkin H: Clinical significance of gross hematuria and its evaluation in patients receiving anticoagulant and aspirin treatment. Urology. 2000; 55 (1): Kapoor KG, Bekaii-Saab T: Warfarin-induced allergic interstitial nephritis and leucocytoclastic vasculitis. Intern Med J. 2008; 38 (4): Limdi NA, Beasley TM, Baird MF, et al. Kidney Function Influences Warfarin Responsiveness and Hemorrhagic Complications J Am Soc Nephrol 2009 Apr;20 (4): Brodsky SV, Collins M, Park E, Rovin BH, Satoskar AA, Nadasdy G, Wu H, Bhatt U, Nadasdy T, Hebert LA. Warfarin Therapy That Results In An International Normalization Ratio Above The Therapeutic Range Is Associated With Accelerated Progression Of Chronic Kidney Disease. Nephron, Clinical practice. 2010;115 (2):c Brodsky SV, Nadasdy T, Rovin BH, Satoskar AA, Nadasdy GM, Wu HM, Bhatt UY, Hebert LA. Warfarin-related nephropathy occurs in patients with and without chronic kidney disease and is associated with an increased mortality rate. Kidney Int Jul;80 (2): Ware K, Brodsky P, Satoskar AA, Nadasdy T, Nadasdy G, Wu H, Rovin BH, Bhatt U, Von Visger J, Hebert LA, Brodsky SV. Warfarin-Related Nephropathy Modeled by Nephron Reduction and Excessive Anticoagulation. J Am Soc Nephrol Oct;22 (10): Fowler WE, Boyarsky S. A possible cause of hematuria in patients taking warfarin. N Engl J Med 315 (1): 65, Yanagita M, Ishii K, Ozaki H, Arai H, Nakano T, Ohashi K, Mizuno K, Kita T, Doi T. Mechanism of inhibitory effect of warfarin on mesangial cell proliferation. J Am Soc Nephrol Dec;10 (12): Yanagita M. Gas6, warfarin, and kidney diseases. Clin Exp Nephrol 8 (4): , 2004.

78 78 УДК: РЕНАЛЬНЫЕ ЭФФЕКТЫ ХЛОРИДА НИКЕЛЯ У КРЫС НА ФОНЕ ГИПОКАЛЬЦИЕМИИ М. Р. Бузоева, В. Б. Брин Институт биомедицинских исследований Владикавказского научного центра РАН и Правительства Республики Северная Осетия- Алания; Россия; г.владикавказ Нами исследовалось влияние экспериментальной гипокальциемии, созданной подкожным введением кальцитонина, на нефротоксичность хлорида никеля у крыс. Кальцитонин инъецировался подкожно в дозе 0,6 ЕД100г в течение 20 дней. Хлорид никеля в дозе 2,5 мг / кг вводили внутрижелудочно также в течение 20 дней. Исследования показали, что на фоне гипокальциемии, вызванной введением кальцитонина, токсическое влияние хлорида никеля на почки усиливается. Ключевые слова: интоксикация хлоридом никеля, гипокальциемия, кальцитонин, функции почек. RENAL EFFECTS OF NICKEL CHLORIDE IN RATS WITH HYPOCALCAEMIA M. R. Buzoeva, V. B. Brin We investigated influence of the experimental hypocalcaemia created by subcutaneous injections of calcitonin, on a nephrotoxity of nickel chloride at rats. Calcitonin was injected hypodermically at a doses 0,6 ЕD / 100 g within 20 days. Nickel chloride in a dose of 2,5 mg / kg was introduced also within 20 days. The experiments showed that in conditions of hypocalcaemia caused by introduction of a calcitonin, toxic influence of nickel chloride on kidneys amplifies. Key words: nickel chloride intoxication, hypocalcaemia, calcitonin, kidney function. Введение. Несмотря на то, что никель является необходимым микроэлементом для обеспечения метаболизма и жизнедеятельности организма, по данным ВОЗ никель включен в офи-

79 79 циальный список экотоксикантов, обладающих канцерогенными свойствами [1, 2]. Никель оказывает мембрано-, ферменто- и генотоксическое действие. Поражает все висцеральные системы, в том числе почки, основной экскреторный орган, нарушение функции которого является индикатором вредных воздействий высоких концентраций цветных и тяжелых металлов на организм [3, 4]. Учитывая известную способность никеля к конкурентным взаимоотношениям ко многим микроэлементам, нами была определена цель нашего исследования. Цель исследования: изучение особенностей развития почечных проявлений интоксикации хлоридом никеля на фоне экспериментальной гипокальциемии, вызванной подкожным введением кальцитонина. Материал и методы исследования. Работа проведена на 50 крысах-самцах линии Вистар, массой 200±300 г. Животные в течение эксперимента находились на стандартном пищевом рационе и имели свободный доступ к воде и пище. Световой режим естественный. Кальцитонин (препарат «Миакальцик») инъецировался ежедневно подкожно в дозе 0,6 ЕД / 100 г массы тела в течение 20 дней. Хлорид никеля вводили внутрижелудочно в дозе 2,5 мг / кг (в пересчете на металл), также ежедневно в течение 20 дней. Опытные животные были подразделены на 4 группы: 1. интактные (фоновые) животные; 2. крысы с подкожным введением кальцитонина (K); 3. животные с интрагастральным введением хлорида никеля (NiCl 2 ); 4. крысы с внутрижелудочным введением хлорида никеля на фоне подкожных инъекций кальцитонина (К+NiCl 2). Для сбора мочи животные помещались в обменные клетки на 6 часов. Затем в условиях спонтанного диуреза определяли объем диуреза, скорость клубочковой фильтрации по клиренсу эндогенного креатинина, рассчитывали канальцевую реабсорбцию воды и электролитов. Содержание натрия и калия в моче и плазме крови определяли методом пламенной фотометрии с помощью пламенного анализатора жидкостей ФАП-2, содержание белка, креатинина и кальция определяли спектрофотоме-

80 80 трически (PV1251C-26) с помощью набора «Кальций-Арсеназо- Агат», «Креатинин-Агат», «Агат-Мед», (Москва Россия). Измеряли осмотическое давление мочи с помощью метода криоскопии на миллиосмометре «Osmomat-2». Результаты опытов обработаны с применением критерия «t» Стьюдента. Полученные результаты. Проведенные исследования показали, что подкожное введение кальцитонина в течение 20 дней приводило к увеличению объема спонтанного диуреза, вследствие возрастания скорости клубочковой фильтрации и уменьшения канальцевой реабсорбции воды. Интоксикация хлоридом никеля также характеризовалась полиурией, что явилось следствием аналогичных изменений основных процессов мочеобразования. Введение соли никеля на фоне инъекций кальцитонина увеличило спонтанный диурез более чем в 3 раза, что было обусловлено значительным угнетением канальцевой реабсорбции воды, и ростом скорости клубочковой фильтрации мочи (рис.1). Диурез Скорость клубочковой фильтрации 0,3 21 0,25 20 мл/час/100г 0,2 0,15 0,1 0,05 мл/час/100г фон К NiCl2 К+NiCl2 15 фон К NiCl2 К+NiCl2 Канальцевая реабсорбция воды ,5 99 % 98, ,5 фон К NiCl2 K+NiCl2 Рис.1. Изменение спонтанного диуреза и основных процессов мочеобразования

81 81 В группе животных с введением кальцитонина наблюдалось увеличение экскреции кальция с мочой, вследствие уменьшения канальцевой реабсорбции катиона. У крыс с интоксикацией хлоридом никеля наоборот, выведение кальция с мочой даже несколько понизилось. В группе с сочетанным введением соли никеля и кальцитонина экскреция кальция резко возросла как относительно фона, так и относительно крыс с гипокальциемией, при этом снижались и канальцевая реабсорбция и фильтрационный заряд катиона (рис.2). Экскреция кальция 0,5 0,4 ммоль/л 0,3 0,2 0,1 0 фон К NiCl2 KNiCl2 Рис.2. Изменение выведения кальция с мочой На фоне введения кальцитонина у животных возрастала экскреция и натрия, и калия с мочой, вследствие увеличения фильтрационного заряда этих катионов. Введение хлорида никеля как интактным животным, так и крысам с экспериментальной гипокальциемией приводило также к увеличению выведения с мочой этих катионов, однако здесь отмечалось снижение канальцевой реабсорбции натрия (табл.). Условия опыта Изменение экскреции электролитов и белка. Таблица ЭКСКРЕЦИЯ кальция натрия калия белка моль / л мкмоль / л мг / час / 100г Фон 0,17±0,015 7,5± 0,64 5,65±0,49 0,09±0,008

82 82 Кальцитонин 0,33±0,012 * 10,27±0,29 * 8,2±0,41 * 0,101±0,007 NiCl 2 0,157±0,011 15,1±0,98 * 7,59±1,01 * 0,12±0,005 * K+NiCl 2 0,45±0,02 * ) ** ) *** 16,3±0,72 * ) ** 9,29±0,22 * 1,21±0,1 * ) ** ) *** * достоверное изменение относительно фона; * достоверное изменение по сравнению с группой 2; * достоверное изменение по сравнению с группой 3. Экскреция белка не изменилась на фоне гипокальциемии. Интоксикация солью никеля вызывала увеличение (p<0,001) экскреции белка и у интактных животных, и в сочетанной модели. Осмолярность мочи снижалась во всех опытных группах. Следовательно полученные результаты позволяют сделать вывод, что нефротоксичность хлорида никеля еще более увеличивается на фоне экспериментальной гипокальциемии. Литература 1. Борисенкова Р. В., Гвоздева Л. Л., Луценко Л. А. Канцерогенная опасность никеля и его соединений (обзор литературы). Медицина труда и промышленная экология г. 1. С Липатов Г. Я., Адриановский В. И., Петрова О. А. Состояние иммунного статуса и пути его коррекции у металлургов в производстве меди и никеля. Медицина труда и промышленная экология г. 3. С Османов И. М. Роль тяжелых металлов в формировании заболеваний органов мочевой системы // Рос. вестн перинатол и педиат С Строчкова Л. С., Юрова А. В., Жаворонков А. А. Влияние никеля на организм животных и человека // Успехи современной биологии Т.103. Вып.1. С.142.

83 УДК: ОСОБЕННОСТИ ВОДНО-СОЛЕВОГО ОБМЕНА У БИАТЛОНИСТОВ В УСЛОВИЯХ ТРЕНИРОВОК НА РАВНИНЕ И В СРЕДНЕГОРЬЕ Л. А. Гиренко, М. С. Головин, Р. И. Айзман Новосибирский государственный педагогический университет, Россия, г.новосибирск Водно-солевой обмен у биатлонистов в условиях среднегорья по сравнению с равниной сопровождался снижением выведения натрия, калия и мочевины, характерный для периода адаптации к условиям высокогорной гипоксии. Увеличение реабсорбции осмотически свободной жидкости в среднегорье приводило к сохранению осмотической концентрации плазмы крови при физических тренировках. Выявлено снижение натрий / калиевого коэффициента слюны в условиях среднегорья, обусловленное повышением кортикостероидной активности при тренировочном процессе. Тренировочный процесс биатлонистов в условиях среднегорья, даже после периода острой адаптации на 14 сутки, вызывал большее напряжение системы регуляции водно-солевого обмена, чем на равнине. Ключевые слова: биатлонисты, высокогорная гипоксия, водно-солевой обмен. CHARACTERISTICS OF WATER-SALT METABOLISM IN BIATHLETES DURING TRAININGS АТ THE PLAIN AND АТ THE MIDDLE L. A Girenko, M. S. Golovin, R. I. Aizman Water-salt metabolism in biathletes in the Midlands compare to the plain has been resulted in a decrease of sodium, potassium and urea and characterised for the period of adaptation to high-altitude hypoxia. Increased reabsorption of fluid-free osmotic water in biathletes at midaltitude area, resulted in maintenance of blood plasma osmotic concentration at physical exercises. Sodium / potassium coefficient of saliva

84 84 was lower in biathletes at mid-altitude area that was due to increased corticosteroid activity during training process. Biathlon training process in mountainous area, even after a period of sharp adaptation 14 days caused higher activity of the system regulating water-salt metabolism than at the plain. Key words: biathletes, high-altitude hypoxia, water-salt metabolism. С целью повышения функциональных резервов организма и подготовки к соревновательным нагрузкам тренировочный процесс у спортсменов нередко проводится в горной местности. Несмотря на то, что имеется ряд данных о перестройке механизмов регуляции водно-солевого обмена и функций почек в условиях высокогорья [2] и к физическим нагрузкам [4], сведений о состоянии данной гомеостатической системы у занимающихся лыжным спортом в процессе тренировочных нагрузок в условиях гипобарической гипоксии в литературе мы не обнаружили. Это и послужило целью настоящей работы. Проведено обследование биатлонистов лет высокой квалификации (кандидаты и мастера спорта) в условиях тренировочного процесса на равнине г. Новосибирск и в среднегорье Кемеровская область, г. Белогорск, 900 м над уровнем моря. Двигательный объем за тренировочные часы в течение дня составлял от 35 до 40 км лыжной нагрузки. Обследуемые (13 чел.) имели гармоничное физическое развитие: рост 178,2±1,46 и 178,5±1,19 см, масса тела 69,9±1,55 и 70,0±1,19 кг, площадь поверхности тела 1,87±0,03 и 1,86 ±0,02 м 2. Исследование водно-солевого гомеостаза проводили на 14 е сутки пребывания в данных условиях местности путем сбора фоновых проб мочи, крови и слюны утром натощак до тренировки. В собранных образцах определяли количество мочи, концентрацию натрия, калия (пламеннофотометрическим методом на приборе BWB-XP), креатинина, мочевины (спектрофотоколориметрическим методом-«spekol»), осмолярность (на осмометре Osmomat-030). Парциальные функции почек рассчитывали по общепринятым формулам [3]. Установлено, что в условиях среднегорья по сравнению с равниной экскреция жидкости практически не отличалась (диу-

85 85 рез, соответственно, составил 0,37±0,03 и 0,33±0,04 мл / мин*м 2 ), тогда как выведение натрия, калия и мочевины снижалось (натрийурез уменьшился с 97,3±11,1 до 71,7±8,0 мкмоль / мин*м 2, калийурез с 23,8±5,1 до 13,8±3,5 мкмоль / мин*м 2, а выведение мочевины уменьшилось с 20,9±2,4 до 9,4±0,9 мг / мин*м 2 ) (Табл.1). Такая ионо- и осморегулирующая реакция характерна для периода адаптации к условиям высокогорной гипоксии и направлена, в первую очередь, на сохранение объема циркулирующей крови. Об этом свидетельствует увеличение реабсорбции осмотически свободной жидкости в среднегорье (с 0,57±0,09 до 0,74±0,08 мл / мин*м 2 ) (табл.1). Такая параллельная реакция способствовала сохранению осмотической концентрации плазмы крови. Так, если на равнине физические тренировки приводили к повышению осмолярности плазмы до 309,1±1,3 мосм / л, то в горах осмолярность составила 301,3±2,4 мосм / л. Тем не менее, осмотический концентрационный индекс в обеих группах обследуемых был практически одинаков (2,99±0,29 против 3,00±0,14) (Табл.1). Снижение натрий / калиевого коэффициента слюны в условиях среднегорья (с 0,77±0,18 до 0,59±0,05) косвенно свидетельствует о повышении минералокортикостероидной активности коры надпочечников при выполнении физической тренировки в этих условиях [1] Таблица 1 Особенности водно-солевого обмена у спортсменов в разных условиях местности тип местности Показатели водно-солевого обмена среднегорье, равнина 900 м Диурез (V), мл / мин*м 2 0,33±0,04 0,37±0,03 Натрийурез (Una*V), mkm / мин*м 2 97,3±7,1 71,7±6,0* Калийурез (Uk*V), mkm / мин*м 2 23,8±3,1 13,8±1,5* Выведение мочевины (Uur*V), мг / мин*м 2 20,9±2,4 9,4±0,9*

86 86 Реабсорбция осмотически свободной жидкости (Т C H 2 O), 0,57±0,09 0,74±0,08* мл / мин*м 2 Осмолярность плазмы (Posm), мосм / л 309,1±1,0 301,3±1,4* Осмотический концентрационный индекс (U/ P osm) 2,99±0,29 3,00±0,14 Натрий-калиевый коэффициент слюны 0,77±0,18 0,59±0,05* Примечание: достоверные различия средних величин рассчитаны по t-критерию Стьюдента и ANOVA для непараметрических независимых выборок: * по отношению к равнинным условиям местности (P 0,05). Таким образом, полученные результаты свидетельствуют, что тренировочный процесс спортсменов в условиях среднегорья, даже после периода острой адаптации на 14 сутки, вызывает большее напряжение системы регуляции водно-солевого обмена, чем на равнине, сопровождаясь повышением ионо- и гидро-реабсорбционных процессов в почке и активацией кортикостероидной функции надпочечников. Литература 1. Колпаков М. Г. Механизмы кортикостероидной регуляции функций организма. Новосибирск: Наука, с. 2. Меерсон Ф. З. Адаптация к высотной гипоксии. //В кн. Физиология адаптационных процессов. М.: Наука, Гл. 4. С Наточин Ю. В. Физиология почки:формулы и расчеты. Л.: Наука, с. 4. Пшенникова М. Г. Адаптация к физическим нагрузкам. М.: Наука, Гл. 3. С

87 УДК ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТОВ КВЕРЦЕТИНА (КОРВИТИНА И ЛИПОФЛАВОНА) НА ТКАНЕВУЮ ФИБРИНОЛИТИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ У КРЫС ПРИ ИХ ОДНОРАЗОВОМ ВВЕДЕНИИ О. М. Горошко, И. И. Заморский, В. Г. Зеленюк Буковинский государственный медицинский университет, Украина, г. Черновцы Резюме. В эксперименте на белых крысах изучено влияние препаратов кверцетина (корвитина и липофлавона) на фибринолитическую активности плазмы крови, мочи и ткани почек крыс. Препараты вводили внутрибрюшинно в дозе 8 мг / кг однократно. Показано, что препараты кверцетина улучшают тканевую фибринолитическую активность у животных. Ключевые слова: острая почечная недостаточность, кверцетин, корвитин, липофлавон, тканевой фибринолиз. THE EFFECT OF QUERCETIN PREPARATIONS (CORVITINE AND LIPOFLAVON) ON THE TISSUE FIBRINOLYTIC ACTIVITY IN RATS IN CASE OF SINGLE ADMINISTRATION O. M. Goroshko, I. I. Zamorskii, V. G. Zeleniuk The effect of quercetin preparations (corvitine and lipoflavon) on fibrinolytic activity of blood plasma, urine and renal tissue was experimentaly studied in white rats. The medicines were administrated once at a dose of 8 mg / kg intraperitoneally. It has been found that quercetin preparations (corvitine and lipoflavon) improve the tissue fibrinolytic activity in animals. Keywords: acute renal failure, quercetin, corvitine, lipoflavone, tissue fibrinolysis. Почки являются важным гомеостатическим органом и их инкреторная деятельность обеспечивает функционирование систем гемостаза, в т. ч. фибринолитической активности. Сис-

88 88 тема фибринолиза тесно связана с функциональной активностью почек. В почках, в свою очередь, синтезируется наиболее активный активатор плазминогена урокиназа. Известно, что фибринолитическая система принимает участие в репарации тканей, овуляции, вживлении эмбриона, макрофагальных реакциях [6]. Роль фибринолитической системы как составляющей противосвертывающей системы крови в организме заключается в препятствии роста тромбоцитов, активации лизиса фибрина, в растворении и выделении внеклеточных отложений фибрина, которые находятся вне кровообращения: в почечных канальцах, моче, желчных путях. Характеристика антифибринолитической системы крови нужна для объективного определения активности фибринолиза в организме, особенно при экстремальных состояниях. При заболевании почек вместе с нарушением их экскреторной деятельности наблюдаются нарушения агрегатного состояния крови и системы фибринолиза. Так, при почечной патологии может отмечаться отложение фибрина в клубочках почек, который вызывает закупорку гломерулярных капилляров и нарушает функции почечных клубочков [3, 7]. Цель исследования: Изучить влияние препаратов кверцетина (водорастворимого корвитин, и липосомального липофлавон) на фибринолитическую активность в моче, плазме крови и ткани почек, при однократном использовании препарата в условиях физиологической нормы. Материалы и методы: Экспериментальные исследования проводились на 21 белой крысе массой г. Подопытные животные были разделены на такие группы: 1 контроль, животным вводили внутрибрюшинно воду для инъекций в объеме, который является эквивалентным количеству раствора препаратов; 2 животные, которым вводили корвитин; 3 животные, которым вводили липофлавон. Препараты корвитин (Борщаговский ХФЗ, Киев, Украина) и липофлавон (Биолек, Харьков, Украина) вводили внутрибрюшинно в дозе 8 мг / кг в пересчете на кверцетин [1, 5]. Животных забивали путем декапитации под легким эфирным наркозом. Забой животных проводили на 12 ч, 24 ч, 48 ч и 96 ч эксперимента. Материалами иссле-

89 89 дования были моча, плазма крови, сыворотка крови, гомогенат почки. Состояние фибринолитической активности определяли на основе реакции с азосоединениями [2]. Результаты исследований обрабатывали статистически с помощью программы «Statgraphics» с использованием t-критерия Стьюдента. Результаты исследования и их обсуждение. Анализ полученных результатов свидетельствует (табл. 1), что корвитин увеличивает фибринолитическую активность плазмы крови. Так, показатели суммарной фибринолитической активности увеличивались в течение всего эксперимента: в 1,4 раза на 12 ч, в 1,2 раза на 24 ч, в 1,9 раза на 48 ч и в 1,8 раза на 96 ч эксперимента. Аналогично увеличивалась неферментативная и ферментативная активность: в 1,4 раза (на 12 ч эксперимента), в 1,1 и 1,2 раза (24 ч), в 1,7 и 2 раза (48 ч), 1,6 и 2 раза (на 96 ч). Липосомальный препарат кверцетина (липофлавон) также увеличивал фибринолитическую активность в плазме крови. При этом увеличивались в течение эксперимента суммарная, неферментативная и ферментативная активность соответственно: на 12 ч в 1,5, 1,4 и 1,6 раза; на 48 ч в 1,8, 1,7 и 2 раза; на 96 ч в 1,5, 1,4 и 1,5 раза. Таблица 1 Влияние препаратов кверцетина на фибринолитическую активность плазмы крови крыс после их одноразового введения (М±m, n=7) Фибринолитическая активность, Е 440 / (мл ч) Контроль Суммарная 2,11±0,10 Липофлавон Неферментативная Ферментативная 1,14±0,05 Корвитин 2,90±0,13 р 1 <0,001 1,64±0,18 р 1 <0,05 0,96±0,08 1,26±0,25 на 12 ч 3,13±0,15# р 1 <0,001 1,61±0,07 р 1 <0,001 1,52±0,09 р 1 <0,001 на 48 ч Корвитин на 24 ч 2,47±0,08 р 1 <0,05 1,30±0,04 р 1 <0,05 1,17±0,06 р 1 <0,05 Липофлавон 2,29±0,09 1,20±0,04 1,09±0,10 на 96 ч

90 90 Суммарная 2,11±0,10 3,94±0,09 р 1 <0,001 3,89±0,13 р 1 <0,001 3,74±0,19 р 1 <0,001 3,10±0,14 р 1 <0,001 Неферментативная 1,14±0,05 2,00±0,06 р 1 <0,001 1,96±0,05 р 1 <0,001 1,82±0,09 р 1 <0,001 1,60±0,07 р 1 <0,001 Ферментативная 0,96±0,08 1,93±0,09 р 1 <0,001 1,93±0,10 р 1 <0,001 1,92±0,17 р 1 <0,001 1,49±0,07 р 1 <0,001 Примечания: 1. р 1 статистически достоверное различие показателей (p 0,05) в сравнении с контролем; 2. # изменения статистически значимы в сравнении с введением другого препарата кверцетина (p 0,05). Относительно влияния препаратов на фибринолитическую активность мочи было установлено, что она изменялась менее выразительно. Так, при применении корвитина достоверный рост ферментативного и неферментативного фибринолиза обусловил повышение суммарной фибринолитической активности мочи на 96 ч эксперимента в 1,8 раза. При использовании липофлавона изменения фибринолитической активности в моче (табл. 2) были также достоверны зарегистрировано ее увеличение: на 12 ч суммарная в 1,3 раза, неферментативная в 1,3 раза и ферментативная в 1,4 раза; на 96 ч эксперимента суммарная в 1,3 раза, неферментативная в 1,3 раза и ферментативная в 1,3 раза. Анализ полученных результатов (табл. 3) свидетельствует о том, что фибринолитическая активность в почках после применения препаратов кверцетина изменялась неоднозначно. Так, суммарная фибринолитическая активность уменьшалась на 12 ч эксперимента за счет уменьшения ферментативной активности как при использовании липофлавона, так и при использовании кверцетина. На 24 ч эксперимента суммарная активность выросла в 1,2 раза в сравнении с контрольными данными при использовании каждого препарата.

91 91 Таблица 2 Влияние препаратов кверцетина на фибринолитическую активность мочи крыс после их одноразового введения (М±m, n=7) Фибринолитическая активность, Е 440 / (мл ч) Контроль Корвитин Суммарная 1,97±0,08 2,06±0,10 Суммарная 1,97±0,08 Липофлавон Неферментативная Ферментативная Неферментативная Ферментативная 1,04±0,04 1,06±0,06 0,93±0,04 1,00±0,11 1,04±0,04 2,45±0,18 р 1 <0,05 1,36±0,10 р 1 <0,05 0,93±0,04 1,09±0,15 на 12 ч 2,58±0,20# р 1 <0,05 1,31±0,11 р 1 <0,05 1,27±0,15 р 1 <0,05 Корвитин 2,31±0,11 р 1 <0,05 1,29±0,06 р 1 <0,01 на 24 ч Липофлавон 2,55±0,21 р 1 <0,05 1,24±0,09 1,02±0,12 1,31±0,20 на 48 ч. на 96 ч. 2,45±0,17 р 1 <0,05 1,26±0,11 1,19±0,07 р 1 <0,01 3,59±0,15 р 1 <0,001 1,83±0,10 р 1 <0,001 1,76±0,06 р 1 <0,001 Примечание. Условные обозначения такие же, как в табл. 1. 2,60±0,14 р 1 <0,01 1,38±0,09 р 1 <0,01 1,22±0,11 р 1 <0,05 Таблица 3 Влияние препаратов кверцетина на фибринолитическую активность в ткани почек крыс после их одноразового введения (М±m, n=7) Фибринолитическая активность, Е 440 / (мл ч) Контроль Корвитин на 12 ч Корвитин на 24 ч Липофлавон Липофлавон Суммарная 32,8±1,2 24,2±1,2 р 1 <0,001 25,7±2,3 р 1 <0,05 39,1±2,1 р 1 <0,05 39,1±1,1 р 1 <0,01 Неферментативная 15,6±1,5 12,9±0,9 13,3±1,2 Ферментативная 17,0±1,7 11,3±0,8 р 1 <0,05 12,3±1,2 р 1 <0,05 20,5±0,7 р 1 <0,05 19,6±1,4 18,5±0,5 19,4±1,8

92 92 на 48 ч на 96 ч Суммарная 32,7±1,2 32,4±2,2 32,1±2,6 35,9±2,1 35,3±3,1 Неферментативная 15,6±1,5 16,1±1,4 15,5±1,1 17,7±1,5 18,6±1,5 Ферментативная 17,0±1,7 16,3±1,5 16,5±2,0 18,3±1,2 16,7±2,0 Примечание. Условные обозначения такие же, как в табл. 1. Неферментативная активность изменялась только после введения корвитина на 24 ч в 1,3 раза. Ферментативная активность изменялась только на 12 ч после введения корвитина. В другие сроки эксперимента достоверных изменений исследованных показателей зарегистрировано не было. Следовательно, при одноразовом введении препаратов кверцетина фибринолитическая активность ткани почек у крыс увеличивается. При этом действие разных препаратов кверцетина на организм животных проявлялось одинаково и в наибольшей мере в плазме крови. Выводы: 1. Оба препарата кверцетина усиливают фибринолитическую активность плазмы крови, мочи и тканей почек у здоровых крыс. 2. Более значительное воздействие препаратов кверцетина наблюдается в плазме крови. 3. Действие препаратов на фибринолитическую активность проявлялось одинаково вне зависимости от лекарственной формы препаратов кверцетина. Литература 1. Аракелян Н. Г. Профілактика та лікування гострої ниркової недостатності: пошук нових підходів / Н. Г. Аракелян, С. Ю. Штриголь // Вісник фармації С Балуда В. П. Физиология системы гемостаза / В. П. Балуда. М.: Медицина, с. 3. Висоцька В. Г. Корекція мелатоніном циркадіанних порушень фібрино літичної та протеолітичної активності тканин нирок / В. Г. Висоцька, В. П. Пішак, Т. І. Кметь. // Буковинський медичний вісник Т. 13, 4. С

93 93 4. Веремеенко К. Н. Протеолиз в норме и патологии / К. Н. Веремеенко, О. П. Голобородько, А. И. Кизим. К.: Здоров я, с. 5. Зупанець І. А. Дослідження гострої токсичності та середньо ефективних доз кверцетину при парантеральному введенні в умовах розвитку ниркової недостатності у щурів / І. А. Зупанець, С. К. Шебеко, Д. С. Харченко // Фармакологія та лікарська токсикологія (8). С Оленович О. А. Корекція порушень функціонального стану нирок при гіпо- та гіпертиреозі (клініко-експериментальне дослідження): дис канд. мед. наук: / АМН України; Інститут проблем ендокринної патології ім. В. Я. Данилевського. Харків, Fibrinolytic status in acute coronary syndromes: Evidence of differences in relation to clinical features and pathophysiological pathways / Shantsila E, Montoro-García S, Tapp L. D. et al. // Thromb. Haemost Vol. 108, N 1. Р УДК: ВЛИЯНИЕ ХРОНИЧЕСКОЙ ФТОРИДНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ НА ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ПОЧЕК К АНТИДИУРЕТИЧЕСКОМУ ГОРМОНУ У КРЫС Джиоев И. Г., Хубулов И. Г., Ураков С. С., Еналдиева Д. А. Северо-Осетинская государственная медицинская академия, Россия, г.владикавказ Ежедневное внутрижелудочное введение крысам линии Вистар фторида натрия в дозе 1,25 мг / кг в течение одного месяца снижает водный диурез в результате торможения скорости клубочковой фильтрации и усиления канальцевой реабсорбция воды. Чувствительность канальцев почек к антидиуретическому гормону сохраняется.

94 94 THE EFFECT OF CHRONIC FLUORIDE TOXICITY ON THE SENSITIVITY OF THE KIDNEYS TO THE ANTIDIURETIC HORMONE IN RATS Djioev I. G., Hubulov I. G., Urakov S. S., Enaldieva D. A. Daily intragastric administration of Wistar rats at a dose of sodium fluoride 1.25 mg / kg for one month reduces water diuresis due to inhibition of glomerular filtration rate and increasing tubular reabsorption of water. Sensitivity to the kidney tubules of antidiuretic hormone is retained. С развитием промышленности загрязнение окружающей среды различными токсикантами постоянно растёт, что негативно отражаться на здоровье человека. И даже те химические вещества, которые необходимы для нормальной жизнедеятельности, при длительном попадании в организм в количествах, превышающих норму, могут вызывать нарушения, приводящие к заболеваниям. Фтор микроэлемент человека (суточная доза взрослого человека около 4 мг), большая часть которого поступает с питьевой водой, принимает участие в костеобразование, особенно зубов и эмали, а также во многих биохимических реакциях в качестве, как активатора, так и ингибитора ферментов (Звягольская И. К., 1991; Matson D. L., et al., 2001; Lubkowska A., et al., 2006; Denbesten P., Li W., 2011). Избыточное поступление фтора в организм человека поражает печень, почки, центральную нервную систему, скелет и угнетает иммунную систему. Так как большая часть фтора выделяется почками, то интерес к их состоянию при фторидной интоксикации закономерен, к тому же научных данных, освящающих состояние почек при этом, весьма мало. Материал и методы. Модель экспериментальной фторидной интоксикации создавалась на крысах линии Вистра путем ежедневного ведением в желудок через зонд раствора фторида натрия в дозе 1,25 / кг массы крыс (Першин Г. Н., Гвоздева Е. И., 1961). Эксперименты проводили в условиях трехчасового водного диуреза (введение водопроводной воды в объёме 5,0 % массы крыс) после недельного, двухнедельного и месячного

95 95 введения фторида натрия. Мочу собирали отдельно по каждому часу и определяли в нём (а также в плазме крови) уровень эндогенного креатинина для последующего расчета скорости клубочковой фильтрации и канальцевой реабсорбции воды. Результаты и их обсуждение. Ежедневное, в течение одной недели, внутрижелудочное введение крысам фторида натрия в дозе 1,25 мг / кг веса, увеличило водный диурез за первые два часа, но особенно за первый, превысив контроль в 1,72±0,13 мл / час / 100г на 30,2 % (р<0,02), за второй час с 1,61±0,11 мл / час / 100г на 22,3 % (р<0,05). За третий час количество выделившейся мочи у экспериментальных крыс был незначительно больше. С продолжением интоксикации еще в течение одной недели отмеченное повышение диуреза проходит, и количество выделившейся мочи за каждый час водного диуреза не отличалось от контроля. Введение фторида натрия до конца месяца достоверно (р<0,001) снизило водный диурез за все три часа: за первый час на 46,6 %, за второй на 51,9 % и на 41,9 % за третий час. С целью выяснения возможной обратимости обнаруженных изменений диуреза у крыс после интоксикации их фторидом натрия, часть животных после каждого эксперимента оставляли, а затем ставили опыты в условиях спонтанного диуреза. Проведенные исследования показали, что отмеченное диуретическое действие семидневной интоксикации фторидом натрия через одну неделю у всех крыс полностью проходило, и диурез не отличался от контроля. После двухнедельного введения фторида натрия диурез у большинства крыс через одну неделю остался на прежнем уровне, близким к контролю, но у четверти (27,0 %) повысился, однако спустя неделю это усиление прошло. У крыс, получавших фторид натрия в течение одного месяца, диурез через одну неделю почти у всех незначительно повысился, еще через одну неделю стал уже достоверно (р<0,05), а спустя один месяц спонтанный диурез стал на 82,4 % (р<0,01) больше результата месячного введения фторида натрия, то есть практически нормализовался. Содержание креатинина в плазме крови у контрольных

96 96 крыс было 81,19±3,46 мкмоль / л, а у экспериментальных через одну неделю интоксикации уровень креатинина увеличился до 89,44±4,21 мкмоль / л, через две недели уже достоверно (р<0,001) превосходил контроль на 42,1 %, а в месячных экспериментах на 75,6 %. Изучение основных процессов мочеобразования, для объяснений наблюдаемых изменений диуреза показало, что недельное введение фторида натрия в условиях водного диуреза стимулировало достоверное повышение скорости клубочковой фильтрации за первый и второй час с 17,56±1,48 мл / час / 100г и 16,75±1,33 мл / час / 100г на 31,5 % (р<0,02) и 37,0 % (р<0,002), а за третий час на 15,2 %, но без достоверного отличия. Суммарная трехчасовая скорость клубочковой фильтрации у экспериментальных крыс (48,09±2,94 мл / 3часа / 100г) превышала результат контроля (61,94±4,75 мл / 3часа / 100г) на 28,8 % (р<0,01). Канальцевая реабсорбция воды за каждый час была незначительно больше контроля. При двухнедельной интоксикации результаты клубочковой фильтрации и канальцевой реабсорбции воды у контрольных и экспериментальных крыс не отличались друг от друга. При завершении экспериментов после месячной интоксикации скорость клубочковой фильтрации за первые два часа водного диуреза снизилась на 29,3 % (р<0,001) и 28,6 % (р<0,001) и на 9,7 % за третий час. Одновременно достоверно (р<0,002) усилилась канальцевая реабсорбция воды с 90,08±0,39 % до 92,51±0,49 % за первый час и с 90,79±0,44 % до 93,67±0,4 % за второй час. В ходе исследований нас заинтересовал вопрос о влиянии фторидной интоксикации на чувствительность канальцевого аппарата почек к антидиуретическому гормону, в качестве которого использовали его синтетический аналог десмопрессин, обладающий выраженным антидиуретическим эффектом на дистальные извитые канальцы и собирательные трубочки. Доза десмопрессина в 0,15 мкг / 100г была эмпирически рассчитана у нас в лаборатории так, чтоб его антидиуретический эффект длился около одного часа.

97 97 Исследования проводили после введения фторида натрия в течение одного месяца, когда у большей части интактных крыс (76 %) десмопрессин блокировал диурез за первый час, а у тех животных, у которых мочеобразование полностью не прекратилось, диурез был равен 0,56±0,04 мл / час / 100г, то есть от исходного уровня, когда количество мочи было равно 1,72±0,13 мл / час / 100г, произошло снижение более чем в три раза. При этом скорость клубочковой фильтрации не изменилась (17,18±1,75 мл / час / 100г контроль, 17,56±1,48 мл / час / 100г опыт), но объём канальцевой реабсорбции воды достоверно (р<0,001) повысился с 90,08±0,39 % до 97,85±0,56 %. Десмопрессин у экспериментальных крыс за первый час блокировал водный диурез у половины крыс, а у остальных он был равен 0,94±0,07 мл / часа / 100 г. При этом скорость клубочковой фильтрации не изменилась она так и осталась сниженной (12,55±1,09 мл / час / 100 г. контроль, 12,16±0,87 мл / час / 100г опыт), но канальцевая реабсорбция воды повысилась (р<0,01). Однако у контрольных крыс повышение было с уровня в 90,08±0,39 % до 97,85±0,56 %, а у экспериментальных с 92,51±0,49 % до 97,22±0,65 %, то есть менее интенсивной. Через один месяц после прекращения интоксикации введение десмопрессина вызвал у 80 % крыс отсутствие диурез за первый час, а у остальных он был снижен, как и у контрольных, до 0,6±0,05 мл / час / 100г, что говорит о сохранении чувствительности почек к антидиуретическому гормону. Выводы 1. Ежедневное внутрижелудочное введение крысам линии Вистар фторида натрия в дозе 1,25 мг / кг в течение одного месяца снижает водный диурез в результате торможения скорости клубочковой фильтрации и усиления канальцевой реабсорбция воды. Через один месяц после прекращения хронической интоксикации диурез нормализуется. 2. Чувствительность канальцев почек крыс, подвергавшихся интоксикации фторидом натрия к антидиуретическому гормону незначительно ослабевает, но через месяц после прекращения интоксикации восстанавливается.

98 98 Литература 1. Звягольская И. К. Изменения продолжительности жизни и некоторых показателей белкового синтеза при экспериментальном флюорозе / Продолжительность жизни, механизмы, прогнозы. Тез. докл. Всесоюз. конф. Киев, С Першин Г. Н., Гвоздева Е. И. Учебник фармакологии. Москва: Медгиз с. 3. Denbesten P., Li W. Chronic fluoride toxicity: dental fluorosis // Monogr Oral Sci Vol.22. P Lubkowska A., Chlubek D., Machoy-Mokrzyniska A. The effect of alternating administration of aluminum chloride and sodium fluoride in drinking water on the concentration of fluoride in serum and its content in bones of rats // Ann Acad Med Stetin Vol.1. P Matson D. L., Bogusky R. T., Garwood M., Acosta G., Cowgill L. D., Schleich T. Localization of fluorums metabolites and sodium ions in the rat kidney // Magn Reson Med Vol.3. P УДК: : ОСОБЕННОСТИ РЕМОДЕЛИРОВАНИЯ ЛЕВОГО ЖЕЛУДОЧКА У БОЛЬНЫХ С ТЕРМИНАЛЬНОЙ ПОЧЕЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТЬЮ. КАРДИОПРОТЕКТИВНОЕ ДЕЙСТВИЕ КОРРЕКЦИИ ПОЧЕЧНОЙ АНЕМИИ Дзгоева Ф. У., Гатагонова Т. М., Кадзаева З. К., Хамицаева О. В., Кочисова З. Х., Олисаева Б. М., Базаева Б. Г., Дзуцева А. Т. Северо-Осетинская государственная медицинская академия, Россия, г.владикавказ Общее число больных составило 105 человек (57 женщин и 48 мужчин в возрасте от 23 до 62 лет), находящихся на программном гемодиализе. Общеклиническое обследование включало определение паратгормона, кальция. фосфора, эритроцитарных индексов, ферритина сыворотки, трансферрина крови. Эхокардиографию с допплерографией проводили на аппарате «Aloka 4000». Для

99 99 оценки геометрии левого желудочка применяли классификацию J. Gottdiener. Терапия включала коррекцию анемии, артериальной гипертензии, нарушений фосфорно-кальциевого обмена. Установлено, что после 18 месяцев лечения у ряда больных отмечено уменьшение выраженности или регрессия гипертрофии левого желудочка (ГЛЖ). Комплексная терапия у находящихся на диализе больных, включавшая антианемические, антигипертензивные препараты, способствовала уменьшению выраженности или регрессии ГЛЖ CHARACTERISTICS OF MYOCARDIAL REMODELLING OF LEFT VENTRICLE IN PATIENTS WITH TERMINAL RENAL I NSUFFICIENCY. СARDIOPROTEKTIVE ACTION OF RENAL ANEMIA CORRECTION Dzgoeva F. U., Gatagonova T. M., Kadzaeva Z. K., Khamitsaeva O. V., Kochisova Z. Kh., Olisaeva B. M., Basaeva B. G., Dzutseva A. T. A total of 105 patients (57 females and 48 males aged years) on hemodialysis participated in the study. The patients were examined clinically with estimation of the levels of parathormone, calcium, phosphorus, erythrocytic indices, serum ferritin, blood transferrin. Echocardiography on Aloka-4000 unit were made. Left ventricular geometry was assessed by J. Gottdiener classification. Therapeutic policy aimed of correction of anemia, arterial hypertension, phosphorus-calcium metabolism. After 18 months of observation and treatment some cases were seen of reduction of systolic blood pressure, achievement of target hemoglobin level, regression of left ventricular hypertrophy (LVH). Combined treatment of hemodialysis patients including antianemic, antihypertensive drugs promoted improvement of LVH or its regression in some cases. Введение. Продолжительность и качество жизни больных с терминальной почечной недостаточностью (ТПН), получающих заместительную почечную терапию (ЗПТ), зависят от множества факторов, среди которых кардиоваскулярные осложнения играют ведущую роль [1,2]. По данным международной статистики, сердечно-сосудистые заболевания составляют более 50 % общей летальности больных с терминальной стадией хронической почечной недостаточности [3]. Распространенность сердечно сосудистой патологии и прежде всего гипертрофии левого желудочка (ГЛЖ), его систолической и диастолической

100 100 дисфункции при хронической болезни почек (ХБП) намного превышает таковую в общей популяции. Так, если в общей частота ГЛЖ составляет в среднем 20 %, то при ХБП она возрастает до % [4]. Более подробный анализ современных данных показывает, что частота ГЛЖ зависит, прежде всего, от стадии ХБП: она выявляется у 20 % больных при снижении скорости клубочковой фильтрации (СКФ) до мл / мин и значительно чаще (у %) при ухудшении фильтрационной функции почек до 25-16мл / мин [5,6]. К началу использования диализа ГЛЖ, признаки систолической, а еще чаще диастолической дисфункции (ДД) ЛЖ выявляются у 70 % больных с хронической почечной недостаточностью [7]. Ускоряют развитие ГЛЖ гиперпаратиреоз, гиперфосфатемия, активация симпатической и ренин ангиотензиновой системы, оксидативный стресс, эндотелин, катехоламины [4,6]. При уремии ГЛЖ характеризуется гибелью кардиомиоцитов с развитием на их месте диффузного интерстициального фиброза, гипертрофией оставшихся кардиомиоцитов и поражением микрососудистой системы миокарда, ведущих к ухудшению перфузии и сократительной функции миокарда [5,7]. Цель исследования: изучить особенности структурнофункциональных изменений миокарда и возможности кардиопротективного действия эритропоэтина при терминальной стадии хронической почечной недостаточности у больных, находящихся на программном гемодиализе. Материалы и методы. В исследование включили 105 больных с терминальной стадией хронической почечной недостаточности ХПН (V стадия хронической болезни почек ХБП), получавших адекватную (согласно критериям NKF KDOQI) терапию с использованием гемодиализа (ГД) и достижением Kt / v 1,37±0,1 (57 женщин и 48 мужчин в возрасте от 23 до 62 лет). Длительность диализной терапии составила от 18 до 46 месяцев. Длительность наблюдения пациентов 18 месяцев. Общеклиническое обследование включало определение уровня альбумина, холестерина крови, электролитного состава крови (натрия, калия), ионизированного кальция, фосфора, паратиреоидного

101 101 гормона (ПТГ), показателей азотистого обмена (креатинина, мочевины), скорости клубочковой фильтрации по формуле MDRD. Для определения вида и тяжести анемии в динамике исследовали показатели гемопоэза на автоматическом (гематологическом) анализаторе: гемоглобин (Нв), гематокрит (Нt), средний объем эритроцита (МСV), содержание Нв в эритроците (МСН), концентрацию гемоглобина в эритроците (МСНС), показатель анизоцитоза (RDWc). Состояние обмена железа определяли по концентрации ферритина сыворотки крови с использованием реактивов фирмы «DRG Internationale, Inc.» (США) и по коэффициенту насыщения трансферрина железом (КНТж). Уровень ферритина <100 нг / мл расценивали как снижение запасов железа в организме, КНТж <20 % как снижение биодоступности железа. Эхокардиографию с допплерографией проводили на аппарате «Aloka 4000». Определяли конечный диастолический диаметр (КДД), конечный диастолический объем (КДО) ЛЖ, индекс конечного диастолического диаметра (ИКДД), толщину задней стенки ЛЖ (ТЗСЛЖ) и межжелудочковой перегородки (ТМЖП), индекс массы миокарда ЛЖ (ИММЛЖ). Массу миокарда левого желудочка рассчитывали по формуле R. B. Devereux: 1,04 [(ТМЖП+ТЗСЛЖ+КДР) 3 КДР 3 ] 13,6. ИММЛЖ рассчитывался как отношение массы миокарда ЛЖ к площади поверхности тела. ГЛЖ диагностировали при ИММЛЖ >125 г / м 2 для мужчин и >110 г / м 2 для женщин. Для оценки геометрии левого желудочка применяли классификацию J. Gottdiener на основании расчета ИКДД и относительной толщины стенки (ОТС) ЛЖ. Согласно ей, ИКДД равен диаметру ЛЖ в конце диастолы, разделённому на площадь поверхности тела. По данной классификации выделяют следующие виды гипертрофии ЛЖ: 1. Концентрическая гипертрофия: ИКДД 3.1см / м 2, ОТС 0,45; 2. Эксцентрическая гипертрофия: ИКДД 3.1 см / м 2, ОТС <0.45; 3. Эксцентрическая дилатационная гипертрофия: ИКДД >3.1 см / м 2, ОТС<0.45; 4. Смешанная (концентрическая дилатационная): ИКДД > 3.1 см / м 2, ОТС 0.45.

102 102 Терапия включала коррекцию анемии, АГ, нарушений фосфорно-кальциевого обмена. Всем больным, находящимся на программном гемодиализе, назначали антианемическую терапию препаратами эритропоэтина (альфа и бета эритропоэтин эпрекс и рекормон) и препаратом парентерального железа (венофер), при которой доза и кратность введения препаратов соответствовали общепринятым рекомендациям и тяжести анемии. Эритропоэтин назначали при исходном уровне Нв <110 г / л, Нt <33 %, венофер при уровне ферритина <100 мкг / л и КНТж <20 %. Целевой уровень АД составлял 130 / 80 мм рт.ст., Нв не менее 110 г / л для женщин и 120 г / л для мужчин, Нt>33 %. Для больным с сахарным диабетом, хронической сердечной недостаточностью (ХСН) целевой уровень Нв не превышал 120 г / л. Статистическую обработку полученных данных проводили методами параметрической и непараметрической статистики. Достоверность различий средних величин при сравнении несвязанных переменных оценивалась с помощью U-теста Манна-Уитни, при сравнении связанных переменных использовали парный критерий Стьюдента. Корреляционный анализ с вычислением коэффициента корреляции r проводили по методу Спирмена. Различия считали статистически значимыми при р<0,05. Пошаговый регрессионный анализ использовался для определения факторов, значимых для изменений параметров ЛЖ Результаты и обсуждение. У подавляющего большинства больных 87 (82,2 %) к началу исследования были выявлены различные варианты ремоделирования миокарда ЛЖ, у 18 (17,1 %) нормальная геометрия ЛЖ. Развитие концентрической ГЛЖ, которую, связывают с адаптацией сердца к гемодинамическим перегрузкам при артериальной гипертензии, отмечено у 32 (30,4 %) из 105 человек. Эксцентрическая ГЛЖ, характеризующаяся утолщением стенок ЛЖ и возникающая при перегрузке объемом, связанной с анемией, отмечена у 35 (33,3 %) больных. Эксцентрическая дилатационная ГЛЖ, то есть ГЛЖ, сочетающаяся с увеличением линейных размеров и объемов левых камер сердца, выявлена у 14 (13,33 %) больных. Наиболее тяжелая ГЛЖ клинически и прогностически концентриче-

103 103 ская дилатационная или смешанная ГЛЖ, характеризующаяся значительным утолщением стенок ЛЖ в сочетании с увеличением его полости, выявлена у 6 (5,7 %) больных. Сравнительная характеристика клинико-лабораторных показателей в зависимости от варианта ремоделирования ЛЖ у больных, находящихся на программном ГД, представлена в табл. 1. Как видно из табл. 1, по мере нарастания тяжести ГЛЖ от концентрической до концентрической дилатационной ГЛЖ нарастала анемия, достигая наибольших значений при дилатационных вариантах ГЛЖ эксцентрической дилатационной ГЛЖ и концентрической дилатационной ГЛЖ. Таблица 1 Клинико-лабораторная характеристика больных в группах, выделенных в зависимости от варианта ГЛЖ, к началу исследования Показатель Нормальная геометрия ЛЖ (n-18) Концентрическая ГЛЖ (n-32) Эксцентрическая ГЛЖ (n-35) Эксцентрическая дилатационная ГЛЖ (n-14) Концентрическая дилатационная ГЛЖ (n-6) Креатинин ммоль / л 0,69±0,03 0,76±0,07 0,71±0,11 0,84±0,05* 0,79±0,07 Hв г / л 122,4±7,3 103,3±4,2* 97,4±7,3* 89,3±8,2** 83,1±4,3** Ht % 33,7±1,1 29,43±1,3* 28,79±1,3** 23,71±1,7** 21,74±2,07*** САД 147,1±3,4 153,4±5,2* 173,7±8,3** 179,2±7,1** 189,4±6,8*** ПАД 64,1±2,3 63,1±3,1 86,1±2,5*** 85,1±3,7*** 99,1±4,3*** Примечание: достоверность различий между показателями при нормальной геометрии и всеми представленными вариантами ГЛЖ: *р<0.05, **p<0.01, ***p<0.001; достоверность различий между концентрической и концентрической дилатационной, эксцентрической и эксцентрической дилатационной ГЛЖ: р<0.05, р<0.01, p<0.001 Уровень показателей Hв и Ht в группах больных с концентрической и эксцентрической ГЛЖ был достоверно ниже, чем в

104 104 группе больных с нормальной геометрией ЛЖ (р<0,05). В группах больных с дилатационными вариантами ГЛЖ уровень Hв и Ht был достоверно ниже, чем у больных с недилатационными вариантами (р<0,05). Гемоглобин является ключевым параметром оценки тяжести анемии, так как он может измеряться прямыми методами, имеет международный стандарт и его уровень не зависит от методики оценки. У 20 из 105 (19%) обследованных больных на начало исследования показатели Нв и Нt были выше целевых уровней: Нв 121,1±8,3 г / л, Нt 35,2±2,9 %. У остальных 85 пациентов (80,9%) была диагностирована анемия (Нв 91,3±7,1 г / л, Нt 25,8±1,2 %), в основном нормохромная, нормоцитарная, характер которой был подтвержден показателями эритроцитарных индексов. В группах больных с наиболее тяжелыми вариантами ГЛЖ эксцентрической дилатационной и концентрической дилатационной ГЛЖ отмечено некоторое снижение концентрации Нв в эритроците (р<0,05). Таким образом, полученные данные подтвердили, что в механизмах развития анемии у обследованных больных основное значение имели нарушение пролиферации и дифференциации эритроидных клеток-предшественников костного мозга, связанное с дефицитом эритропоэтина, или сокращение продолжительности жизни эритроцитов в условиях уремического окружения. Анализ показателей общей гемодинамики выявил достоверное увеличение САД и ПАД, ЧСС в группах больных со всеми вариантами ремоделирования миокарда по сравнению с группой с нормальной геометрией ЛЖ, достигающее наибольших значений при дилатационных вариантах ГЛЖ -эксцентрической дилатационной (p<0.01) и концентрической дилатационной ГЛЖ (p<0.001). Общий период наблюдения и лечения больных, находящихся на программном ГД, составил 18 месяцев. Комплекс исследований был проведен до лечения, через 12 и 18 месяцев. Терапия включала коррекцию анемии препаратами эритропоэтина и парентерального железа, артериальной

105 105 гипертензии, нарушений фосфорно-кальциевого обмена, контроль нутритивного статуса. По окончании исследования все больные были разделены на 4 группы в зависимости от полученных результатов, оцененных по динамике массы миокарда ЛЖ: I группа 18 больных, у которых изначально нормальные показатели ИММЛЖ оставались в пределах нормы до конца исследования; II группа 23 больных с исходно умеренным повышением ИММЛЖ, у которых его значения практически нормализовались к концу исследования; III группа 45 больных с изначально высокими цифрами ИММЛЖ, у которых отмечено статистически значимое снижение его к концу периода исследования; IVгруппа 19 больных с изначально высокими показателями ИММЛЖ, у которых они еще более увеличились к концу исследования. Как видно из таблицы 2, первая группа больных, у которых адекватная антианемическая терапия поддерживала содержание гемоглобина и гематокрит на целевом уровне, характеризовалась наличием нормального ИММЛЖ на протяжении всего периода наблюдения. Во II группе больных, изначально имевших различные варианты ГЛЖ (эксцентрическую и концентрическую), достаточная, по современным представлениям, антианемическая терапия способствовала полной нормализации массы и геометрии ЛЖ. В III группе больных, у которых к началу исследования было установлено наличие как дилатационных, так и недилатационных вариантов ГЛЖ, проводившаяся антианемическая терапия, не приводившая к достижению целевых уровней гемоглобина и гематокрита, способствовала в целом некоторому уменьшению массы миокарда ЛЖ, трансформации у части больных более тяжелых вариантов ГЛЖ в менее тяжелые. У больных IV группы, в течение всего периода наблюдения имевших не корригированную анемию на фоне нелеченной артериальной гипертензии, установлено прогрессирование ГЛЖ с нарастанием числа ее более тяжелых дилатационных вариантов.

106 106 Таблица 2 Распределение больных по типу гипертрофии левого желудочка в группах, выделенных в зависимости от величины ИММЛЖ, до и после лечения ИММЛЖ ГЛЖ II группа III группа IV группа I группа (n-23) (n-45) (n-19) (n-18) умеренно повышенный, повышенный, повышенный, значительно значительно ИММЛЖ не повышенный нормализация улучшение ухудшение до после до после до после до после Нормальная геометрия ЛЖ Концентрическая ГЛЖ Эксцентрическая ГЛЖ Эксцентрическая дилатационная ГЛЖ Концентрическая дилатационная ГЛЖ % % ,9 % 6 26 % % ,7 % 24 53,3 % 10 22,2 % 3 6,6 % 14 31,1 % % 10 22,2 % 3 6,6 % 7 36,8 % 5 26,3 % 4 21 % 3 15,7 % 4 21 % 2 10,5 % 7 36,8 % 6 31,5 % Таким образом, патогенез кардиоваскулярных осложнений при уремии особенно сложный и многофакторный. Вопрос о возможности полной регрессии тяжелых форм гипертрофии и дилатации ЛЖ остается нерешенным. В этой связи, как нам представляется, прежде всего, необходима коррекция почечной анемии, так как тяжелая и недостаточно леченая анемия ведет к систолической и диастолической дисфункции ЛЖ, вызванной повышенной нагрузкой на сердце. Кроме того, оправдано использование ингибиторов АПФ в комбинации с БРА на ранних стадиях почечной недостаточности, поскольку выяснено,

107 107 что они могут замедлять прогрессирование ГЛЖ свойственными им антипролиферативными клеточными и сосудистыми эффектами, способностью улучшать органную микроциркуляцию, снижать экскрецию альбумина с мочой. Литература 1. Мухин Н. А., Моисеев В. С.,Кобалава Ж. Д и др. Кардиоренальные взаимодействия: клиническое значение и роль в патогенезе заболеваний сердечно-сосудистой системы и почек. Тер. архив 2004; 6: Российские рекомендации ВНОК: функциональное состояние почек и прогнозирование сердечно-сосудистого риска. М., С Coll B., Betriu A., Martinez-Alonso M, Borras M. Et al.cardiovascular risk factors underestimate atherosclerotic burden in chronic kidney disease: usefulness of non-invasive tests in cardiovascular assessrnent.nephrol Dial Transplant 2010; 25: Hidekazu Moriya, Takayasu Ohtake and Shuzo Kobayashi. Aortic stiffness, left ventricular hypertrophy and weekly averaged blood pressure (WAS) in patients on haemodialysis.nephrol Dial Transplant 2007; 22: Ritz E. The five most cited NTD articles from 1993 to Nephrol Dial Transplant 2010;25: Bagshaw S. M., Cruz D. N., Aspromonte N. et al. Epidemiology of cardio-renal renal syndromes: workgroup statements from the 7 th ADQI Consensus Conference // Nephrol Dial Transplant Vol. 25 P ; Bock J. S., Gottlieb S. Cardio-renal syndrome. New perspectives // Circulation Vol P

108 108 УДК: : ДИАСТОЛИЧЕСКАЯ ДИСФУНКЦИЯ ЛЕВОГО ЖЕЛУДОЧКА У БОЛЬНЫХ С ТЕРМИНАЛЬНОЙ ПОЧЕЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТЬЮ. КАРДИОПРОТЕКТИВНОЕ ДЕЙСТВИЕ ЭРИТРОПОЭТИНА Дзгоева Ф. У., Гатагонова Т. М., Хамицаева О. В., Олисаева Б. М., Базаева Б. Г., Дзуцева А. Т., Бестаева Т. Л. Северо-Осетинская государственная медицинская академия, Россия, г.владикавказ Резюме. Цель исследования. Уточнить механизмы развития диастолической дисфункции (ДД) левого желудочка (ЛЖ) и возможности кардиопротективного действия коррекции анемии у больных с терминальной почечной недостаточностью. Общее число больных составило 105 человек (57 женщин и 48 мужчин в возрасте от 23 до 62 лет), находящихся на программном гемодиализе. Общеклиническое обследование включало определение паратгормона, кальция, фосфора, эритроцитарных индексов, ферритина сыворотки, трансферрина крови. Эхокардиографию с допплерографией проводили на аппарате «Aloka 4000». Для оценки систолической функции определяли фракцию выброса (ФВ) ЛЖ, диастолической максимальную скорость раннего диастолического наполнения Е, максимальную скорость позднего диастолического наполнения А, Е / А, время изоволюмического расслабления (IVRT) ЛЖ. Терапия включала коррекцию анемии, артериальной гипертензии, нарушений фосфорно-кальциевого обмена. У больных с терминальной почечной недостаточностью определяются нарушения систолической и диастолической функции миокарда. Выраженность их находится в тесной зависимости от тяжести почечной анемии. Адекватная длительная коррекция почечной анемии препаратами эритропоэтина способствует нормализации диастолической функции или реверсии ее более тяжелых форм в менее тяжелые у уремических больных.

109 109 LEFT VENTRICULAR DIASTOLIC DYSFUNCTION IN PATIENTS WITH TERMINAL RENAL INSUFFICIENCY. ERYTHROPOIETIN CARDIOPROTECTIVE ACT Dzgoeva F. U., Gatagonova T. M., Hamitsaeva O. V., Olisaeva B. M., Basaeva B. G., Dzutseva A. T., Bestaeva T. L. To ascertain mechanisms of development of diastolic dysfunction (DD) of the left ventricle (LV) and possible cardioprotective action of anemia correction in patients with end-stage renal disease. A total of 105 patients (57 famales and 48 males aged years) on hemodialysis participated in the study. The patients were examined clinically with estimation of the levels of parathormone, calcium, phosphorus, erythrocytic indices, serum ferritin, and blood transferrin. Echocardiography on Aloka-4000 unit were made for an assessment of systolic function defined fraction of emission of LV, diastolic the early and atrial peak filling velocities (Е,A), Е / А, isovolumic relaxation time of (IVRT) of LV. Therapeutic policy aimed of correction of anemia, arterial hypertension, phosphorus-calcium metabolism. The expressiveness of systolic and diastolic dysfunction of a myocardium is in close dependence on weight of renal anemia in patients with end-stage renal disease. Adequate long correction of anemia promotes normalization of diastolic function or a reversiya of its heavier forms in less heavy at uremic patients. Введение. Частота кардиоваскулярных осложнений при хронической почечной недостаточности (ХПН) значительно превышает таковую в общей популяции, а характер поражения сердца разнообразный и включает как систолическую, так и диастолическую дисфункцию (ДД) миокарда, различные варианты гипертрофии левого желудочка (ГЛЖ) и изменения сосудистой стенки, ведущие к развитию хронической сердечной недостаточности (ХСН) [1,2,4]. ДД состояние, при котором для адекватного заполнения ЛЖ необходимо повышение давления в левом предсердии и легочных венах Нарушение диастолической функции (ДФ) ЛЖ, по данным различных авторов, диагностируется от % до % больных ХПН [3,5]. Течение диастолы зависит от жесткости и растяжимости ЛЖ, а эти два фактора связаны с толщиной миокарда ЛЖ (или степенью ГЛЖ), изменением геометрии

110 110 ЛЖ (видом ГЛЖ), выраженностью интерстициального фиброза и кальцификацией сердечной мышцы [3,7]. В результате ригидности стенок повышается сопротивление наполнению ЛЖ. Со временем ДД может привести к развитию систолической дисфункции ЛЖ [6]. Систолическая дисфункция и клинически и прогностически является более неблагоприятным вариантом дисфункции ЛЖ. Данные разных авторов о частоте нарушений систолической функции у диализных больных весьма противоречивы. Некоторые авторы находят ее признаки у % больных ТХПН, другие считают СД нехарактерной для уремических больных [6,7]. Установлено, что анемия, развивающаяся в результате поражения почек, одновременно является одним из наиболее существенных факторов прогрессирования сердечно сосудистой патологии, проявляющейся структурными изменениями миокарда, ИБС, ХСН у лиц с хронической и терминальной почечной недостаточностью, а адекватная коррекция ее значительно уменьшает риск развития кардиоваскулярных осложнений, а в ряде случаев способствует их обратному развитию. [6,7]. Вместе с тем механизмы кардиопротективного действия коррекции анемии у уремических больных изучены не достаточно. В этой связи целью настоящего исследования явилось уточнение механизмов воздействия коррекции анемии на выраженность диастолической и систолической дисфункции у больных с терминальной почечной недостаточностью, находящихся на программном гемодиализе. Материалы и методы. В исследование включили 105 больных с терминальной стадией хронической почечной недостаточности ХПН (V стадия хронической болезни почек ХБП), получавших адекватную (согласно критериям NKF KDOQI) терапию с использованием гемодиализа (ГД) и достижением Kt / v 1,37±0,1 (57 женщин и 48 мужчин в возрасте от 23 до 62 лет). Длительность диализной терапии составила от 18 до 46 месяцев. Длительность наблюдения пациентов 18 месяцев. Общеклиническое обследование включало определение уровня альбумина, холестерина крови, электролитного состава крови (натрия, калия), ионизирован-

111 111 ного кальция, фосфора, паратиреоидного гормона (ПТГ), показателей азотистого обмена (креатинина, мочевины), скорости клубочковой фильтрации по формуле MDRD. Для определения вида и тяжести анемии в динамике исследовали показатели гемопоэза на автоматическом (гематологическом) анализаторе: гемоглобин (Нв), гематокрит (Нt), средний объем эритроцита (МСV), содержание Нв в эритроците (МСН), концентрацию гемоглобина в эритроците (МСНС), показатель анизоцитоза (RDWc). Состояние обмена железа определяли по концентрации ферритина сыворотки крови с использованием реактивов фирмы «DRG Internationale, Inc.» (США) и по коэффициенту насыщения трансферрина железом (КНТж). Уровень ферритина <100 нг / мл расценивали как снижение запасов железа в организме, КНТж <20 % как снижение биодоступности железа. Эхокардиографию с допплерографией проводили на аппарате «Aloka 4000». Для оценки систолической функции определяли фракцию выброса (ФВ) ЛЖ, диастолической максимальную скорость раннего диастолического наполнения Е, максимальную скорость позднего диастолического наполнения А, Е / А, время изоволюмического расслабления (IVRT) ЛЖ. ГЛЖ диагностировали при ИММЛЖ >125 г / м 2 для мужчин и >110 г / м 2 для женщин. Для оценки геометрии левого желудочка применяли классификацию J. Gottdiener на основании расчета индекса конечного диастолического диаметра (ИКДД) ЛЖ и относительной толщины стенки (ОТС) ЛЖ. Согласно ей, ИКДД равен диаметру ЛЖ в конце диастолы, разделённому на площадь поверхности тела. По данной классификации выделяют следующие виды гипертрофии ЛЖ: концентрическая гипертрофия, эксцентрическая гипертрофия, эксцентрическая дилатационная гипертрофия, смешанная (концентрическая дилатационная) гипертрофия. Исследования функционального состояния ЛЖ проводили на второй день после ГД, в относительно нормоволюмическом состоянии. Терапия включала коррекцию анемии, АГ, нарушений фосфорно-кальциевого обмена. Всем больным, находящимся на программном гемодиализе, назначали антианемическую терапию препаратами эритропоэтина (альфа и бета эритропо-

112 112 этин эпрекс и рекормон) и препаратом парентерального железа (венофер), при которой доза и кратность введения препаратов соответствовали общепринятым рекомендациям и тяжести анемии. Эритропоэтин назначали при исходном уровне Нв <110 г / л, Нt <33 %, венофер при уровне ферритина <100 мкг / л и КНТж <20 %. Целевой уровень АД составлял 130 / 80 мм рт.ст., Нв не менее 110 г / л для женщин и 120 г / л для мужчин, Нt>33 %. Для больных с сахарным диабетом, хронической сердечной недостаточностью (ХСН) целевой уровень Нв не превышал 120 г / л. Статистическую обработку полученных данных проводили методами параметрической и непараметрической статистики с помощью U-теста Манна-Уитни, парного критерия Стьюдента. Корреляционный анализ с вычислением коэффициента корреляции r проводили по методу Спирмена. Различия считали статистически значимыми при р<0,05. Результаты и обсуждение. У подавляющего большинства больных 87 (82,2%) к началу исследования были выявлены различные варианты ремоделирования миокарда ЛЖ, у 18 (17,1%) нормальная геометрия ЛЖ. Сравнительная характеристика клинико-лабораторных показателей в зависимости от варианта ремоделирования ЛЖ у больных, находящихся на программном ГД, представлена в табл. 1. Как видно из табл. 1, по мере нарастания тяжести ГЛЖ от концентрической до концентрической дилатационной ГЛЖ нарастала анемия и артериальная гипертензия (АГ), достигавшие наибольших значений при дилатационных вариантах ГЛЖ эксцентрической дилатационной ГЛЖ и концентрической дилатационной ГЛЖ. Анемия была в основном нормохромная, нормоцитарная, характер которой был подтвержден показателями эритроцитарных индексов. Обращало на себя внимание достоверное снижение показателей, отражающих инотропную функцию сердца в группах больных с наиболее тяжелыми вариантами ГЛЖ эксцентрической дилатационной (p<0.01) и концентрической дилатационной (p<0.01), в которых ФВ уменьшилась по сравнению с больными с нормальной геометрией ЛЖ.

113 113 Таблица 1 Клинико-лабораторная характеристика больных в группах, выделенных в зависимости от варианта ГЛЖ, к началу исследования Показатель и нормы Креатинин ммоль / л Нормальная геометрия ЛЖ (n-18) Концентрическая ГЛЖ (n-32) Эксцентрическая ГЛЖ (n-35) Эксцентрическая дилатационная ГЛЖ (n-14) Концентрическая дилатационная ГЛЖ (n-6) 0,69±0,03 0,76±0,07 0,71±0,11 0,84±0,05* 0,79±0,07 Hв г / л 122,4±7,3 103,3±4,2* 97,4±7,3* 89,3±8,2** 83,1±4,3** Ht % 33,7±1,1 29,43±1,3* 28,79±1,3** 23,71±1,7** 21,74±2,07*** САД 147,1±3,4 153,4±5,2* 173,7±8,3** 179,2±7,1** 189,4±6,8*** ПАД 64,1±2,3 63,1±3,1 86,1±2,5*** 85,1±3,7*** 99,1±4,3*** ФВ (> 60 %) 69,25±2,3 53,72±5,2** 54,46±3,6** 43,31±3,1*** 46,93±6,5*** Е (0,8 1,3м/ с) А (0,5 0,8 м / с) 0,77±0,05 0,51±0,04*** 0,78±0,07 0,76±0,08 1,33±0,09*** 0,49±0,03 0,92±0,04*** 0,53±0,04 0,52±0,02 0,41±0,02* Е / А (1 2,5) 1,59±0,06 0,55±0,08*** 1,46±0,09 1,46±0,1 3,0±0,04*** IVRT (55-90мс) 87,7±3,2 109,6±4,4*** 104,8±3,3 103,4±4,9* 53,2±4,7*** Примечание: достоверность различий между показателями при нормальной геометрии и всеми представленными вариантами ГЛЖ: *р<0.05, **p<0.01, ***p<0.001; достоверность различий между концентрической и концентрической дилатационной, эксцентрической и эксцентрической дилатационной ГЛЖ: р<0.05, р<0.01, p<0.001 Диастолическая функция оставалась сохранной в группе больных с нормальной геометрией ЛЖ. В группе больных с концентрической ГЛЖ показатели трансмитрального кровотока (ТМК) свидетельствовали о преимущественном развитии ДД I типа нарушении релаксации у 23 человек. Показатели ДФ в группе больных с эксцентрическими вариантами ГЛЖ свидетельствовали о наличие как I типа ДД (у 4 больных с эксцентри-

114 114 ческой ГЛЖ), так и II типа ДД псевдонормального, который преобладал в обеих группах больных (у 31 при эксцентрической и 9 при эксцентрической дилатационной ГЛЖ). Диагностировать псевдонормальный тип ДД и дифференцировать его с нормальным ТМК позволяла сниженная ФВ, выраженная анемия на фоне тяжелых форм ГЛЖ, при которых нарушается диастолическое наполнение ЛЖ, а анемия способствует, как показали проведенные исследования, ускорению пика Е, возможно, за счет снижения вязкости крови и силы трения, что способствовало нормализации показателей ТМК в группе больных с псевдонормальным типом ДД: Е / А >1 при увеличении IVRT до 104,8±3,3 (p<0.01) и 103,4±4,9 (p<0.01) соответственно при эксцентрической и эксцентрической дилатационной ГЛЖ. В группе больных с концентрической дилатационной ГЛЖ изменения диастолической функции характеризовались увеличением по сравнению с нормой максимальной скорости раннего диастолического наполнения Е до 1,33±0,09 (p<0.001), снижением максимальной скорости позднего диастолического наполнения А до 0,41±0,04 (p<0.05), что свидетельствовало о развитии преимущественно рестриктивного варианта ДД. Таким образом, у обследованных нами пациентов на начало исследования была выявлена высокая частота сердечно-сосудистых осложнений, в том числе артериальной гипертензии, снижения ФВ ЛЖ, различных вариантов ГЛЖ, нарушения диастолической функции ЛЖ. При этом исходный уровень Нв и Ht у значительной части больных был достоверно ниже рекомендуемого в настоящее время для больных с терминальной почечной недостаточностью. По окончании исследования и лечения все больные были разделены на 4 группы в зависимости от полученных результатов, оцененных по динамике массы миокарда ЛЖ: I группа 18 больных, у которых изначально нормальные показатели ИММЛЖ оставались в пределах нормы до конца исследования; II группа 23 больных с исходно умеренным повышением ИММЛЖ, у которых его значения практически нормализовались к концу исследования; III группа 45 больных с изначально вы-

115 сокими цифрами ИММЛЖ, у которых отмечено статистически значимое снижение его к концу периода исследования; IV груп- па 19 больных с изначально высокими показателями ИММЛЖ, у которых они еще более увеличились к концу исследования. В дальнейшем для уточнения механизмов выявленного в I, II и III группах больных кардиопротективного действия проведенной в течение 18 месяцев антианемической терапии, а также причин отсутствия положительного эффекта от проведенного лечения в IV группе больных, было проанализировано состояние гемопоэза, клинико-лабораторных показателей, данных эхокардиографического и допплерографического исследования ЛЖ, состояния систолической и диастолической функции ЛЖ в динамике у больных в каждой выделенной группе I, II, III и IV в отдельности (табл.2). 115 Таблица 2 Динамика показателей гемопоэза, общей гемодинамики, функциональных параметров ЛЖ в выделенных группах больных до и после лечения I группа (n-18) II группа (n-23) III группа (n-45) IV группа (n-19) до после до после до после до после Hв 104,3±3,6 119,5±4,3* 97,4±4,2 123,4±4,8** 87,3±2,27 98,7±3,1** 85,1±2,8 82,8±1,3 Ht 29,4±0,26 32,0±0,73** 26,7±1,21 32,7±1,17* 23,7±1,24 27,9±1,37* 28±0,7 27,0±0,6 САД 149,6±4,7 130,1±3,2** 157,7±5,9 133,4±4,2** 167,1±4,3 152,4±5,9* 195,3±7,2 191,4±8,4 ПАД 56,1±1,04 49,57±2,4* 58,5±3,2 40,2±4,7** 85,1±2,6 66,1±2,0** 88,1±4,6 84,7±5,8 ФВ 64,6±2,1 67,7±1,9 57,2±2,6 65,7±3,2* 39,1±1,2 44,1±1,8* 43,7±1,9 38,1±1,6* Е / А 1,35±0,02 1,24±0,04** 0,66±0,03 2,0±0,01** 0,85±0,01 1,15±0,04** 2,04±0,04 2,92±0,04* IVRT 82,6±4,1 86,4±3,2 117,1±6,3 84,5±3,1** 110,5±4,3 99,0±2,9* 78,6±5,2 64,9±3,9* ФК ХСН 1,33±0,21 1,01±0,11 1,85±0,19 1,32±0,14* 3,07±0,71 2,54±0,42 3,45±0,11 3,81±0,13* Примечание: достоверность различий между показателями внутри каждой группы до и после лечения: *р<0.05, **p<0.01.

116 116 Как свидетельствуют сравнительные данные клинико-лабораторных показателей и параметры функциональной характеристики миокарда ЛЖ до и после 18 месяцев лечения, уровень Нb в I и II группах был относительно сохранным, увеличился до целевых значений (110 и 120 г / л у женщин и мужчин соответственно) и поддерживался на нем в течение всего периода наблюдения. В III группе уровень Нb изначально был снижен, в процессе наблюдения и лечения достоверно повысился в среднем с 87,3 до 98,7 г / л, не достигнув при этом целевого уровня. В IV группе больных исходно низкий уровень Нb еще более снизился с 85,1 до 82,8 г / л. Уровни САД и ПАД в начале обследования в I группе составили 149,6 и 56,1 мм рт. ст., во II группе в среднем 157,7 и 58,5 мм рт. ст. соответственно. Наиболее выраженной АГ была в III и IV группах, у ряда больных достигая значений злокачественной. В течение 18 месяцев наблюдения и лечения АПФ-ингибиторами, блокаторами рецепторов ангиотензина II, ß-блокаторами средние значения САД и ПАД, измерявшееся после восстановления объема внеклеточной жидкости (то есть в относительно нормоволюмическом состоянии на второй день после процедуры гемодиализа) достоверно снизились, достигнув целевых уровней 130 и 133 мм рт. ст. и 49 и 40 мм рт. ст. соответственно в I и II группах. В III группе больных САД и ПАД также достоверно снизились, не достигая при этом целевых значений. В IV группе больных с прогрессировавшей ГЛЖ за период наблюдения и лечения САД и ПАД, измерявшиеся в аналогичном режиме, незначительно снижались и составили в среднем 191 и 84 мм рт. ст. соответственно, значительно превысив целевые значения. Показатели систолической ФВ и диастолической функции (Е/ А, IVRT) были заметно изменены в III и IV группах как до, так и после лечения. Распределение больных по типу диастолической дисфункции в группах больных в зависимости от величины ИММЛЖ, до и после лечения, представлено в табл.3 Как свидетельствуют данные табл.3, у больных I и II группы, получавших адекватную антианемическую терапию с достижением целевых уровней Нв и Ht, ДФ оставалась либо сохранной, либо нормализовалась с трансформацией более тяжелых типов

117 117 ДД в менее тяжелые. У больных III группы, имевших различные варианты ДД, включая наиболее тяжелый рестриктивный, на фоне достоверного, но не достигавшего целевых значений, повышения уровней Hв и Ht, отмечена нормализация диастолической дисфункции у 3 из 45 больных, у части остальных больных установлена реверсия более тяжелых форм ДД в менее тяжелые. В IV группе больных, у которых на протяжении всего периода наблюдения констатировали низкие показатели Hв и Ht, значительно меньшие целевых уровней, ухудшение ДФ проявилось в трансформации ДД I типа во II тип ДД, в увеличении числа больных с наиболее тяжелым рестриктивным вариантом ДД. Таблица 3 Распределение больных по типу диастолической дисфункции в группах больных в зависимости от величины ИММЛЖ, до и после лечения Варианты ДД I группа n-18 II группа n-23 III группа n-45 IV группа n-19 до после до после до после до после Нормальная ДФ Нарушение релаксации Псевдонормальный тип Рестриктивный тип % % % % 2 9 % % 2 9 % % 5 11 % 1124 % 3 16 % % 6 13 % % % 9 47 % 4 9 % 6 31 % % Таким образом, у больных с терминальной почечной недостаточностью определяются нарушения систолической и диастолической функции миокарда, в значительной мере определяющие тяжесть кардиоваскулярных осложнений у пациентов, находящихся на гемодиализе. Выраженность структурно-функциональных изменений миокарда у больных с терминальной почечной недостаточностью находится в тесной прямой зависимости от степени почечной анемии. Адекватная длительная

118 118 коррекция почечной анемии препаратами эритропоэтина и внутривенного железа на фоне коррекции артериальной гипертензии ведет к коррекции систолической и диастолической дисфункции у больных с терминальной почечной недостаточностью, находящихся на программном гемодиализе. Литература 1. Шутов А. М., Мардер Н. Я., Хамидулина Г. А., Машина Т. В. Диагностика диастолической сердечной недостаточности у больных с хронической болезнью почек // Нефрология С Капелько В. И. Диастолическая дисфункция. // Кардиология Т С Drueke T. B., Locatelli F., Clype N., et al. Normalization of hemoglobin level in patients with CKD and anemia // N. Engl. J. Med Р Foley R. N, Murray A. M., Li S. et al. Chronic Kidney Disease and the Risk for Cardiovascular Disease, Renal Replacement, and Death in the United States Medicare Population, 1998 to // J. Am. Soc. Nephrol Vol. 16. P Srivastava P., Thomas M., Calafiore P. et al. Diastolic dysfunction is associated with anaemia in patients with Type II diabetes // Clin. Sci. (Lond.) Р Kazory A., Ross E. A. Anemia: the point pf convergence or divergence for kidney disease and heart failure // J Am Coll Cardiol Vol. 53. P McCullough P. A., Haapio M., Mankad S. et al. Prevention of cardio-renal syndromes: workgroup statements from the 7 th ADQI onsensus Conference // Nephrol Dial Transplant Vol.25; P

119 УДК ВЛИЯНИЕ СУЛЬФАТА КАДМИЯ НА ФУНКЦИЮ ПОЧЕК И ГЕМОДИНАМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ У КРЫС Дзугкоева Ф. С., Дзугкоев С. Г., Такоева Е. А., Можаева И. В. Институт биомедицинских исследований ВНЦ РАН и Правительства РСО-Алания, Россия, г. Владикавказ Сульфат кадмия как ион с переменной валентностью может индуцировать образование активных метаболитов кислорода, инициирующих ПОЛ. В результате образуются первичные, промежуточные и конечные продукты ПОЛ, оказывающие повреждающее действие на фосфолипиды клеточных мембран. Мембранотоксическое действие приводит к изменению водо- и электролитовыделительной функции почек. В качестве мишени может быть мембранный фермент Na,K-АТФ-аза. INFLUENCE OF THE SULPHATE CADMIUM ON FUNCTION OF KIDNEYS AND HAEMODYNAMIC INDICATORS IN EXPERIMENT AT RATS Dzugkoyeva F. S., Dzugkoyev S. G., Takoeva E. A., Mozhayeva I. V. Cadmium sulfate as an ion with variable valence induces the development of active metabolites of oxygen and stimulizes processes of lipid peroxidate oxidation (LPO) in cellular membranes. Developing initial, intermediate and final products of LPO provide damaging action on phospholipids of cytoplasmatic membranes. Membranotoxic action in nephron structures result in the change of water and electrolyte excretory function of kidneys. As a influence target appears to be memraneous enzyme. Введение. Актуальность изучения особенностей влияния на человека ионов тяжелых металлов, поступающих из объектов производственной и окружающей среды, на сегодняшний день определяется значительным загрязнением ими природной

120 120 среды, их стойкостью, способностью к кумуляции в объектах биосферы и высоким риском накопления в организме. Одним из таких токсикантов является кадмий и его соединения, которые относятся к политропным ядам, оказывающим влияние на многие функции и системы живых организмов [6,7]. По оценке ВОЗ, потенциал техногенного загрязнения окружающей среды солями кадмия возрос примерно в 5 раз. Это связано как с увеличением применения этого металла и его соединений в промышленности, так присутствием кадмия в различных материалах и природном сырье, использование и переработка которых сопровождаются поступлением металла в окружающую среду. Пары кадмия, образуемые при плавлении, являются чрезвычайно опасными и представляют собой основную причину острых смертельных интоксикаций этим элементом. Попадая в организм кадмий, накапливается даже при минимальном его поступлении, а при достижении критической концентрации инициирует токсический процесс, проявляющийся поражением дыхательной системы, почек, иммуносупрессией и канцерогенезом [1,2,3,4,5]. Кадмий очень медленно выводится из организма, что обусловлено его способностью образовывать депо в паренхиматозных органах, и длительным периодом полувыведения более 10 лет. Сd обезвреживается как ксенобиотик в печени, повреждая её и выделяется через органы выделения почки [2]. После развития нефропатии происходит значительное увеличение выведения кадмия с мочой в комплексе с металлотионеином. Будучи металлом с переменной валентностью, он повышает уровень свободных радикалов: перекиси водорода, супероксид-аниона и др., способных инициировать процессы свободно-радикального окисления [1]. Процесс пероксидации может приводить к повреждению мембран, что проявляется изменением их проницаемости, ингибированием мембраносвязанных ферментов, в частности Na,K-АТФ-азы и полным нарушением жизнедеятельности клеток [1,3,4]. Однако в доступной литературе отсутствуют комплексные исследования, посвященные изучению функциональной способности почек, микроциркуляторных нарушений в нефроне и периферических сосудах,

121 121 свободнорадикального окисления (СРО) и антиоксидантной защиты (АОЗ) клеток в динамике на фоне хронической интоксикации сульфатом кадмия в эксперименте. Цель исследования: изучение водо- и электролито-выделительной функции почек, гемодинамических изменений и интенсивности сопряженной системы ПОЛ-АОС на фоне хронической кадмиевой интоксикации в эксперименте. Материал и методы исследования. Исследования проводились на 188 крысах самцах линии Wistar одной возрастной группы (10 14 мес.), массой грамм интактных и с интоксикацией сульфатом кадмия. Хроническую кадмиевую интоксикацию вызывали путем ежедневного парентерального введения раствора сульфата кадмия в дозах 0,8; 1,0 и 1,5 мг / кг массы животного в течение 2 недель и 1 месяца. Во время экспериментов крысы находились на стандартном пищевом рационе со свободным доступом к воде, световой режим естественный. В качестве объектов исследования использовали плазму крови, эритроциты, гомогенаты коркового и мозгового вещества почечной ткани, мочу. Эксперименты проводили в хронических опытах, в одно и то же время суток, сезоны года. Исследовали влияние кадмиевой интоксикации на основные процессы мочеобразования: скорость клубочковой фильтрации по клиренсу эндогенного Cr, рассчитывали канальцевую R н2о в %, используя формулы Ю. В. Наточина (1974 г.). Для анализа электролито-выделительной функции почек определяли экскрецию Na и К с мочой, их концентрацию в крови, Фз ионов, рассчитывали канальцевую R Na в %. Изучали активность Na +,K + -АТФазы в корковом и мозговом слоях почечной ткани по приросту неорганического фосфора в среде инкубации по методу Scou ТС (1957). Для выяснения патогенетического механизма выявленных нарушений исследовали интенсивность перекисного окисления липидов в мембранах эритроцитов и в гомогенатах коркового и мозгового вещества почечной ткани по данным изменения концентрации малонового диальдегида, определяемого методом Аsakаwa T., (1980). О состоянии антиокислительной защиты судили по активности СОД, которую определяли мето-

122 122 дом аутоокисления адреналина и каталазы в сыворотке крови, определяемую методом М. А. Королюка и соав., (1988). Влияние сульфата кадмия на различные звенья сосудистой системы: магистральные сосуды и микроциркуляторное звено изучали в 6 точках локации. Кровоток регистрировали ультразвуковым портативным допплерографом ММ-Д-Ф фирмы «МИНИМАКС» на наркотизированных интактных животных и крысах с кадмиевой интоксикацией. Для каждой зоны локации прибор регистрировал основные параметры кровотока: среднюю (М), систолическую (S) и диастолическую (D) скорости кровотока, пульсовой индекс (Pi), градиент давления (GD). Весь полученный материал подвергали статистической обработке с использованием t-критерия Стьюдента на ПК типа IBM РС с использованием программы Microsoft Excel, проводили корреляционный анализ. Результаты исследования. Изучение водо-выделительной функции почек на фоне подкожного введения разных дозировок сульфата кадмия во всех исследуемых группах экспериментальных животных показало, что происходит достоверное повышение спонтанного диуреза. Анализ данных основных процессов мочеобразования показал, что скорость клубочковой фильтрации изменялась не достоверно, тогда как канальцевая реабсорбция воды снижалась. Следовательно, увеличение объема диуреза обусловлено статистически достоверным снижением уровня канальцевой реабсорбции воды. На фоне 5 % водной нагрузки почасовые изменения диуреза приводят к тому, что суммарный трёхчасовой диурез статистически достоверно снижается у животных при парентеральном введении сульфата кадмия как в течение 2 недель и 1 месяца, что свидетельствует о нарушении функциональной способности почек. Исследование электролито-выделительной функции показало, что происходит повышенная экскреция натрия и калия с мочой. Ответственным за повышенную экскрецию натрия является снижение канальцевой реабсорбции катиона, тогда как величина его фильтрационного заряда у исследуемых животных оказалась сниженной. На фоне 5 %

123 123 водной нагрузки почасовые изменения приводят к достоверному снижению суммарной экскреции с мочой, как натрия, так и калия. При этом отмечается снижение концентрации натрия и калия в плазме крови. Для выяснения механизма нарушенного транспорта Na мы исследовали активность Na +,К + -АТФаза почечного канала. Данные показали снижение активности данного фермента, как гомогената коркового, так и мозгового вещества почек. Кадмиевая интоксикация сопровождается активацией процессов ПОЛ. Количественная оценка процессов липопероксидации в клетках крови, гомогенатах тканей почки в динамике экспериментальной кадмиевой нефропатии выявила повышение концентрации вторичного продукта ПОЛ МДА в мембранах эритроцитов. Сравнительный анализ этого параметра на фоне экспозиции сульфатом кадмия в разных дозировках обнаруживает дозозависимость. Аналогичные изменения выявлены и в клетках почечной ткани: происходит достоверное повышение концентрации МДА как в корковом, так и в мозговом веществе почечной ткани во всех вариантах исследований. Более выраженное повышение активности ПОЛ отмечается при кадмиевой интоксикации в дозе 1,5 мг / кг в течение 1 месяца. Поскольку во взаимосвязи с процессами свободнорадикального окисления находится антиокислительная система организма, основная функция которой заключается в ограничении процессов перекисного окисления липидов практически во всех его звеньях, поэтому для оценки реакции системы антиоксидантной защиты организма в условиях окислительного стресса при хронической кадмиевой интоксикации, мы определяли активность супероксиддисмутазы, превращающей супероксиданионрадикал в перекись водорода и одновременно каталазы, расщепляющей Н 2 О 2 до молекулярного О 2 и Н 2 О. Данные показали достоверное снижение активности супероксиддисмутазы, хотя отмечалось повышение активности каталазы в сыворотке крови. Эти данные свидетельствуют о том, что причиной активации процессов ПОЛ наряду с образованием активных метаболитов кислорода, является угнетение антиокислительной

124 124 системы клеток, что проявляется угнетением активности супероксиддисмутазы, хотя происходило компенсаторное повышение активности каталазы. Усиление процессов липопероксидации при кадмиевой интоксикации вызывает дезинтеграцию липопротеиновых комплексов, усиливает их гидрофильность и приводит к нарушению проницаемости мембраны и изменению конформации мембраносвязанного фермента Na +,К + -АТФ-азы. Анализ взаимосвязи между повышением концентрации МДА и снижением активности Na +,К + -АТФ-азы в клетках почечной ткани выявил отрицательную корреляционную связь между интенсивностью перекисного окисления липидов и активностью Na +,К + -АТФ-азы в корковом (r= 0,788) и мозговом веществе почечной ткани (r= 0,725). Кроме того, нами установлены однонаправленные изменения процессов липопероксидации в эритроцитах и клетках почечной ткани. При исследовании характера кровотока в микроциркуляторном русле выявлено повышение упруго-эластических свойств сосудистой стенки индекса Гослинга (PI), а также реографического индекса (Ri индекс Пурсело), свидетельствующий о нарастании регионарного периферического сосудистого сопротивления. Эти изменения сосудистого сопротивления способствовали повышению средней скорости кровотока вследствие ускорения систолической скорости в магистральных сосудах (БА, ПА). Что касается кровотока в НПВ, то он характеризуется снижением средней и систолической скоростей кровотока, что свидетельствует о венозном застое. Выводы. Таким образом, на фоне экспозиции сульфатом кадмия развивается окислительный стресс, сопровождающийся образованием АМК, активацией ПОЛ и недостаточностью АОС. Образующийся избыток МДА повреждает структурнофункциональную организацию нефрона и нарушает водо- и электролито-выделительную функции почек. Продукты ПОЛ оказывают повреждающее действие на эндотелий сосудов, вызывая его дисфункцию и изменение тонуса сосудов микроциркуляции. Нарушается кровоток в микроциркуляторном звене и

125 125 в магистральных артериальных сосудах. Развиваются дисциркуляторные нарушения приводящие к токсической ангиопатии. Литература 1. Дзугкоева Ф. С. Дзугкоев С. Г. Такоева Е. А. Тедтоева А. И. Битарова Ж. Р., Можаева И. В. Влияние солей тяжелых и цветных металлов на водо- и электровыделительную функцию почек // Фундаментальные исследования С Кокаев Р. И., Брин В. Б. Сравнительный анализ изменений водо- электролитовыделительной функции почек при хроническом отравлении солями ртути и кадмия // Владикавказский медико-биологический вестник, Владикавказ, Т. X. 16. С Киреев Р. А. Влияние ионов кадмия на свободнорадикальные процессы и активность Na +, К + -АТФ-азы в тканях крыс // Токсикологический вестник С Мирзоев Э. Б. Оценка интенсивности процесса перекисного окисления липидов и проницаемости плазматической мембраны для ионов кальция в тимоцитах крыс при воздействии кадмия // Токсикологический вестник С Османов И. М. Роль тяжелых металлов в формировании заболеваний органов мочевой системы // Российский вестник перенатологии и педиатрии С Радцева Г. Л., Ершова В. П., Радцев Ю. А., Акимова Т. В. Морфологические изменения в сосудистой системе и тканях органов иммунной системы при длительном поступлении кадмия // Сборник: Влияние антропогенных факторов на сосудистую и нервную системы С Янин Е. П. Кадмий в пылевых выбросах промышленных предприятий и его роль в загрязнении производственной и окружающей среды // Медицина труда и промышленная экология С. 1 5.

126 126 УДК ВЫРАЖЕННОСТЬ НАРУШЕНИЙ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ И ПОКАЗАТЕЛИ ЭНДОГЕННОЙ ИНТОКСИКАЦИИ У БОЛЬНЫХ ОСТРЫМ СЕРОЗНЫМ И ГНОЙНЫМ КАЛЬКУЛЕЗНЫМ ПИЕЛОНЕФРИТОМ Ельский В. Н., Кривобок А. Г., Антонов Е. В. Донецкий национальный медицинский университет им. М. Горького, Украина Резюме. Механизмы связи токсемии с расстройством клеточных и гуморальных факторов иммунной защиты при серозном и гнойном пиелонефрите важны как для диагностики и прогноза заболевания, так и для выбора оптимальной лечебной тактики. Целью настоящего исследования явилось уточнение патогенетической роли эндогенной интоксикации в механизмах расстройств клеточного и гуморального звеньев иммунной системы при серозном и гнойном калькулезном пиелонефрите. Проанализировано 132 случая острого пиелонефрита. Изменение иммунологических показателей и показателей, отражающих эндогенную интоксикацию у больных серозным и гнойным пиелонефритом, указывает на нарушение иммунологической реактивности у таких больных. Они характеризуют тяжесть воспалительного процесса и его характер в почечной ткани. На основании оценки выраженности изменений иммунологических показателей и показателей эндотоксикоза могут быть определены соответствующие критерии, отражающие переход воспаления в почках в гнойную форму и дальнейшее распространение воспаления с развитием сепсиса. Применение таких критериев на практике будет способствовать выполнению большего числа обоснованных ранних операций, направленных на восстановление уродинамики и адекватной санации инфекционных очагов в почках. Это позволит повысить результативность всего лечения больных острым калькулезным пиелонефритом. Ключевые слова: пиелонефрит, нефролитиаз, эндотоксемия, иммунологическая реактивность.

127 127 CONTACT PARAMETERS OF ENDOGENOUS INTOXICATION WITH SEVERE IN THE IMMUNE SYSTEM IN PATIENTS WITH ACUTE SEROUS AND PURULENT CALCULOUS PYELONEPHRITIS Victor N. Jelski, Alexandr G. Krivobok, Ievgen V. Antonov M. Gorky Donetsk National Medical University Summary. The study analyzed 132 cases of acute obstructive pyelonephritis patients (68 cases of serous, 64 purulent). The obstruction was caused by the presence concrement, located in the upper urinary tract. The aim of the study was to clarify the role of endogenous intoxication in the mechanisms of disorders of cellular and humoral immune system in serous and purulent pyelonephritis in urolithiasis. Defines the main subpopulation of T-lymphocyte phenotyping method, major classes of immunoglobulins, the CEC and cytokines (IL-1, 2, 4, 6, 8 and TNF-α). Defined as MSM, calculated LII, measured ESR. Shown that changes in immunological parameters in patients with obstructive pyelonephritis reflect the severity of endotoxemia, the severity and nature of inflammation in the kidney tissue in patients. Based on a comprehensive assessment of immunological parameters against the background of clinical and laboratory signs of intoxication established criteria, reflecting a shift in the renal tissue of serous inflammation purulent. Key words: pyelonephritis, nephrolithiasis, endotoxemia, immune reactivity. Введение. Острый пиелонефрит по своей частоте среди всех заболеваний почек составляет % [4, 7]. Серьезную клиническую проблему составляют диагностика пиелонефрита и выбор его оптимальной лечебной тактики [6]. По данным различных исследователей, гнойно-деструктивные формы этого заболевания развиваются у 8 40 % больных [3]. При уросепсисе, наиболее тяжелой форме осложнения пиелонефрита, летальность достигает уровня 80 % [4]. Основным клиническим синдромом, вызывающим сепсис и полиорганную недостаточность (ПОН), является эндотоксикоз [5, 7]. Токсемия, образующаяся продуктами жизнедеятельности и распада микроорганизов, блокирует все звенья иммунитета, запускает ее вторичные патогенетические механизмы и является, в конечном итоге, при-

128 128 чиной летальных исходов больных пиелонефритом [2, 4]. Механизмы связи токсемии с расстройством клеточных и гуморальных факторов иммунной защиты при серозном и гнойном пиелонефрите важны как для диагностики и прогноза заболевания, так и для выбора оптимальной лечебной тактики. Вместе с тем, эти механизмы все еще нуждаются в уточнении, особенно связь показателей эндогенной интоксикации с цитокиновым иммунным ответом организма. Целью настоящего исследования явилось уточнение патогенетической роли эндогенной интоксикации в механизмах расстройств клеточного и гуморального звеньев иммунной системы при серозном и гнойном калькулезном пиелонефрите. Материалы и методы исследования. Нами проанализировано 132 случая острого пиелонефрита у больных нефролитиазом, лечившихся в клинике урологии Донецкого национального медицинского университета в период с 2004 по 2009 гг. Всем больным при госпитализации была проведена диагностика, исследование иммунологических показателей и лечение, направленное на коррекцию метаболических нарушений и полное удаление конкрементов (открытые операции, в основном уретеролитотомия). В анализируемой группе больных летальных исходов не было. В течение первых суток с момента начала заболевания было госпитализировано 12 (9 %), через 2 3 суток 28 (21 %), 4 6 суток 35 (27 %), 7 и более 57 (43 %) больных. Из числа поступивших мужчин было 41 (31 %), женщин 91 (69 %). Возраст пациентов колебался от 18 до 76 лет. У 60 (45,5 %) больных имелась сопутствующая соматическая патология, которая отягощала пиелонефрит. У 39 человек установлена ишемическая болезнь сердца и артериальная гипертензия, у 24 сахарный диабет, у 13 хронические обструктивные заболевания, у 6 аденома предстательной железы. Серозный пиелонефрит имелся у 68 пациентов, гнойный у 64. Во всех случаях основной причиной окклюзии мочевыделительной системы явилось наличие конкремента, расположенного в верхнем ее отделе. У пациентов с гнойным пиелонефритом удаление конкрементов включало одновременно и пиело-, нефростомию,

129 129 декапсуляцию почки и рассечение гнойников. Органоуносящие операции выполнены у 8 человек. Больным, в соответствии с показаниями, проводили детоксикацию и интенсивную терапию в большем объеме, чем пациентам с серозным пиелонефритом. После выписки, с целью диагностики возможного рецидива нефролитиаза, за пациентами осуществлялось наблюдение, и проводилась метафилактика. По типу камнеобразования смешанный оксалатно-фосфатно-кальциевый нефролитиаз был у 49 человек, оксалатно-кальциевый у 40, фосфатно-кальциевый (фосфорнокислый) у 28, уратный у 15 больных. При микробиологическом анализе мочи и операционного материала у 79 (60 %) была высеяна Escherichia coli, у 40 (30 %) Staphylococcus aurens, у 13 (10 %) Klebsiella и Proteus. Диагноз серозного и гнойного пиелонефрита у всех обследованных больных был уточнен по результатам морфологического исследования интраоперационных биопсий. Иммунологические исследования проводили в группе контроля (доноры крови, практически здоровые люди, n=20) и у больных серозным и гнойным пиелонефритом (n=132). Кровь на исследование у больных брали в день поступления в клинику, на 2 3, 7 10 е сутки. После окончания лечения полученные данные об изменении иммунологических показателей были сгруппированы в соответствии с характером воспалительного процесса в почках. Исследование субпопуляций лимфоцитов проводили по методике иммунофенотипирования лимфоцитов с использованием моноклональных антител: анти-cd 3, анти-cd 4, анти-cd 8, анти-cd 22 [2]. Количество иммуноглобулинов классов G, A, M в сыворотке крови определяли методом одномерной радиальной иммунодиффузии в агаровом геле по G. Manchini (1965), концентрацию циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) методом [1], содержание цитокинов (ИЛ-6, ИЛ-2, ИЛ-4 и ФНО-α) методом твердофазного иммунного анализа [2]. Степень эндогенной интоксикации определяли по лейкоцитарному индексу интоксикации (ЛИИ), расчет которого про-

130 130 изводили по формуле Я. Я. Кальф-Калифа (1941). Из числа классических показателей интоксикации определяли уровень молекул средней молекулярной массы (МСМ) и величину СОЭ по стандартным методикам [1]. Данные, полученные при иммунологических исследованиях, обрабатывали методом вариационной статистики на персональном компьютере в программе Microsoft Excel 2007 и сравнивали с результатами исследования этих показателей у людей группы контроля. Результаты и обсуждение. Изменение числа лимфоцитов при остром серозном и гнойном пиелонефрите в динамике лечения представлены в табл. 1. Таблица 1 Показатели клеточного звена иммунной системы в контроле и у больных серозным и гнойным калькулезным пиелонефритом в динамике (M±m) п / п Иммунологические показатели Контроль (n=20) Калькулезный пиелонефрит серозный (n=68) дни лечения Лейкоциты, 10 9 / л 5,4±0,33 7,98±0,51 1) 7,13±0,29 5,54±0,37 2) 2 СD3 +, 10 9 / л 1,25±0,08 1,11±0,09 0,84±0,06 1) 0,95±0,05 3 СD4 +, 10 9 / л 0,71±0,07 0,65±0,05 0,58±0,04 0,62±0,02 4 СD8 +, 10 9 / л 0,36±0,09 0,37±0,04 0,38±0,05 0,39±0,04 5 СD22 +, 10 9 / л 0,31±0,04 0,39±0,03 0,28±0,01 1) 0,34±0,02 гнойный (n=64) 1 Лейкоциты, 10 9 / л 5,4±0,33 10,83±0,45 1 3,4) 8,27±0,15 1,3,4) 7,68±0,45 1,3,4) 2 СD3 +, 10 9 / л 1,25±0,08 0,83±0,05 1,2,6) 0,52±0,04 1-6) 0,67±0,05 1,2,5,6) 3 СD4 +, 10 9 / л 0,71±0,07 0,35±0,03 1-6) 0,28±0,02 1-6) 0,40±0,02 1-6) 4 СD8 +, 10 9 / л 0,36±0,09 0,39±0,05 0,36±0,04 0,37±0,03 5 СD22 +, 10 9 / л 0,31±0,04 0,25±0,02 1,2,4-6) 0,19±0,01 1-6) 0,28±0,02 1,4) Примечание: обозначена достоверность различий иммунологических показателей больных 1) от группы контроля (p<0,05); 2) между формами пиелонефрита по сравнению с 1 м днем (p<0,05); 3) со 2 3 днем (p<0,05); 4) с 7 10 днем (p<0,05). Как видно из данных этой таблицы, иммунологические изменения в общем числе лимфоцитов и их отдельных субпопу-

131 131 ляций имели место, как при серозном, так и гнойном пиелонефрите. В наибольшей степени эти изменения касались гнойного пиелонефрита. При серозной форме на 2 3 сутки общее число Т-лимфоцитов снижалось на 33 % (p<0,05). В то же время на 20 % (p<0,05) происходило снижение числа В-лимфоцитов. В последующем иммунологические показатели у больных серозным пиелонефритом постепенно восстанавливались до уровня нормы. Таблица 2 Показатели эндогенной интоксикации в контроле и у больных серозным и гнойным калькулезным пиелонефритом в динамике (M±m) п / п Иммунологические показатели Контроль (n=20) Калькулезный пиелонефрит серозный (n=68) дни лечения ЛИИ 1,48±0,13 5,32±1,1 1) 4,53±0,49 1) 1,59±0,25 2,3) 2 СОЭ, мм / час 4,2±0,37 31,4±2,8 1) 20,5±1,7 1,2) 10,9±2,1 1-3) 3 МСМ 0,12±0,11 0,189±0,11 0,144±0,13 0,123±0,05 гнойный (n=64) 1 ЛИИ 1,48±0,13 5,71±0,62 1,4) 4,96±0,57 1,4) 2,01±0,45 2,3) 2 СОЭ, мм / час 4,2±0,37 51,7±1,21 1-4) 35,8±3,4 1,3,4) 24,9±1,3 1,2,4) 3 МСМ 0,12±0,11 0,831±0,08 1-3) 0,652±0,05 1-3) 0,241±0,04 1) Примечание: как в таблице 1. Таблица 3 Показатели гуморального звена иммунной системы в контроле и у больных серозным и гнойным калькулезным пиелонефритом в динамике (M±m) п / п Иммунологические показатели Контроль (n=20) Калькулезный пиелонефрит серозный (n=68) дни лечения ЦИК, у.е 59,4±5,13 90,6±9,5 1) 82,5±8,7 1) 75,4±7,5 1) 2 Ig A, г / л 1,62±0,07 1,82±0,11 1,74±0,09 1,8±0,11 3 Ig M, г / л 1,33±0,11 1,39±0,11 1,38±0,11 1,53±0,13 4 Ig G, г / л 12,74±1,32 16,5±1,3 1) 17,5±1,4 1) 19,3±1,5 1)

132 132 5 ИЛ-1β, пг / мл 30,41±2,86 77,6±6,2 1) 80,8±7,7 1) 58,9±6,7 1-3) 6 ИЛ-2, пг / мл 13,15±1,14 42,9±3,7 1) 30,5±3,1 1,2) 23,4±2,4 1-3) 7 ИЛ-4, пг / мл 28,3±3,25 96,3±8,9 1) 87,9±8,4 1) 52,5±7,7 1-3) 8 ИЛ-6, пг / мл 14,81±3,34 49,3±3,6 1) 86,2±7,8 1,2) 106,7±10,2 1,2) 9 ИЛ-8, пг / мл 30,2±2,9 429,3±37,8 1) 437,6±32,4 1) 250,6±39,7 1-3) 10 ФНО-α, пг / мл 26,52±2,57 422,6±40,5 1) 433,7±41,8 1) 398,3±37,6 1) гнойный (n=64) 1 ЦИК, у.е 59,4±5,13 129,2±11, ,5±11,2 1-6) 6) 87,4±7,6 1,5,6) 2 Ig A, г / л 1,62±0,07 1,32±0,13 1-6) 1,14±0,91 1-6) 1,11±0,13 1-5) 3 Ig M, г / л 1,33±0,11 1,03±0,13 1,11±0,22 1,24±0,18 4 Ig G, г / л 12,74±1,32 8,3±1,6 1-6) 9,4±1,7 1-6) 10,8±1,1 2-5) 5 ИЛ-1β, пг / мл 30,41±2,86 125,6±2,1 1-6) 249,8±4,8 1-6) 166,4±6,2 1-6) 6 ИЛ-2, пг / мл 13,15±1,14 33,5±3,1 1-6) 34,2±3,0 1,2,4-6) 25,6±2,3 1,2,6) 7 ИЛ-4, пг / мл 28,3±3,25 52,8±5,6 1 3,6) 49,7±4,8 1 3,6) 41,5±3,6 1 3,6) 8 ИЛ-6, пг / мл 14,81±3,34 53,3±5,2 1,3-5) 93,4±9,2 1,2,6) 113,5±10,9 1,2,6) 9 ИЛ-8, пг / мл 30,2±2,9 41,3±3,6 1-6) 263,4±28, ФНО-α, пг / мл 26,52±2,57 18,8±1,6 1-6) 34,7±2,9 1,2,4- Примечание: как в таблице 1. 6) 409,7±38,8 1-6) 6) 312,9±32,5 1 3,5,6) При гнойном пиелонефрите иммунологические показатели изменялись с первых суток лечения, их изменение было сильнее выражено, да и оно по продолжительности было значительнее. Так, общее число Т-лимфоцитов в 1 й день лечения снижалось на 34 % (p<0,05), абсолютное число хелперов / индукторов снижалось на 51 % (p<0,05), а общее количество В-лимфоцитов на 20 % (p<0,05). Но на 3 и сутки изменения этих трех показателей увеличивались и были на 58 % (p<0,05), на 61 % (p<0,05) и на 39 % (p<0,05) меньше значений соответствующих контрольных величин. С 7 10 суток показатели клеточного иммунитета начинали восстанавливаться. Раньше других восстанавливалось общее количество В-лимфоцитов. Обращало на себя внимание, что количество Т-супрессоров за границы своего доверительного интервала не выходило.

133 133 Показатели выраженности гуморального иммунитета в контроле и в динамике серозного и гнойного обструктивного пиелонефрита представлены в таблице 3. Как видно из этой таблицы, изменения в показателях гуморального иммунитета касались как больных серозным, так и гнойным пиелонефритом. При серозном пиелонефрите у больных в первый день лечения на 52 % (p<0,05) увеличивался уровень ЦИК, на 30 % (p<0,05) увеличивалась концентрация Ig G, резко увеличивалась концентрация цитокинов. В частности, в 2,5 раза возрастала концентрация ИЛ1 β (p<0,05), в 3,4 раза концентрация ИЛ-2 (p<0,05) и ИЛ-4 (p<0,05), в 3,3 раза концентрация ИЛ-6 (p<0,05), более чем в 15 раз увеличивалась концентрация ФНО-α (p<0,05). Величина концентрации ИЛ-8 увеличивалась на 42 % (p<0,05). На 2 3 сутки лечения у этой группы больных изменения всех перечисленных иммунологических показателей достигали максимальных значений. С 7 10 суток постепенно происходила снижение активности гуморального звена иммунной системы. При гнойном пиелонефрите уровень ЦИК изменялся с большей амплитудой, чем у больных серозным пиелонефритом. Концентрация Ig A у больных этой группы, в отличие от первой, снижалась на % (p<0,05), причем, она оставалась сниженной и на 7 10 сутки пребывания пациентов в стационаре (p<0,05). Сниженной была и концентрация Ig G. Концентрация цитокинов у больных гнойным пиелонефритом по сравнению с уровнем нормы повышалась, но по сравнению с пациентами с серозным пиелонефритом в меньшей степени (p<0,05). На 2 3 сутки уровни соответствующих цитокинов повышались, но за исключением ИЛ-1β они не превышали соответствующие значения показателей больных серозным пиелонефритом (p<0,05). На 7 10 сутки показатели ИЛ-1β также были выше, чем у больных серозным пиелонефритом. Низкий уровень провоспалительных цитокинов по сравнению с больными серозным пиелонефритом свидетельствовал о срыве иммунологической реактивности организма и развитии состояния иммунологической гипоэргии. Иными словами, такой

134 134 срыв является, видимо, характерной чертой перехода воспалительного процесса в почечной ткани в гнойную форму. На наш взгляд, четкая фиксация различий в иммунологических показателях у таких больных требует более внимательного отношения, поскольку свидетельствует о высокой вероятности проведения у них оперативного лечения для направленной санации очага инфекции. Восстановление иммунологических показателей после выполнения операций у больных обеих групп с 7 10 суток свидетельствовало об эффективности такой санации, и подтверждала правильность выбранного метода лечения. Наиболее заметные изменения в восстановительном процессе, происходившие у больных серозным пиелонефритом, свидетельствовали о меньшей тяжести почечной деструкции, и у них также меньше был выражен дисбаланс про- и противовоспалительных цитокинов со сдвигом в сторону провоспалительных. Повышенный уровень концентрации противовоспалительного цитокина ИЛ-4 подтверждал процесс репарации в почечной ткани. В целом, снижение концентрации провоспалительного цитокина ИЛ-1β происходило параллельно с регрессом системных воспалительных сдвигов в организме, коррелировало с ранней нормализацией температуры и общего состояния больных. Изменения показателей эндогенной интоксикации у больных острым серозным и гнойным калькулезным пиелонефритом представлены в таблице 2. Как видно из этой таблицы, показатели эндотоксикоза у больных были самыми высокими в первые 3 дня заболевания. ЛИИ у больных серозным и гнойным пиелонефритом был примерно одинаковым. Его величина у больных серозным пиелонефритом на 7 10 день приходили к норме, а у больных гнойным пиелонефритом снижались медленнее и также существенно не отличались от контроля (p<0,05). Наиболее выраженными были значения СОЭ и МСМ. Величина СОЭ у больных серозным пиелонефритом в первый день стационарного лечения была в 7,4 раза выше, а у больных гнойным пиелонефритом в 12,3 раза выше, чем в контроле (p<0,05). В последующие дни СОЭ снижалось, но у больных гнойным пиелонефритом она была в 2 раза

135 135 выше, чем у больных серозным (p<0,05). Уровень МСМ бльных серозным пиелонефритом в первый день лечения был на 50 % выше, чем в контроле, на второй и последующие дни он снижался до нормы (p<0,05). У больных гнойным пиелонефритом концентрация МСМ в первый день была существенно выше, чем у больных серозным пиелонефритом. Она превышала показатели контроля в 6,9 раза (p<0,05). На 2 3 й и 7 10 й дни уровень МСМ снижался, но превышал показатели контроля соответственно в 5,4 и 2,0 раза (p<0,05). Показатели эндогенной интоксикации хорошо коррелировали с величинами клеточного и гуморального иммунитета, причем, в большей степени у больных гнойным пиелонефритом. Так, МСМ имели при гнойном пиелонефрите тесную и выраженную обратную корреляционную связь с числом Т-лимфоцитов (CD3 + ) и Т-хелперов / индукторов (CD4 + ), равную соответственно 0,74 и 0,63 (p<0,05). Меньше она была для CD22 + (r= 0,43). Величины ЛИИ и СОЭ с показателями клеточного и гуморального иммунитета имели заметную и выраженную обратную корреляционную связь (p<0,05). Все показатели эндотоксемии с иммунологическими параметрами при серозном пиелонефрите имели только заметную и слабую корреляционную связь. Основными иммунологическими показателями, отражающими переход в почечной ткани серозного воспаления в гнойное являются: снижение общего числа Т-лимфоцитов до 0,83±0,05 г / л; снижение Т-хелперов / индукторов до 0,35±0,03 г / л; снижение числа В-лимфоцитов до 0,25±0,02 г / л; увеличение показателей ЦИК до 129,2±11,7 у.е.; снижение концентрации Ig A до 1,32±0,13 г / л; Ig G до 8,3±1,6 г / л; величины цитокинов, не превышающих для ИЛ-1β уровня 125,1±2,1 пг / мл, ИЛ-2 33,5±3,1 пг / мл, ИЛ-4 52,8±5,6 пг / мл, ИЛ-6 53,3±5,2 пг / мл, ИЛ-8 41,3±3,6 пг / мл, ФНО-α 18,8±1,6 пг / мл на фоне клинических и лабораторных признаков интоксикации организма. Выводы. Изменение иммунологических показателей и показателей, отражающих эндогенную интоксикацию у больных серозным и гнойным пиелонефритом, указывает на нарушение иммунологической реактивности у таких больных. Они характе-

136 136 ризуют тяжесть воспалительного процесса и его характер в почечной ткани. На основании оценки выраженности изменений иммунологических показателей и показателей эндотоксикоза могут быть определены соответствующие критерии, отражающие переход воспаления в почках в гнойную форму и дальнейшее распространение воспаления с развитием сепсиса. Применение таких критериев на практике будет способствовать выполнению большего числа обоснованных ранних операций, направленных на восстановление уродинамики и адекватной санации инфекционных очагов в почках. Это позволит повысить результативность всего лечения больных острым калькулезным пиелонефритом. Литература 1. Иммунология в клинической практике / Под ред. К. А. Лебедева. М.: ЦПИ «ИЭМК», с. 2. Казімірчук В. Є., Ковальчук Л. В. Клінічна імунологія та алергологія. Вінниуя: Нова книга, с. 3. Колпаков И. С. Мочекаменная болезнь: Учебное пособие для системы послевузовского профессионального образования врачей. М.: «Академия», с. 4. Лоран О. Б. Рецидивирующие инфекции мочевых путей. Алгоритм диагностики и лечения: Пособие для врачей. М., с. 5. Малажицкий Ф. А. Состояние клеточного и гуморального иммунитета при остром пиелонефрите // Здравоохранение С Тиктинский О. Л., Александров В. П. Мочекаменная болезнь. СПб., с. 7. Яненко Э. К, Румянцев В. Б., Сафаров Р. М. и др. Окклюзия мочевыводящих путей основная причина развития ряда осложнений мочекаменной болезни // Урология С

137 УДК: ВЛИЯНИЕ СТАТИНОВ НА ЭКСКРЕТОРНУЮ ФУНКЦИЮ ПОЧЕК КРЫС ПРИ ГЛИЦЕРОЛОВОЙ МОДЕЛИ ОСТРОЙ ПОЧЕЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ Зеленюк В. Г., Заморский И. И., Горошко А. М. Буковинский государственный медицинский университет, Украина, г. Черновцы Резюме: В эксперименте на белых крысах изучено влияние некоторых статинов (аторвастатина, ловастатина, симвастатина) на протекание глицеро ловой острой почечной недостаточности при профилактическом режиме их введения. Продемонстрировано влияние статинов на снижение протеинурии и гиперлипидемии, улучшение экскреторной функции почек, в результате чего, вероятно, проявляется нефропротекторное воздействие изучаемых препаратов. Ключевые слова: острая почечная недостаточность, статины, функция почек. EFFECT OF STATINS ON RENAL EXCRETORY FUNCTION IN RATS IN GLYCEROL-INDUCED ACUTE RENAL FAILURE Zeleniuk V. G., Zamorskii I. I., Goroshko A. M. Abstract: The effect of preventive administration of some statins (atorvastatin, lovastatin, simvastatin) on glyce rol-induced acute renal failure in white rats was studied. It was shown the effect of statins on the reduction of proteinuria and hyperlipidemia, and improvement of renal excretory function, resulting in a demonstration of the renoprotective effect of the studied drugs. Key words: acute renal failure, statins, renal function. Острая почечная недостаточность (ОПН) острое прекращение жизнеобеспечивающей функции почек, при котором летальность за данными разных исследований составляет %,

138 138 а частота возникновения этой патологии постоянно растет. Несмотря на то, что ОПН уже давно относится к значительным проблемам интенсивной терапии, эффективных методов подхода к лечению и профилактике этого синдрома на сегодня не разработано [2]. Однако, предложены мероприятия нефропротекции, направленные на основные факторы прогрессирования почечной дисфункции: контроль артериального давления и протеинурии, коррекция гиперлипидемии, анемии, кальций-фосфатных нарушений и др. [3]. Гипер- и дислипидемия инициируют дисфункцию эндотелия и мезангиальных клеток, цитотоксичность, пролиферативные процессы в стенках сосудов, стимулируют хемотаксис Т-лимфоцитов и моноцитов, высвобождение цитокинов, факторов роста, хемоатрактантов, активных форм кислорода [1], что углубляет тяжесть протекания разных болезней. Учитывая способность препаратов из группы ингибиторов 3 гидрокси- 3 метилглутарил-коэнзим А-редуктазы (статинов) благодаря своим гиполипидемическим и нелипидным эффектам проявлять нефропротекторные свойства за счет позитивного влияния на эндотелиальную дисфункцию, антипролиферативных, противовоспалитель ных, иммунокоррегирующих, антиоксидантных и антитромботических эффектов, следует рассмотреть целесообразность их использования при заболеваниях, в патогенезе которых задействованы приведенные механизмы, в том числе и при ОПН [4]. Также стоит отметить сообщения в литературе об эффективности статинов на фоне разных моделей ОПН: ишемическо-реперфузионной [6], сепсис-индуцированной [7], гентамициновой [5]. Почти половину случаев возникновения ОПН составляют тяжелые травматические повреждения, включая crush-синдром [2]. Поэтому для экспериментального исследования влияния статинов на протекание ОПН целесообразно выбрать глицероловую модель, которая воспроизводит синдром раздавливания тканей, сопровождающийся нарушением функций почек, в том числе и экскреторной, что проявляется в уменьшении способности к выведению водной нагрузки и снижению скорости клу-

139 139 бочковой фильтрации, повышении содержания креатинина в крови и моче, протеинурии. Целью исследования было изучение влияния некоторых статинов (аторвастатина, ловастатина, симвастатина) на экскреторную функцию почек в профилактическом режиме их введения в условиях ОПН, смоделированной введением раствора глицерола. Для данного исследования выбраны статины, в отношении которых есть данные в литературе об их эффективности при ОПН. Материалы и методы. Исследования проводили на 35 нелинейных белых крысах массой г, которые находились в условиях вивария с постоянным поддержанием температуры, влажности и освещения. Животных разделили на 5 групп (n=7): І контрольная группа (интактные); ІІ животные с моделированной патоло гией; ІІІ, ІV и V группы животных, которым вводили исследуемые препараты аторвастатин, ловастатин, симвастатин соответственно. Статины вводили внутрижелудочно в 1 % растворе крахмала из расчета 1 мл суспензии на 100 г массы профилактически ежедневно за 3 дня до моделирования ОПН. Глицероловую почечную недостаточность (рабдомиолитическая модель ОПН) моделировали введением 50 % раствора глицерола внутримышечно из расчета 10 мл на 1 кг массы. Дозы препаратов выбирали, исходя из данных литературы с учетом их фармакологической активности у лабораторных крыс по 10 мг / кг. Экскреторную функцию почек оценивали на 24 ч после введения раствора глицерола на фоне смоделированной гипергидратации организма (энтеральная водная нагрузка в объеме 5 % от массы тела) по показателям диуреза; концентрации креатинина и ионов калия в плазме крови и моче; белка в моче. Результаты и их обсуждение. В условиях модельной патологии, вызванной рабдомиолизом, во всех группах животных, которым вводили исследуемые статины, отмечали снижение содержания в плазме общего холестерина (ХС) в 1,4 раза при введении аторвастатина, в 1,5 раза ловастатина, в 1,5 раза симвастатина, также как и сниже-

140 140 ние уровня в липопротеидов в среднем в 1,2 раза в сравнении с группой животных с ОПН, не подлежавшим лечению. Стоит отметить возрастание уровня общего холестерина в условиях моделируемой патологии, что подтверждает рассмотренную выше роль дислипидемии в патогенезе ОПН. В таблице 1 проиллюстрирована эффективность использования статинов при выбранном режиме введения и дозах, что проявлялось в заметном корректирующем влиянии на уровень ХС. Таблица 1 Характеристика содержания общего ХС и в ЛП у крыс при профилактическом введении статинов на фоне глицероловой модели ОПН (x±sx) Показатели I Контроль II Патология (ОПН) III ОПН+ аторвастатин IV ОПН+ ловастатин V ОПН+ симвастатин Общий ХС, мг / дл 91,69±4,52 165,94±8,1 р 0,01 122,10±3,34 р 1 0,01 108,04±6,18 р 1 0,01 111,71±3,75 р 1 0,01 в липопротеиды, у.е. 17,80±2,08 24,10±1,09 р 0,05 20,50±2,78 р 1 0,05 19,75±1,42 р 1 0,05 19,67±1,38 р 1 0,05 Примечания: р достоверность в сравнении с данными контрольной группы; р 1 достоверность в сравнении с данными группы животных с ОПН. Полученные нами данные (табл. 2) свидетельствуют о том, что у животных проявлялись все признаки миоглобинурической формы ОПН с угнетением экскреторной функции почек и развитием олигурии на 24 ч исследования, а профилактическое введение статинов привело к улучшению протекания ОПН. Так, наиболее значимое увеличение диуреза в 1,2 раза было отмечено у крыс, которым вводили ловастатин (по сравнению с группой животных с ОПН, не подвергавшимся лечению статинами). Введение аторвастатина и симвастатина также приводило к увеличению диуреза, но менее выраженному. В результате применения ловастатина уменьшался уровень креатинина в моче

141 141 в 1,4 раза. Наибольшее уменьшение содержания креатинина в плазме крови в 1,2 раза среди изучаемых препаратов отмечали в группе животных, которым вводили аторвастатин. Скорость клубочковой фильтрации у животных, которым вводили ловастатин, увеличивалась в 1,7 раза в сравнении с животными с ОПН, не подвергавшимся лечению. Итак, хотя статины в условиях данного эксперимента не уменьшали исследуемые показатели до уровня контрольных значений, отмечалось улучшение показателей функций почек в сравнении с животными с ОПН, которым не вводили статины. Все исследуемые препараты снижали концентрацию белка в моче: аторвастатин в 3 раза, ловастатин в 3,3 раза, симвастатин в 4,5 раза. В целом, экскреция белка в результате введении статинов уменьшалась в среднем в 3,1 раза. Выраженное антипротеинурическое действие статинов подтверждает предположение об их нефропротекторных свойствах в условиях экспериментальной ОПН. Гиперкалиурия, отмечавшаяся у животных с ОПН, вероятно связана с поступлением калия из клеток в результате поражения почек миоглобиновыми цилиндрами. Профилактическое использование исследуемых статинов способствовало снижению концентрации ионов калия в моче, причем наибольшее снижение, в 1,7 раза, отмечали в группе животных, которым вводили ловастатин. Экскреция ионов калия более выражено снижалась в группах введения ловастатина и симвастатина. Таблица 2 Показатели функционального состояния почек крыс при профила ктическом введении статинов на фоне глицероловой модели ОПН (x±sx) Показатели I Контроль II Патология (ОПН) III ОПН+ аторвастатин IV ОПН+ ловастатин V ОПН+ симвастатин Диурез, мл / 2 ч. 3,95±0,12 3,17±0,1 р 0,01 3,79±0,24 4,40±0,13 р 1 0,05 3,57±0,17

142 142 Концентрация креатинина в плазме крови, мкмоль / л Концентрация креатинина в моче, ммоль / л Скорость клубочковой фильтрации, мкл / мин Концентрация белка в моче, мг / л 59,33±7,74 0,69±0,05 94,10±4,03 р 0,01 1,13±0,03 р 0,01 75,57±1,91 р 1 0,01 0,94±0,04 82,93±3,05 р 1 0,05 0,79±0,06 р 1 0,05 345,95±48,06 271,86±31,86 308,52±26,83 476,53±45,22 р 1 0,01 0,07±0,013 0,27±0,05 р 0,01 0,09±0,02 р 1 0,01 0,08±0,02 р 1 0,01 79,37±4,74 р 1 0,05 0,93±0,06 306,99±62,94 0,06±0,012 р 1 0,01 Экскреция белка с мочой, мг / 2 ч. 0,30±0,05 0,86±0,15 р 0,01 0,36±0,09 р 1 0,05 0,36±0,09 р 1 0,05 0,23±13 р 1 0,01 Концентрация ионов калия в моче, ммоль / л Экскреция ионов калия, мкмоль / 2 ч. 5,22±0,27 20,66±1,48 9,84±0,31 р 0,01 31,21±1,59 р 0,01 7,53±0,31 р 1 0,01 28,57±2,24 5,70±0,32 р 1 0,01 25,03±1,33 р 1 0,05 7,29±0,43 р 1 0,01 25,93±1,77 р 1 0,05 Примечания: р достоверность в сравнении с данными контрольной группы; р 1 достоверность в сравнении с данными группы животных с ОПН. Выводы 1. При профилактическом введении статинов на фоне глицероловой ОПН ловастатин проявлял более выраженное в сравнении с другими препаратами позитивное влияние на экскреторную функцию почек за счет увеличения диуреза и скорости клубочковой фильтрации, снижения концентрации креатинина и калия в моче. 2. Продемонстрированные нефропротекторные свойства статинов при экспериментальной ОПН за счет снижения как протеинурии, так и гиперлипидемии, способствовали улучшению функционального состояния почек белых крыс.

143 Литература Дудар І. Ренопротекція: реальні можливості сьогодення / І. Дудар, М. Величко // Ліки України С Ермоленко В. М. Острая почечная недостаточность: руководство / В. М. Ермоленко, А. Ю. Николаев. М.: ГЭОТАР-Медиа, С (Библиотека врача-специалиста). 3. Gluhovschi Gh. Multi-organ protection and the kidney. From nephropro tection, cardioprotection, neuroprotection to multi-organ protection / Gh. Gluhovschi, Gh. Bozdog, L. Petrica et al // Nefrologia Vol. 24, 6. P Holmqvist G. N. Statins: indications and uses, safety and modes of action / G. N. Holmqvist. New York: Nova Science Publishers, Inc., P Ozbek E. Atorvasrtatin prevents gentamicin-induced renal damage in rats through the inhibition of p38 MAPK and NF-kappaB pathways / E. Ozbek, M. Cekmen, Y. O. Ilbey et al // Renal Failure (5). P Pisani A. Effects of atorvastatin on ischemic acute renal failure in aging rats / A. Pisani, F. Uccello, A. Cesaro et al // Giornale italiano di nefrologia (5). P Yasuda H. Simvastatin improves sepsis-induced mortality and acute kidney injury via vascular effects / H. Yasuda, P. S. T. Yuen, H. Xuzhen et al. // Kidney International (9). Р

144 144 УДК: : : : : РЕНАЛЬНЫЕ ЭФФЕКТЫ СУММАРНЫХ ПРЕПАРАТОВ СНЫТИ ОБЫКНОВЕННОЙ (AEGOPODIUM PODAGRARIA L.) И ЕЁ БИОЛОГИЧЕСКИХ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ В ЗДОРОВОМ ОРГАНИЗМЕ, ИХ ВЛИЯНИЕ НА ТЕЧЕНИЕ ОСТРОЙ ПОЧЕЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ ТОКСИЧЕСКОГО ГЕНЕЗА Койро О. О., Штрыголь С. Ю. Национальный фармацевтический университет, Украина, г. Харьков Исследованы ренальные эффекты и нефропротекторная активность экстрактов, настоек из всех частей сныть обыкновенной (Aegopodium podagraria L.) и ее биологически активных веществ у интактных мышей. Препараты сныти предупреждали летальность в ранние сроки этиленгликолевой интоксикации. Максимальный нефропротекторный эффект верифицирован для экстрактов корневищ и листьев, настойки цветков, белково-полисахаридного комплекса листьев и флавоноида трифолина. RENAL EFFECTS OF THE GOUTWEED PREPARATIONS (AEGOPODIUM PODAGRARIA L.) AND DIFFERENT GROUPS OF BIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCES IN INTACT MICE, THEIR INFLUENCE ON THE ETHYLENGLYCOLE-INDUCED ACUTE RENAL FAILURE Koyro O. O., Shtrygol S. Yu. The renal effects and nephroprotective activity of extracts and tinctures of all goutweed (Aegopodium podagraria L.) parts as well as goutweed biologically active substances have been investigated in intact mice. The goutweed preparations prevented lethality in early period of the ethylenglycole-induced intoxication. The most effective nephroprotective preparations were as follows: rhizomes and leaves extracts, flowers tincture, leaves protein-polysaccharide complex and flavonoid trifolin. Сныть обыкновенная (Aegopodium podagraria L.) травянистое растение семейства зонтичных (Apiaceae). Ранее доказаны нефропротекторные, гипоурикемические, противовоспалительные свойства препаратов листьев сныти [3].

145 145 Цель данного исследования: изучение ренальных эффектов суммарных препаратов сныти обыкновенной и отдельных групп биологически активных веществ (БАВ) в интактном организме, а также их влияния на течение этиленгликолевой острой почечной недостаточности (ОПН). Исследованы водные экстракты, настойки корневищ, листьев и цветков, лишенные спирта; эфирное масло листьев и цветков, белково-полисахаридный комплекс (БПСК), липофильная фракция листьев и флавоноид трифолин (3 О-β-галактозид кемпферола), изолированный из сырья сныти. Материалы и методы. Влияние курсового введения препаратов сныти на выделительную функцию почек изучали в условиях водного диуреза (нагрузка 5 % массы тела [2], сбор мочи 2 ч). Креатинин мочи измеряли по реакции Яффе, рассчитывали его экскрецию маркер клубочковой фильтрации. Сравнительную эффективность препаратов сныти при ОПН определяли на модели этиленгликолевой интоксикации. Мыши были разделены на группы: модельная патология и животные, которые в течение 3 дней до введения токсина получали исследуемые препараты. ОПН вызывали подкожным введением этиленгликоля в дозе 10 мл / кг через мин после последнего введения препарата. В качестве интегрального показателя эффективности служила выживаемость мышей в динамике [1]. Статистическую значимость различий оценивали по критерию W Вилкоксона. При регистрации результатов в альтернативной форме (наличие/ отсутствие эффекта) использовали угловое преобразование Фишера. Результаты и их обсуждение. Влияние курсового введения препаратов и отдельных групп БАВ сныти обыкновенной на выделительную функцию почек приведено в табл. 1. Экстракт корневищ, угнетая канальцевую реабсорбцию, проявлял тенденцию к дозозависимому увеличению диуреза, тогда как экстракт листьев не влиял на объем мочеотделения. Диуретический эффект экстракта цветков в меньших дозах реализовывался преимущественно за счет увеличения фильтрации, в больших за счет снижения реабсорбции. Настойки

146 146 из всех видов сырья снижали экскрецию креатинина, дозозависимый диуретический эффект регистрировали только в группе настойки цветков сныти. Падение диуреза при применении настойки листьев обусловлено в основном повышенной реабсорбцией воды. Белково-полисахаридный комплекс сныти и трифолин в интактном организме не изменяли функциональное состояние почек, а эфирное масло цветков увеличивало диурез за счет угнетения реабсорбции. Под влиянием липофильной фракции листьев сныти наблюдалось резкое снижение диуреза, обусловленное увеличением канальцевой реабсорбции воды на фоне резко возросшей экскреции креатинина. В дальнейшем необходимо выяснить влияние данных препаратов на концентрацию мочевины и креатинина в крови. Нельзя исключить, что снижение экскреции последнего под влиянием ряда препаратов связано с экстраренальными факторами. Таблица 1 Влияние курсового введения препаратов и отдельных групп БАВ сныти обыкновенной на выделительную функцию почек у мышей (водный диурез) Группа Дозировка Диурез, мл / 10 г за 2 ч Экскреция креатинина, мкмоль / 10 г за 2 ч Интактный контроль 0,51±0,03 0,44±0,04 Настойки Корневища 1 мл / кг 0,44±0,03 0,27±0,03 * 5 мл / кг 0,47±0,08 0,25±0,04 * Листья Цветки Корневища Листья 1 мл / кг 0,44±0,05 0,38±0,03 5 мл / кг 0,40±0,02 * 0,37±0,03 1 мл / кг 0,54±0,04 0,27±0,04 * 5 мл / кг 0,60±0,04 * 0,35±0,04 Экстракты 100 мг / кг 0,56±0,03 0,25±0,04 * 1 г / кг 0,60±0,09 0,34±0, мг / кг 0,47±0,04 0,43±0,04 1 г / кг 0,49±0,03 0,48±0,05

147 мг / кг 0,65±0,05 * 0,56±0,04 * Цветки 250 мг / кг 0,64±0,03 * 0,61±0,10 * 500 мг / кг 0,57±0,08 0,38±0,03 1 г / кг 0,57±0,07 0,18±0,05 * Группа БАВ, индивидуальные БАВ Трифолин 50 мг / кг 0,47±0,02 0,39±0,03 БПСК 20 мг / кг 0,38±0,05 0,35±0, мг / кг 0,45±0,03 0,41±0,04 Липофильная фракция листьев 100 мг / кг 0,36±0,03 * 0,71±0,10 * Эфирное масло цветков 1 мг / кг 0,60±0,03 * 0,39±0,04 Примечание: * достоверные отличия относительно группы модельной патологии, р<0,05. При введении этиленгликоля у животных группы модельной патологии развивалась тяжелая интоксикация, в ранние сроки которой наблюдалась макрогематурия, в поздние симптомы поражения ЦНС: атаксия, боковое положение животных, кома. Гибель наступала в течение первых суток, при этом летальность через 12 часов после введения токсина составляла 75 %. В табл. 2 обобщены данные по выживаемости мышей. Таблица 2 Влияние препаратов сныти обыкновенной и отдельных групп БАВ на выживаемость мышей при этиленгликолевой интоксикации Группы n Выживаемость, % 12 ч 24 ч 36 ч 48 ч 72 ч Модельная патология (ЭГ) 12 25,0 8,3 8,3 8,3 8,3 Настойка корневищ (1 мл / кг) +ЭГ 5 20, Настойка корневищ (5 мл / кг) +ЭГ 5 60,0 20, Экстракт корневищ (100 мг / кг) +ЭГ 5 80,0 * 60,0 * 20,0 0 0 Экстракт корневищ (1 г / кг) +ЭГ 7 85,7 * 71,4 * 57,2 * 42,9 * 42,9 *

148 148 Настойка листьев (5 мл / кг) +ЭГ ,0 10,0 10,0 10,0 Экстракт листьев (100 мг / кг) +ЭГ 6 33,3 16,7 16,7 16,7 16,7 Экстракт листьев (1 г / кг) +ЭГ 18 77,8 * 66,7 * 66,7 * 66,7 * 66,7 * Экстракт листьев (5 г / кг) +ЭГ 12 66,7 * 50,0 * 50,0 * 50,0 * 50,0 * Настойка цветков (1 мл / кг) +ЭГ 5 60,0 60,0 * 40,0 20,0 20,0 Настойка цветков (5 мл / кг) +ЭГ 5 100,0 * 60,0 * 60,0 * 20,0 20,0 Экстракт цветков (100 мг / кг) +ЭГ 6 50, Экстракт цветков (250 мг / кг) +ЭГ 6 66,7 * 16,7 16,7 16,7 16,7 Экстракт цветков (500 мг / кг) +ЭГ 6 50, Экстракт цветков (1 г / кг) +ЭГ 6 66,7 * 16,7 16,7 16,7 16,7 Трифолин (50 мг / кг) +ЭГ 7 85,7 * 42,9 * 42,9 * 42,9 * 42,9 * БПСК листьев (200 мг / кг) +ЭГ 8 75,0 * 50,0 * 50,0 * 50,0 * 50,0 * БПСК листьев (400 мг / кг) +ЭГ 6 50,0 16,7 16,7 16,7 16,7 Липофильная фракция листьев 8 37, (25 мг / кг) +ЭГ Липофильная фракция листьев 7 42,9 14,3 14,3 14,3 14,3 (100 мг / кг) +ЭГ Эфирное масло листьев (1 мг / кг) +ЭГ 5 80,0 * 20, Примечания: ЭГ этиленгликоль; n количество животных в группе; * достоверные отличия относительно группы модельной патологи, р<0,05. Наиболее значительно увеличивал выживаемость экстракт листьев в дозе 1 г / кг, что согласуется с данными литературы [3]. Почти не уступали ему по активности экстракт листьев в большей дозе (5 г / кг), экстракт корневищ (1 г / кг), трифолин (50 мг / кг), БПСК (200 мг / кг). Большинство препаратов (экстракт листьев, экстракт корневищ, настойка цветков, БПСК, трифолин) снижали смертность, особенно в течение первые суток тяжелой этиленгликолевой интоксикации.

149 149 Таким образом, при ОПН, вызванной этиленгликолем, препараты сныти предупреждают летальность, особенно в ранние сроки. Их нефропротекторные свойства могут способствовать повышению эффективности лечения ОПН. Литература 1. Методи експериментального моделювання ураження нирок для фармакологічних досліджень. Методичні рекомендації. / С. Ю. Штриголь, В. М. Лісовий, І. А. Зупанець та співавт. Х.: НФаУ, с. 2. Миші як об єкт досліджень видільної функції нирок / С. Ю. Штриголь, О. В. Товчига, Н. Г. Аракелян та співавт // Клінічна фармація Т. 12, 3. С Товчига О. В. Дослідження сечогінної, нефропротекторної, гіпоурикемічної дії яглиці звичайної (Aegopodium podagraria L.) як основа для створення лікарських засобів: автореф. дис. канд фарм. наук: спец «Фармакологія» / О. В. Товчига. Харків, с. УДК: НЕКОТОРЫЕ МЕХАНИЗМЫ ЭЛЕКТРОЛИТНЫХ НАРУШЕНИЙ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ВОЗДЕЙСТВИИ СОЛЕЙ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ Кокаев Р. И. Северо-Осетинская государственная медицинская академия, Россия, г. Владикавказ Интоксикация сульфатом кадмия и хлоридом ртути в дозе по 0,1 мг / кг оказывает выраженное влияние на водовыделительную функцию почек, а также гомеостазис и почечную обработку таких катионов, как кальций, натрий, калий и магний. Основная роль в этом принадлежит изменению канальцевой реабсорбции,

150 150 как за счет нарушения активности Na / K-АТФазы, так и снижения концентрации осмотически активных веществ в слоях почек (натрия и мочевины). SOME MECHANISMS OF ELECTROLYTE INFRINGEMENTS AT CHRONIC INFLUENCE OF HEAVY METALS SALTS Kokaev R. I. Intoxication with cadmium sulphate and mercury chloride in a dose on 0,1 mg / kg of everyone, expressed impact makes on water secretory function of kidneys, and also a homeostasis and nephritic processing such ions, as calcium, sodium, potassium and magnesium. The dominant role in it belongs to change tubular reabsorption, as at the expense of infringement of activity Na / K-ATPase, and decrease in concentration of osmotically active substances in layers of kidneys (sodium and urea). Ртуть и кадмий, а так же их соединения являются одними из основных экопатогенных факторов, оказывающих свое влияние практически на все органы и системы организма. Их накопление в организме приводит к различным нарушениям процессов обмена веществ: окислительного фосфорилирования [4], обмена жизненно важных электролитов, в частности кальция [8]. Наибольшее повреждающее действие тяжелые металлы оказывают, как правило, на систему выделения, а точнее на почечный аппарат [1,2,3,9,10,11,12], что связано с высоким кровоснабжением почек и особенностями функционирования, а также со способностью металлов депонироваться в паренхиматозных органах. Воздействуя на разные участки нефрона, металлы могут вызывать интерстициальный нефрит, иммуно-воспалительные заболевания почек, включая гломерулопатии. Связанные с транспортными белками, металлотионеинами, они сначала фильтруются, а затем реабсорбируются, в большей степени, в проксимальных отделах канальцев, что больше характерно для кадмия, вызывая преимущественное их поражение [12]. Для солей ртути характерно развитие, как интерстициального нефрита, так и гломерулонефрита. Токсичность металлов может быть

151 151 обусловлена рядом взаимосвязанных механизмов [5], таких как усиление перекисного окисления липидов [7], угнетение митохондриального дыхания [6], что наряду с прямым угнетающим действием на ферментные системы может нарушать работу транспортных механизмов клеточных мембран. Целью нашей работы было изучение некоторых патогенетических механизмов изменений водо- электролитовыделительной функции почек на фоне длительного введения сульфата кадмия и хлорида ртути. Материалы и методы. Двум группам крыс-самцов линии Вистар массой г вводили подкожно раствор сульфата кадмия ( 1) и хлорида ртути ( 2) в дозе по 0,1 мг / кг (в пересчете на металл) каждый день в течение двух месяцев. Через 1 месяц и через 2 месяца эксперимента у контрольных (интактных) и опытных групп животных определяли показатели водовыделительной функции почек при спонтанном шестичасовом диурезе: уровень диуреза, скорость клубочковой фильтрации, процент канальцевой реабсорбции воды, а также показатели электролитного гомеостазиса: концентрацию катионов натрия, калия, кальция и магния в крови, уровень экскреции катионов с расчетом их фильтрационного заряда и процента относительной канальцевой реабсорбции. В конце эксперимента животные забивались с использованием тиопенталового наркоза и в гомогенатах тканей почек послойно определяли концентрацию натрия и мочевины, а также активность Na +,К + -АТФ-азы. Содержание натрия и калия в сыворотке и моче определяли методом пламенной фотометрии с помощью пламенного анализатора жидкостей ПАЖ-1, все остальные исследования проводили спектрофотометрически (спектрофотометр UNICO). Кальций определяли с помощью метода, основанного на изменении окраски эриохрома синего в зависимости от концентрации кальция (Рябов С. И. и др., 1979). Концентрацию магния в биологических средах определяли с помощью метода в основе, которого лежит способность последнего образовывать в щелочной среде с титановым желтым комплекс желто-красного цвета (Рябов С. И. и др., 1979). Измерение уровня креатинина проводили по методике,

152 152 основанной на его реакции с пикратом натрия (Рябов С. И. и др., 1979). Активность Na +,К + -АТФ-азы определяли по методу Scow J. C., (1957). Удельную активность фермента рассчитывали на мг белка в час (мкмоль/ Рн / мг белка / час). Белок в пробах определяли по методу Lowry O. H., (1951). Содержание натрия и калия в биологическом материале определяли методом пламенной фотометрии. Экстракция натрия из тканей производилась 0,75 Н азотной кислотой (Руммель А. Г., Баженов А. Ф., 1967). Содержание мочевины в тканях почки определялось методом С. Г. Гасанова (1962). Результаты опытов обработаны математически на ПЭВМ Pentium-4 методом вариационного анализа с применением критерия «t» Стьюдента с использованием программ Prizma 5.0 и Excel Результаты и обсуждение. Как введение кадмия, так и ртути (табл.1) приводило к достоверному увеличению, относительно интактных животных, спонтанного шестичасового диуреза, что было обусловлено существенным снижением канальцевой реабсорбции воды. Через два месяца эксперимента, на фоне введения соли кадмия, при тенденции к снижению скорости клубочковой фильтрации, диурез увеличивается еще в большей степени за счет прогрессивного снижения канальцевой реабсорбции воды. Таблица 1 Показатели водовыделительной функции почек при подкожном введении сульфата кадмия и хлорида ртути в дозе 0,1 мг / кг (М±м) Диурез мл / час / 100г Фон Введение сульфата кадмия Введение хлорида ртути 1 месяц 2 месяц 1 месяц 2 месяц 0,116±0,006 0,146±0,004* 0,17±0,004* 0,18±0,007* 0,197±0,009* Клубочковая фильтрация, 10,5±0,70 9,35±0,244 9,14±0,20* 7,17±0,27* 5,52±0,0,27* мл / час / 100г Канальцевая реабсорбция, % 98,86±0,076 98,4±0,045* 98,12±0,037* 97,5±0,12* 96,36±0,23* * достоверные изменения относительно фона

153 153 В опыте с хронической интоксикацией сулемой значительное увеличение диуреза через 1 месяц, было также обусловлено снижением канальцевой реабсорбции воды, независимо от значительного снижения скорости клубочковой фильтрации. Через два месяца эксперимента снижение скорости клубочковой фильтрации и в большей степени канальцевой реабсорбции воды носили более выраженный характер, следствием чего явилось прогрессивное увеличение диуреза, причем все изменения проявлялись в достоверно большей степени, чем в группе с введением кадмия. Содержание натрия в крови у животных с введением соли кадмия достоверно не изменялось, в то время как экскреция катиона (рис.1) увеличилась только в конце второго месяца эксперимента, что также было обусловлено снижением его канальцевой реабсорбции, несмотря на достоверное уменьшение фильтрационного заряда катиона. Экскреция натрия в условиях сулемовой интоксикации была увеличена в той же степени, что и в группе 1, за счет достоверно более низкой канальцевой реабсорбции и фильтрационного заряда катиона, а концентрация натрия в плазме крови через два месяца была достоверно ниже таковой у интактных животных, а также и опытных группы 1. Изменения почечной обработки кальция носили однонаправленный характер в обеих группах животных (рис.2). Экскреция катиона уже по истечении первого месяца эксперимента, и в значительно большей степени второго, достоверно увеличилась по отношению к таковой у интактных крыс, что отмечалось при снижении фильтрационного заряда катиона за счет значительного прогрессивного уменьшения относительной канальцевой реабсорбции кальция на фоне уменьшения его концентрации в плазме крови. На фоне введения хлорида ртути отмечались аналогичные изменения кальциевого баланса, однако, с достоверно большей выраженностью, во все сроки исследования, всех показателей. Концентрация в плазме крови и почечная обработка калия на фоне введения сульфата кадмия достоверно не менялись,

154 154 однако, у животных с введением хлорида ртути было отмечено снижение экскреции катиона в конце эксперимента на фоне снижения его концентрации в плазме крови и фильтрационного заряда. 18 Экскреция натрия мкмоль/мл/час/100г м 2м 1м 2м Фон Кадмий Ртуть мкмоль/мл/час/100г Фильтрационный заряд натрия 1м 2м 1м 2м % Канальцевая реабсорбция натрия м 2м 1м 2м Рис. 1. Изменение почечной обработки натрия на фоне введения сульфата кадмия и хлорида ртути в дозе по 0,1 мг / кг через 1 (1м) и 2 месяца (2м) В нашем эксперименте у животных группы 1 содержание магния в крови достоверно не изменялось, в то время как экскреция увеличилась в конце второго месяца эксперимента (рис.3), что также было обусловлено снижением показателя канальцевой реабсорбции, несмотря на достоверное уменьшение фильтрационного заряда катиона. У группы крыс 2 введение соли ртути также вызвало прогрессивное увеличение экскреции магния уже через один месяц за счет снижения канальцевой его реабсорбции в условиях сниженного фильтрационного заряда. При этом концентрация магния в плазме крови через

155 155 один месяц была ниже, а через два месяца выше, чем у интактных животных. Рис. 2. Изменение почечной обработки кальция на фоне введения сульфата кадмия и хлорида ртути в дозе по 0,1 мг / кг через 1 (1м) и 2 месяца (2м) Отмеченное, при введении металлов, нарушение концентрирующей функции почки может быть связано со снижением концентрации натрия и мочевины в мозговом и папиллярном слоях ткани почек, что было выявлено при исследовании гомогенатов слоев тканей почек всех групп животных. Прогрессирующее снижение канальцевой реабсорбции натрия и, вероятно, воды могло быть обусловлено и снижением активности Na / K-АТФазы в гомогенатах коркового и мозгового вещества почечной ткани, наряду с Mg-АТФазой, во всех слоях почечной ткани.

156 156 Рис. 3. Изменение почечной обработки магния на фоне введения сульфата кадмия и хлорида ртути в дозе 0,1 мг / кг через 1 (1м) и 2 месяца (2 м) Результаты нашей работы подтверждают наличие выраженного влияния металлов на водовыделительную функцию почек, а также гомеостаз и почечную обработку жизненно важных катионов, таких как кальций, натрий, калий и магний. Ведущая роль в этих изменениях принадлежит повреждению канальцевого аппарата почек, снижению активности АТФаз клеточных мембран канальцевого эпителия и снижению концентрации осмотически активных веществ в слоях ткани почек, таких как натрий и мочевина. Эти изменения характерны для токсического поражения, как кадмием, так и ртутью, а для ртутной интоксикации более специфично нарушение ещё и клубочковой фильтрации. Литература 1. Брин В. Б., Бузоева М. Р., Гаглоева Э. М. Профилактика проявлений токсической нефропатии вызванной тяжелыми метал-

157 157 лами (хлоридом кобальта, хлоридом ртути), с помощью применения цеолитоподобных глин Ирлитов // Вестник новых медицинских технологий. Тула, Т. XIV, 1. С Кокаев Р. И., Брин В. Б. Влияние интрагастрального и парентерального введения сульфата кадмия на функцию почек крыс // Вестник МАНЭБ Т.8, 3 (63). С Fukumoto M., Kujiraoka T., Hara M., Shibasaki T. Effect of cadmium on gap junctional intercellular communication in primary cultures of rat renal proximal tubular cells // Life Sci Vol. 69 (3). P Jimi S., Uchiyama M., Takaki A. Mechanisms of cell death induced by cadmium and arsenic // Ann. N. Y. Acad. Sci Vol P Lockitch G. Perspectives on lead toxicity. Clin.Biochem., 1993; vol.26; Lund B. O., Miller D. M. Studies in Hg-induced H2O2 production and lipid peroxidation in vitro in rat kidney mitochondria. Biochem.Pharmacol., 1993; 45; Mateo M. C., Aragon P., Prieto M. P. Inhibitory effect of cysteine and methionine on free radicals induced by mercury in red blood cells of patients undergoing haemodialysis. Toxicol.in vitro, 1994; 8; 4; Ohta H., Yamauchi Y., Nakakita M., Tanaka H. Relationship between renal dysfunction and bole metabolism disorder in male rats after long-term oral quantitative cadmium administration // Ind. Health Vol. 38 (4). P Stinson L. J., Darmon A. J., Dagnino L., D Souza S. J. Delayed Apoptosis Post Cadmium Injury in Renal Proximal Tubule Epithelial Cells. // Am. J. Nephrol Vol. 23 (1). P Tang W., Shaikh Z. A. Renal cortical mitochondrial dysfunction upon cadmium metallotionein administration Spraque-Dawley rats // Toxicol. Environ Health A Vol. 63 (3). P Trzcinka-Ochocka M., Jakubowski M., Razniewska G. The effects of environmental cadmium exposure on kidney function: the possible influence of age // Environ. Res Vol. 95 (2). P Zalups RK. Molecular interactions with mercury in the kidney. Pharmacol Rev 2000; 52:

158 158 УДК МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ПОЧЕК КРЫС С ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МОДЕЛЬЮ ОСТРОЙ ПОЧЕЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ФИТОПРЕПАРАТА «ТЕДЖАС» В КАЧЕСТВЕ ПИЩЕВОЙ ДОБАВКИ Корощенко Г. А., Суботялов М. А., Айзман Р. И. Новосибирский государственный педагогический университет, Россия, г.новосибирск На фоне приема фитопрепарата «Теджас» у крыс с острой почечной недостаточностью наблюдаются существенные улучшения некоторых ионно-осмотических показателей плазмы по сравнению с контрольными животными на стандартной диете; улучшается функциональное состояние почек, которое проявляется в нормализации диуреза, СКФ и относительной реабсорбции жидкости. В некоторых образцах почек животных отмечена повышенная сохранность клубочков. MORPHOLOGICAL AND FUNCTIONAL FEATURES OF RAT S KIDNEYS WITH EXPERIMENTAL MODEL OF SHARP NEPHRITIC INSUFFICIENCY AT USING PHYTOPREPARATION «TEDZHAS» AS THE FOOD ADDITIVE Korochshenko G. A., Subotyalov M. A., Aizman R. I. Novosibirsk State Pedagogical University, Russia, Novosibirsk Intake of phytopreparation «Тedzhas» at rats with sharp nephritic insufficiency caused the significant improvement of some ionic-osmotic indicators of plasma compare to control rats on standard diet; the functional condition of kidneys is shown normalisation of diuresis, GFR and relative water reabsorption. In some samples of animals kidneys the number of saved glomerulars is higher. Острая почечная недостаточность (ОПН) острое нарушение фильтрационной, экскреторной и секреторной функций почек вследствие воздействия на почечную паренхиму различных патологических экзогенных и эндогенных факторов, что приводит к олигоанурии, гиперазотемии, нарушению водно-электролитного и кислотно-щелочного равновесия.

159 159 В клинической практике для лечения острой почечной недостаточности широко применяются различные методы и лекарственные препараты, тем не менее, проблема разработки и использования новых протекторов занимает важное место в экспериментальной и клинической нефрологии. Эти обстоятельства послужили основой для выяснения возможности использования пищевой добавки «Теджас», для коррекции функций почек и водно-солевого обмена [3]. Эксперименты были выполнены на взрослых крысах линии Wistar массой г. Все животные были поделены на 3 группы: 1) контроль (К) (n=12); 2) группа животных с экспериментальной моделью ОПН (ОПН) (n=12); 3) группа животных с ОПН, в корм которых добавляли из расчета 2 % от массы корма пищевую добавку «Теджас», представляющую собой растительный комплекс, состоящий из кориандра, фенхеля и кумина (ОПН+Т), (n=12). Для моделирования ОПН животных в течение 24 часов перед началом эксперимента подвергали дегидратации. Затем в бедренные мышцы обеих конечностей крыс вводили 50 % раствор глицерина из расчета 10 мл на 1 кг массы тела [7]. После инъекции раствора крысы имели свободный доступ к воде и пище. На 3 сутки эксперимента проводили исследование функции почек путем анализа фоновых проб мочи, собранных в обменных клетках за 6 8 часов наблюдения, а также оценки почечной реакции на пероральное введение 5 % водной нагрузки. Пробы мочи собирали в течение 3 часов. В конце эксперимента у всех животных под эфирным наркозом из нижней полой вены забирали пробы крови объемом 5 мл для последующего физико-химического анализа показателей. В ходе эксперимента все животные содержались в стандартных условиях вивария без ограничения потребления воды и пищи. Концентрацию ионов натрия и калия в моче, плазме крови и образцах тканей определяли методом пламенной фотометрии с использованием фотометра «FLAPHO-4» производства Германия, Йена [1]. Концентрацию креатинина определяли по интенсивности цветной реакции Яффе на фотоэлектроколориметре «Spekol». Для определения осмотической концентрации мочи и плазмы крови использовали метод криоскопии. Измерения

160 160 выполняли на миллиосмометре «МТ-5». Парциальные функции почек рассчитывали по общепринятым формулам [5]. Статистический анализ проводили на основе вычисления средних арифметических (М) и их ошибок (±m). Различия показателей проб до и после введения нагрузки между группами оценивали методом вариационной статистики по t-критерию Стьюдента и считали достоверными при р 0,05 [4]. Расчеты производили с использованием программ пакета Microsoft Office. Анализ ионно-осмотических показателей плазмы крови показал, что у животных 2 (ОПН) группы после инъекции глицерина наблюдалось достоверное повышение концентрации креатинина и калия, а также снижение концентрации натрия по сравнению с животными контрольной группы. Указанные гомеостатические сдвиги у крыс второй группы свидетельствуют о развитии ОПН, что совпадает с литературными данными [2; 5; 7]. Однако после приема пищевой добавки с кормом у животных 3 й группы было зафиксировано достоверное снижение уровня калия и креатинина по сравнению с животными 2 группы, не употребляющих препарат «Теджас», и приближение этих показателей к контрольным значениям (таблица 1). Таблица 1 Ионно-осмотические показатели плазмы крови крыс (M±m) Группы животных P Na, P Р ммоль / л K, ммоль / л P cr, мг% osm, мосм / л 1 гр. (контроль) 114 ±7,7 3,0±0,4 0,9±0,02 286,7±2,7 2 гр. (ОПН) 106,8±5,0* 4,2±0,1* 1,8±0,05* 293,0±6,2 3 гр. (ОПН+Т) 123,2±8,8 3,0±0,2 Δ 0,9±0,01 Δ 289,4±2,5 Δ Примечание здесь и далее: * достоверные отличия от контрольной группы; Δ достоверные отличия между экспериментальными группами. Исходя из этого, можно заключить, что фитопрепарат «Теджас» вызывает выраженную нормализацию ионно-осмотических показателей плазмы при ОПН, приближая их к контрольным параметрам. На следующем этапе исследования представлялось важным оценить функциональное состояние почек крыс при ОПН в ус-

161 161 ловиях приема фитопрепарата «Теджас». Необходимо отметить, что анализ фоновых проб мочи позволил выявить, что у крыс 2 й группы было отмечено достоверное снижение уровня СКФ и относительной реабсорбции жидкости, а показатели диуреза были выше по сравнению с контрольной группой (рис. 1). Однако, на фоне приема препарата «Теджас» у крыс 3 й группы было зафиксировано достоверное снижение диуреза, помимо этого было отмечено достоверное повышение уровня СКФ и относительной реабсорбции жидкости, показатели которых близки к нормальным значениям контрольной группы. После введения водной нагрузки в большинстве случаев не было выявлено достоверных отличий в почечной реакции между показателями контрольной и экспериментальных групп. Однако у крыс 2 й группы на фоне ОПН уровень СКФ был достоверно ниже по сравнению с контрольной группой и группой ОПН+Т. Анализ ионоуретической функции почек крыс выяви, что на фоне спонтанного мочеотделения у животных 2 й группы экскреция натрия была достоверно ниже по сравнению с показателями контрольной группы. Однако на фоне приема фитопрепарата «Теджас» у животных 3 й группы этот показатель не отличался от контроля. При этом экскреция калия у них была достоверно ниже по сравнению с другими экспериментальными группами (рисунок 2). После введения водной нагрузки экскреция ионов снижалась и достоверных отличий в их выведении между группами не обнаружено. Полученные результаты экскреции ионов связаны с изменениями процессов фильтрации и реабсорбции катионов в канальцах нефрона, о чем свидетельствуют изменения экскретируемых фракций натрия и калия. Результаты светооптического исследования почек контрольных и экспериментальных животных показали, что почки всех животных контрольной группы имеют нормальную структурную организацию.

162 162 ммоль/100г*ч 2 1,5 1 0,5 0 фон * V сред. за 3 ч Контроль ОПН ОПН+Т RH 2 O % * фон * сред. за 3 ч СКФ ммоль/100г*ч * фон * сред. за 3 ч Примечание: см. табл.1 Рис. 1. Гидроуретическая функция почек крыс до (фон) и после введения 5 % водной нагрузки (средн. за 3 часа) (M±m)

163 163 На фоне ОПН было выявлено, что общая структурная композиция почки не изменена. Однако отмечено, что большинство клубочков находилось в состоянии отека, в некоторых из них наблюдались некротические изменения эндотелиоцитов. Кроме того, были выявлены кровоизлияния, полнокровие клубочковых сосудов. Проксимальные канальцы были расширены, в просветах большей половины канальцев гомогенно розового цвета белковые массы. Эпителий находился в состоянии гидропической дистрофии, отмечались очаговые некронефрозы. Просвет дистальных канальцев также был расширен, наблюдалась тиреодизация канальцев (содержимое от гомогенно розового цвета до оранжево-коричневого). Морфологическая структура почек животных 3 й экспериментальной группы имела незначительные отличия от 2 й группы. В некоторых образцах почек животных наблюдалась лучшая сохранность клубочков. Проксимальные канальцы были несколько расширены, в просветах отдельных канальцев гомогенно оранжево-коричневого цвета массы. Эпителий канальцев находился в состоянии гидропической дистрофии, но по сравнению со 2 й экспериментальной группой наблюдались единичные некронефрозы. Просвет дистальных канальцев умеренно расширен. Для оценки влияния пищевой добавки на распределение воды и электролитов в тканях животных представлялось интересным проанализировать их содержание по разнице с контролем. Анализ результатов исследования по содержанию натрия в тканевых водно-солевых депо показал, что на фоне ОПН наблюдалось достоверное снижение его концентрации в тканях сердца и скелетной мышцы бедра животных по сравнению с аналогичными показателями контрольной группы. На фоне использования препарата «Теджас» у животных 3 й группы в ткани скелетной мышцы бедра содержание натрия было достоверно выше по сравнению с показателями контрольной группы, тогда как в остальных исследуемых образцах не выявлено достоверных отличий от контрольной группы.

164 164 мкмоль/100г*ч * U NA *V Контроль ОПН ОПН+Т 0 фон сред. за 3 ч 50 U К *V 40 мкмоль/100г*ч * 0 фон сред. за 3 ч EF Na % 2 1,6 1,2 0,8 0,4 0 * фон * сред. за 3 ч

165 % * * EF K фон сред. за 3 ч Примечание: см. табл.1 Рис. 2. Ионоуретическая функция почек крыс до и после введения водной нагрузки (M±m) На фоне ОПН было отмечено увеличение содержания калия в образцах ткани печени, почки, сердца и скелетной мышцы бедра. Помимо этого, на фоне приема фитопрепарата «Теджас», содержание калия во всех исследуемых образцах тканей у животных 3 й группы было достоверно ниже аналогичных показателей 2 й группы и приближалось к значениям животных контрольной группы. Содержание воды в тканевых водно-солевых депо крыс не имело однонаправленной динамики изменений показателей. В тканях печени, почки и сердца содержание воды у животных 2 й группы было достоверно выше, тогда как в ткани скелетной мышце бедра достоверно ниже показателей контрольной группы. После приема пищевой добавки в тканях животных 3 й группы на фоне ОПН наблюдалось уменьшение процентного содержания воды практически во всех исследуемых образцах тканей, кроме тканей подкожно-жировой клетчатки и скелетной мышцы бедра. Таким образом, на фоне приема фитопрепарата «Теджас» наблюдалось изменение содержания воды и электролитов в тканевых депо. Наиболее четкие изменения прослеживались по содержанию калия в тканевых водно-солевых депо, что, вероят-

166 166 но, связано с гиперкалиемией на фоне ОПН и его нормализацией после приема фитопрепарата. Результаты настоящего исследования свидетельствуют о благоприятном эффекте препарата «Теджас» на функцию почек и водно-солевой обмен при острой почечной недостаточности, что позволяет рекомендовать его для дальнейшего изучения как ренопротектора. Литература 1. Берхин Е. Б. Методы экспериментального исследования почек и водно-солевого обмена / Е. Б. Берхин, Ю. И. Иванов. Барнаул, с. 2. Герасёв А. Д. Влияние природных цеолитов на функции почек крыс в условиях острой почечной недостаточности / А. Д. Герасёв, С. Н. Луканина, Г. А. Святаш, Р. И. Айзман // Нефрология и диализ Т С Лад Васант, Фроули Давид. Травы и специи / Пер. с англ., пятое издание с исправлениями и дополнениями. М.: Саттава, Институт трансперсональной психологии, с. 4. Лакин Г. Ф. Биометрия / Г. Ф. Лакин. М.: Высшая школа, с. 5. Наточин Ю. В. Физиология почки: функций и расчеты / Ю. В. Наточин. Л.: Наука, с. 6. Святаш Г. А. Морфофункциональные особенности почек крыс в норме и при острой почечной недостаточности в условиях цеолитовой диеты: автореф. дис.: канд. биол. наук / Г. А. Святаш; НГПУ. Новосибирск, с. 7. Shustin L. Role of Down-Regulated CHIF mrna in Pathofhisiologi of Hiperkalemia of Acute Tubular Necrosis / L. Shustin, H. Wald, M. M. Popovtzer // Amerikan. Journal of Kidney Diseseases V. 32. Р

167 УДК: КЛЕТОЧНЫЕ, СИСТЕМНЫЕ И ПОЧЕЧНЫЕ ЭФФЕКТЫ ГОРМОНА ЭПИФИЗА (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ) Митциев А. К. Северо-Осетинская государственная медицинская академия, Россия, г. Владикавказ; Мелатонин универсальный регулятор жизнедеятельности, являющийся одним из важнейших гормональных веществ в организме, участвует практически во всех процессах жизнедеятельности, контролирует многие функции организма: сон, деятельность сердечно-сосудистой, мочевыделительной и иммунной систем. CELL, SYSTEM AND KIDNEY EFFECTS EPIPHYSIAL HORMONE (LITERATURE REVIEW) Mitsciev A. K. Melatonin a universal regulator of life, which is one of the most important hormonal substances in the body, is involved in virtually all life processes, controls many body functions: sleep, the cardiovascular, urinary and immune systems. В последние годы роль мелатонина в организме человека привлекает к себе пристальный интерес многочисленных исследователей. Это связано с многообразием физиологических эффектов мелатонина и его значением для обеспечения нормальной жизнедеятельности организма. Шишковидное тело (эпифиз) это небольшое овальное железистое образование, которое относится к промежуточному мозгу и располагается в неглубокой борозде между верхними холмиками среднего мозга и над таламусом. Максимального развития эпифиз у человека достигает к 5 6 годам жизни, после чего, несмотря на продолжающееся активное функционирование, начинается его

168 168 возрастная инволюция. Основными функциями эпифиза в организме являются: регуляция циркадианных и сезонных ритмов организма; регуляция репродуктивной функции; антиоксидантная защита организма и противоопухолевая защита. Некоторые авторы полагают, что осуществляя контроль над эндокринной, нервной и иммунной системами, шишковидная железа интегрирует системный ответ на неблагоприятные факторы, действуя на резистентность организма. Синтез мелатонина происходит в эпифизе из триптофана, который поступает из сосудистого русла, превращаясь в серотонин [11]. Основным гормоном, осуществляющим активный физиологический контроль циркадианных ритмов, является мелатонин, секреция которого тесно связана с околосуточной периодичностью геофизических факторов, в первую очередь циклом деньночь. Известно, что основным ингибитором образования мелатонина является свет, вследствие этого максимальный уровень секреции гормона шишковидной железы наблюдается в ночные часы, а минимальный в утренние и дневные. Известно, что мелатониновая недостаточность приводит к нарушениям общерегуляторных биологических процессов [1; 6; 34]. Интенсивность образования мелатонина также зависит от возраста человека. Происходящая возрастная инволюция эпифиза у людей пожилого и старческого возрастов приводит к снижению секреции гормона [5; 8]. Следует указать, что эпифизарная система является одной из наиболее древних стрессопротективных систем организма [3; 16]. Из литературных данных известно, что мелатонин, повышая качество адаптивных механизмов организма, регулируя циркадианные биоритмы, позволяет не только усилить эффективность гипотензивной терапии при лечении артериальной гипертонии, но и способен нормализовать нарушенную циркадианную гемодинамику [7; 15]. В исследованиях Л. Б. Васьковой (2006) и Р. М. Заславской (2008) было установлено, что включение мелатонина в традиционный курс терапии гипертонической болезни способствует развитию более выраженного гипотензивного эффекта, что обусловлено способностью ме-

169 169 латонина оказывать влияние на сосудистый тонус, способствуя сосудорасширяющему эффекту, вследствие регулирования деятельности кальциевых каналов клеточных мембран, стимуляции образования простагландина Е и эндотелиального релаксирующего фактора [6; 8; 15; 29]. Механизмы сосудорасширяющего действия мелатонина, также обусловлены, его способностью связываться с собственными рецепторами в гладкомышечных и эндотелиальных клетках кровеносных сосудов, воздействовать на адренергические окончания периваскулярных нервов, угнетать образование вазопрессина в гипоталамусе и норадреналина в надпочечниках [17; 31]. Являясь продуктом биотрансформации мелатонина, адреногломеруло-тропин стимулирует выработку альдостерона в клубочковой зоне надпочечника. В экспериментальных исследованиях было установлено, что введение крысам экстракта эпифиза приводит к усилению активности клубочковой зоны, а также уменьшению натрийуреза, что не наблюдалось при введении экстракта адреналэктомированным животным. У крыс на 5 й день после эпифизэктомии снижалось выделение кальция и магния. Введение антиэпифизарной цитотоксической сыворотки экспериментальным животным приводит к значительному увеличению натрийуреза в ближайшие сутки и менее заметному во второй день после введения сыворотки, также отмечается повышение диуреза в первый день. В экспериментальных исследованиях было установлено, что применение мелатонина приводит к снижению интенсивности почечного кровотока, основным механизмом которого является активация симпатической нервной системы, сопровождающаяся системной вазоконстрикцией [25]. Оксидативный стресс играет важную роль в патогенезе ряда заболеваний почек поскольку многие осложнения возникают вследствие формирования окислительного стресса. Из литературных данных известно, что мелатонин применяется для профилактики нефротоксического действия при отравлении различными токсическими веществами. Мелатонин снижает выраженность процессов перекисного окисления липидов в клеточных структурах почек, уменьшает количество ак-

170 170 тивных форм кислорода, способных повредить многие клеточные макромолекулы, что может привести к гибели клетки [22; 26]. Нефропротекторная роль мелатонина также существенна в условиях ишемии почки, что было подтверждено в экспериментальных исследованиях [20]. Выраженное иммуномодулирующее действие мелатонина обусловлено его способностью, активно участвовать в процессах клеточного и гуморального иммунитета. Установлено, что мелатонин способен оказывать двойное влияние на иммунореактивность организма. При снижении иммунореактивности организма введение мелатонина приводит к значительной стимуляции иммунного статуса организма, а повторное введение низких доз гормона животным ослабляет нарушение продукции антител, снижение массы тимуса и противовирусной резистентности. При исходной гиперактивности иммунной системы введение мелатонина ингибирует образование цитокинов, снижает функциональную активность макрофагов и Т-хелперов. Следовательно, можно говорить о наличии у гормона иммуномодулирующей активности, что не противоречит представлениям об адаптогенной роли эпифиза. В основе иммуномодуляторного эффекта мелатонина лежит его способность воздействовать напрямую через специфические рецепторы на функции клеток лимфоидных органов и клеточных элементов крови [2; 13; 23]. Антиоксидантное свойство мелатонина обусловлено его способностью активно участвовать в метаболизме свободных радикалов, подавлять реакции липидной пероксидации и защищать клеточные мембраны от деструктивного действия продуктов перекисного окисления липидов [5; 10]. Проведённые экспериментальные исследования выявили наличие у мелатонина выраженного антиоксидантного действия, что характеризовалось достоверным снижением уровня малонового диальдегида и повышением активности супероксиддисмутазы в эритроцитах людей [9; 12]. В качестве антиоксиданта мелатонин действует повсеместно, проникая через все биологические барьеры. Мелатонин присутствует во всех клеточных структурах, что свидетельствует об универсальности антиоксидантно-

171 171 го действия мелатонина. В экспериментальных исследованиях было установлено, что мелатонин обладает значительно более выраженной антиоксидантной активностью, в плане прерывания процессов перекисного окисления липидов и инактивации свободных радикалов, чем известные антиоксиданты [13; 30]. Мембранопротекторное действие мелатонина, обусловлено его способностью, контролировать процессы пролиферации, дифференцировки и клеточного апоптоза. Являясь гормоном диффузной нейроэндокринной системы, мелатонин обладает способностью дистантного действия, вследствие широко распространённой системы мембранных мелатониновых рецепторов, располагающихся в нейросекреторных клетках различных ядер гипоталамуса, в нейронах предоптической зоны, лимбической системе, таламусе и в почках. Мелатонин активно участвует в углеводном обмене организма, стимулируя поглощения глюкозы тканями и депонирование её в печени в виде гликогена [5; 32; 33]. Установлено, что снижение секреторной активности шишковидной железы обуславливает депрессивные сдвиги в поведении. Эпифизарный дефицит вносит значительный вклад в формировании психической депрессии. Анализ литературных данных выявил у мелатонина способность к увеличению объёма зрительной и слуховой памяти, что позволяет судить о ноотропной активности мелатонина. Обладая рядом многочисленных ценных фармакологических свойств, мелатонин может найти клиническое применение в терапии онкологической патологии, вследствие присущей ему способности оказывать угнетающее действие на пролиферацию клеток [4; 9; 18]. Предметом внимания многочисленных исследований в последние годы стало изучение возможных антитоксических свойств мелатонина в условиях хронического воздействия солей тяжелых металлов на организм [19; 21; 24; 27; 28]. В ряде работ была экспериментально доказана протекторная роль мелатонина в условиях хронической свинцовой интоксикации. Так профилактическое применение мелатонина в условиях хронической свинцовой интоксикации нивелировало измене-

172 172 ния показателей кроветворной системы, нормализовало биохимические показатели крови, снижало активность процессов перекисного окисления липидов [21; 24]. Доказана кардиопротекторная роль мелатонина в условиях хронической сулемовой интоксикации, обеспечивающая значительное снижение смертности от ишемической болезни сердца у шахтеров, находившихся в длительном контакте с ртутью [28]. В экспериментальной работе Kara H. (2007) выявлен защитный эффект мелатонина против индуцированного кадмием окислительного повреждения тканей крыс [27]. Из литературных данных известно, что воздействие на организм человека геомагнитных бурь активирует симпатико-адреналовую систему организма, что приводит к изменению функциональной активности эпифиза и десинхронизации суточного ритма. Исследования, проведённые С. И. Рапопорт (2007), установили, что пациенты, страдающие сердечно-сосудистой патологией, принимавшие мелатонин (мелаксен) чувствовали себя значительно лучше как в период, предшествовавший геомагнитным бурям, так и во время и после геомагнитных бурь, относительно больных получавших только базисную терапию [16]. Мелатонин, наряду с описанными выше многочисленными свойствами, обладает выраженной способностью к регуляции деятельности органов желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). Следует указать, что в ЖКТ синтезируется в 400 раз больше мелатонина, чем в эпифизе, но действие его преимущественно местное, вследствие того, что около 95 % мелатонина, синтезированного в ЖКТ метаболизируется поступая в печень [13; 14]. Из литературных данных известно, что мелатонин регулирует моторику органов ЖКТ, улучшает капиллярное кровообращение слизистой оболочки, восстанавливает местный гормональный баланс гастроинтестинальных гормонов, регулирует секрецию и моторику ЖКТ. Установлено, что применение мелатонина в комплексной терапии заболеваний ЖКТ оказывается более эффективным, чем при использовании других схем терапии, что подтверждается лабораторными показателями и морфологическими исследованиями [9].

173 173 Таким образом, из вышеизложенного следует, что многообразие физиологических эффектов мелатонина, не полностью используется в современной медицине и перспективы его дальнейшего клинического применения достаточно оптимистичны. Литература 1. Анисимова В. Н. Мелатонин: роль в организме, применение в клинике. СПб.: Изд-во «Система», Анисимов. В. Н., Виноградова И. А. / Старение женской репродуктивной системы и мелатонин. СПб.: Издательство «Система», Арушанян Э. Б. / Эпифизарный гормон мелатонин и неврологическая патология. Русский медицинский журнал Т С Арушанян Э. Б. / Изучение психомоторной активности гормона эпифиза мелатонина оригинальное направление наших исследований. Экспериментальная и клиническая фармакология Т С Баллюзак М. Ф., Гриненко Т. Н., Кветная Т. В. / Роль мелатонина в развитии метаболического синдрома. Клиническая медицина С Васькова Л. Б., Мусина Н. З., Сушкова О. С. / Эффективность применения мелатонина при лечении гипертонии. Фармация С Замотаев Ю. Н., Еникеев А. Х., Коломоец Н. М. / Применение мелаксена в комплексной терапии артериальной гипертонии у лиц, работающих на конвейерном производстве. Клиническая медицина С Заславская Р. М., Щербань Э. А., Логвиненко С. И. / Мелатонин в комплексном лечении больных стабильной стенокардией и артериальной гипертонией. Клиническая медицина С Комаров Ф. И., Райхлин Н. Т., и др. / Синдром раздражённой кишки. Клинико-морфологические аспекты при лечении мелаксеном. Клиническая медицина С Котовская Ю. М. / Метаболический синдром: прогностиче-

174 174 ское значение и современные подходы в комплексной терапии. Сердце С Левин Я. И. / Мелатонин (мелаксен) в терапии инсомии. Русский медицинский журнал Т С Лилица Г. В., Заславская Р. М., Калинина Е. В. / Эффективность метаболических препаратов в комплексном лечении пожилых больных постинфарктным кардиосклерозом и недостаточностью кровообращения. Клиническая медицина С Малиновская Н. К. / Мелатонин: Вчера, сегодня, завтра. Клиническая медицина С Малиновская Н. К. Мелатонин и функции желудочно-кишечного тракта. / Рос. Журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол С Пат Российская федерация. МКИ8A61K31 / 34. Способ лечения больных ишемической болезнью сердца, стабильной стенокардией в сочетании с артериальной гипертонией / Заславская Р. М., Щербань Э. А.: Заславская Р. М., Щербань Э. А / 14, заявл ; опубл // Бюл Рапопорт С. И., Смирнова А. В., Наумченко Н. Н., Гайдаш С. П. / Первый опыт применения мелатонина (мелаксена) в профилактике воздействия магнитных бурь у больных с сердечно-сосудистой патологией. Клиническая медицина С Репетий Н. Г. / К вопросу о значении мелатонина в этиопатогенезе артериальной гипертонии у лиц пожилого возраста. Успехи Геронтологии Вып. 15. С Chang HM, Wu UI, Lan CT. Melatonin preserves longevity protein (sirtuin 1) expression in the hippocampus of total sleepdeprived rats. J Pineal Res Oct;47 (3): Epub 2009 Jul Dai M, Cui P, Yu M, Han J, Li H, Xiu R. Melatonin modulates the expression of VEGF and HIF-1 alpha induced by CoCl 2 in cultured cancer cells. J Pineal Res Mar;44 (2): Dogan Atılgan, Bekir S. Parlaktas, Nihat Uluocak, Fikret Erdemir, Fatih Fırat, Unal Erkorkmaz,1 and Oguzhan Saylan.Effects of

175 175 melatonin on partial unilateral ureteral obstruction induced oxidative injury in rat kidney. Urol Ann May-Aug; 4 (2): El-Sokkary GH, Kamel ES, Reiter RJ. Prophylactic effect of melatonin in reducing lead-induced neurotoxicity in the rat. Cell Mol Biol Lett. 2003;8 (2): Emin Ozbek. Induction of Oxidative Stress in Kidney Int J Nephrol. 2012; 23. França EL, Feliciano ND, Silva KA, Ferrari CK, Honorio-França AC. Modulatory role of melatonin on superoxide release by spleen macrophages isolated from alloxan-induced diabetic rats. Bratisl Lek Listy. 2009;110 (9): Flora SJ, Pande M, Kannan GM, Mehta A. Lead induced oxidative stress and its recovery following co-administration of melatonin or N-acetylcysteine during chelation with succimer in male rats. Cell Mol Biol (Noisy-le-grand). 2004;50 Online Pub:OL Jonathan S. Cook,2 Charity L. Sauder,1 and Chester A. Ray. Melatonin differentially affects vascular blood flow in humans. Am J Physiol Heart Circ Physiol February; 300 (2): H670 H Jumana M. Yousef, Gong Chen, Prue A. Hill, Roger L. Melatonin Attenuates Colistin-Induced Nephrotoxicity in Rats. Nation Antimicrob Agents Chemother September; 55 (9): Kara H, Cevik A, Konar V, Dayangac A, Yilmaz M. Protective effects of antioxidants against cadmium-induced oxidative damage in rat testes. Biol Trace Elem Res Winter;120 (1-3): Kobal AB, Horvat M, Prezelj M, Briski AS, Krsnik M, Dizdarevic T, Mazej D, Falnoga I, Stibilj V, Arneric N, Kobal D, Osredkar J. The impact of long-term past exposure to elemental mercury on antioxidative capacity and lipid peroxidation in mercury miners. J Trace Elem Med Biol. 2004;17 (4): McArthur A. J., Gilette M. U., Prosser R. A. Melatonin directly resets the rat suprahiasmatik circadian clock in vitro. Brain Res. 1991: 565: Reiter RJ. Melatonin and aging. In: Morley JE, Ambrecht HJ, Coe RM et al, eds. The Science of Geriatrics. New York: Springer, 2000:

176 Salie R. et al. Melatonin protects against ischemic-reperfusion myocardial damage. J. Mol. Cell. Cardiol. 2007; 33 (2): Sharma S, Haldar C, Chaube SK, Laxmi T, Singh SS. Long-term melatonin administration attenuates low-let gamma-radiation-induced lymphatic tissue injury during the reproductively active and inactive phases of Indian palm squirrels (Funambulus pennanti). Br J Radiol Feb;83 (986): Srivastava RK, Krishna A. Melatonin modulates glucose homeostasis during winter dormancy in a vespertilionid bat, Scotophilus heathi. Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol Mar;155 (3): Epub 2009 Dec Wiechmann AF, Hollaway LR, Rada JA. Melatonin receptor expression in Xenopus laevis surface corneal epithelium: diurnal rhythm of lateral membrane localization. Mol Vis Nov 17;15: УДК: ПРОФИЛАКТИКА МЕЛАКСЕНОМ НЕФРОТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ СВИНЦА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Митциев А. К.* ), Митциев К. Г.** ), Боциева Н. В. *) * ) Северо-Осетинская государственная медицинская академия, Россия, г. Владикавказ; ** ) Институт биомедицинских исследований ВНЦ РАН и РСО-Алания, Россия, г. Владикавказ Нарушения электролито-водовыделительной функций почек крыс в условиях хронической свинцовой интоксикации, выражающиеся в увеличении объема диуреза, увеличении степени протеинурии и увеличении экскреции натрия и кальция с мочой, свидетельствуют о выраженном нефротоксическом действии ксенобиотика, что также подтверждается морфологическими исследованиями почек. Профилактическое применение мелаксена в условиях хронической свинцовой интоксикации, способствует восстановле-

177 177 нию уровня экскреции основных катионов с мочой, восстановлению диуреза, уменьшению протеинурии. PREVENTION OF LEAD NEPHROTOXICITY BY MELAХEN IN THE EXPERIMENT Mitsciev A. K., Mitsciev K. G., Botsieva N. V. Disturbances of the electrolyte- water excretory renal function in rats in conditions of chronic lead intoxication lead to increase in urine output, increasing the degree of proteinuria and increased excretion of sodium and calcium in the urine indicates pronounced nephrotoxic xenobiotic, which is also confirmed by morphological examination of the kidneys. Prophylactic melaxen in chronic lead intoxication, the recovery of the level of excretion of the major cations in the urine, the restoration of urine output, reduction of proteinuria. Введение. Из многочисленных веществ загрязняющих окружающую среду, наиболее токсичными считаются тяжёлые металлы, приоритетным из которых является свинец, включенный ВОЗ в списки токсических веществ первого класса опасности [2]. Свинец характеризуется высокой токсичностью, способностью повреждать жизненно важные органы и системы организма. Из литературных данных известно, что отмечается рост частоты заболеваний мочевыделительной систем у населения, проживающего в экологически неблагополучных районах [1]. Свинец, обладает выраженной способностью накапливаться в интерстициальной ткани почек, где, активируя медиаторы воспаления, приводит к развитию воспалительных процессов. Способность к прямому токсическому воздействию на эндотелий клубочков, мезангиальные клетки, тубулярный эпителий и базальные мембраны гломерул, свидетельствует о наличие у свинца выраженного нефротоксического действия, приводящего к развитию патологии почек, Токсический эффект свинца на почки обусловлен его способностью повреждать митохондрии преимущественно проксимальных канальцев почки, что ведет к значительному снижению канальцевой реабсорбции воды [4]. Исходя из вышесказанного следует, что актуальной является

178 178 проблема поиска эффективных средств профилактики токсического действия свинца. В качестве профилактического средства в условиях хронической свинцовой интоксикации нами был выбран синтетический аналог гормона эпифиза «Мелаксен», фирмы Unipharm-USA. USA. Мелаксен оказывает выраженное адаптогенное действие, снижает стрессовые реакции, оказывает иммуностимулирующее действие, регулирует нейроэндокринные функции. Наличие у мелаксена выраженного мембранопротекторного свойства, обусловлено его мощным антиоксидантным действием [3]. Цель исследования Изучить возможную эффективность профилактического применения мелаксена в условиях хронической интоксикации ацетатом свинца. Материал и методы Работа проведена на 45 крысах-самцах линии Вистар, массой грамм. Эксперименты проводились в 3 группах животных: 1 я группа интактные животные; 2 я группа животные с внутрижелудочным введением ацетата свинца; 3 я группа животные с внутрижелудочным введением ацетата свинца и интрагастральным введением мелатонина. Модель хронической свинцовой интоксикации создавалась путём внутрижелудочного введения крысам раствора ацетата свинца, в дозировке 40 мг / кг (в пересчёте на металл), ежедневно 1 раз в сутки, в течение 16 дней, двум группам животных (группа 2 и 3). Одновременно, с первого дня введения ацетата свинца, крысам группы 3 каждый день интрагастрально вводили мелатонин в дозировке 10 мг / кг. В качестве препарата мелатонина, нами использовался синтетический аналог гормона эпифиза, «Мелаксен» фирмы Unipharm-USA. Крысы в течение эксперимента находились на стандартном пищевом рационе, имели свободный доступ к воде и пище в течение суток. Световой режим естественный.

179 179 По истечении времени эксперимента (30 дней), исследовали функциональное состояние почек, что включало определение диуреза (мл / час / 100г), скорости клубочковой фильтрации по клиренсу эндогенного креатинина (мл / час / 100г), относительной канальцевой реабсорбции воды (%), экскреции натрия, кальция и белка с мочой. Для изучения электролитовыделительной функции почек крыс определяли экскрецию Na и Ca с мочой и концентрацию их в плазме крови, фильтрационный заряд и относительную канальцевую реабсорбцию катионов. Содержание натрия в плазме крови и моче определяли методом пламенной фотометрии с помощью автоматического пламенного фотометра ФПА-2, концентрацию кальция и креатинина определяли на спектрофотометре PV1251C с помощью наборов «Кальций-Арсеназо-Агат», «Креатинин-Агат», ООО «Агат-Мед» (г. Москва, Россия). Концентрацию белка определяли на спектрофотометре PV1251C по методу Лоури. Для гистологических исследований образцы тканей (почки) фиксировали в 10 % нейтральном формалине, после чего подвергали заливке в парафин с последующим приготовлением срезов толщиной 7 8 микрон. Срезы окрашивались гематоксилином и эозином. Изучение срезов проводилось в проходящем свете при помощи микроскопа Микмед-1 под увеличением 80*200*400. Результаты всех серий опытов обработаны статистически с применением критерия «t» Стьюдента на ПЭВМ Pentium-3 с использованием программы Prizma 4.0. Результаты и обсуждение Результаты экспериментальных исследований позволили выявить увеличение объёма спонтанного диуреза у животных внутрижелудочно получавших ацетат свинца относительно фоновых животных, несмотря на снижение скорости клубочковой фильтрации. Полиурическая реакция была обусловлена выраженным снижением канальцевой реабсорбции воды. Протеинурия в условиях внутрижелудочного введения ацетата свинца носила ярко выраженный характер, превышая более чем в два раза фоновые значения (таб.1). Изменения концентрирующей

180 180 функции почек в условиях хронической свинцовой интоксикации проявлялись в виде снижения осмолярности мочи относительно значений интактного контроля (таб.3). Таблица 1 Влияние мелаксена на основные процессы мочеобразования и экскрецию белка с мочой у крыс на фоне введения ацетата свинца (М±м) Условия опыта Стат. показат. Процессы мочеобразования Белок экскреция мг / час / 100 г Диурез, F R мл / час / 100 г мл / час / 100 г Н2О % 0,091 18,76 99,51 1,395 Фон М±m ±0,0032 ±0,53 ±0,024 ±0,049 0,111 15,86 99,30 3,41 М±m Группа 2 ±0,0035 ±0,42 ±0,017 ±0,152 р *) *) *) *) 0,098 16,41 99,41 2,6 М±m Группа 3 ±0,0024 ±0,13 ±0,015 ±0,054 р ##) *) **) #) *) #) Примечание: (*) достоверное (р 0,001) изменение по сравнению с фоном; (**) достоверное (р 0,05) изменение по сравнению с фоном; (#) достоверное (р 0,001) изменение относительно группы 2; (##) достоверное (р 0,05) изменение относительно группы 2; F скорость клубочковой фильтрации, R H2O канальцевая реабсорбция воды. Электролитовыделительная функция почек экспериментальных животных, получавших изолированное внутрижелудочное введение ацетата свинца, характеризовалась повышением экскреции натрия и кальция, относительно фоновых значений интактной группы животных, что было обусловлено наличием выраженных изменений в фильтрационном заряде и канальцевой реабсорбции катионов (таб.2). Внутрижелудочное ведение мелаксена способствовало восстановлению уровня канальцевой реабсорбции воды и скорости клубочковой фильтрации в условиях хронической свинцовой интоксикации, что в итоге приводило к восстановлению уровня диуреза у крыс, относительно значений 2 группы животных (таб.1).

181 181 Профилактическое введение мелаксена способствовало снижению степени протеинурии, повышению при этом показателя осмолярности мочи относительно значений группы животных получавших внутрижелудочное введение одного ацетата свинца (группа 2) (таб.1; таб. 3.). Таблица 2 Влияние мелаксена на почечную обработку натрия и кальция у крыс на фоне внутрижелудочного введения ацетата свинца (М±м) Условия опыта Стат. показат. Фон М±m 12,34 ±0,163 Группа 2 Группа 3 Процессы почечной обработки натрия и кальция E Na F Na R Na E Ca F Ca R Ca мкмоль / час / 100 г 2526 ±67,32 % ммоль / час / 100 г % 99,51 ±0,016 0,225 ±0,005 24,89 ±0,46 99,1 ±0,025 М±m 15, ,1 99,25 0,251 20,6 98,78 ±0,21 ±47,4 ±0,019 ± 0,009 ± 0,38 ±0,044 р *) *) *) **) *) *) М±m 13, ,7 99,36 0,228 21,79 99,00 ±0,2 ±20,2 ±0,009 ±0,005 ±0,171 ±0,021 р *) #) **) *) #) ##) *) ##) **) #) Примечание: (*) достоверное (р 0,001) изменение по сравнению с фоном; (**) достоверное (р 0,05) изменение относительно с фоном; (#) достоверное (р 0,001) изменение относительно группы 2; (##) достоверное (р 0,05) изменение относительно группы 2; E Na экскреция Na, F Na фильтрационный заряд Na, R Na относительная канальцевая реабсорбция Nа, F Ca фильтрационный заряд кальция, E Ca экскреция кальция, R Ca канальцевая реабсорбция кальция. Применение мелаксена нормализовывало фильтрационные заряды катионов и восстанавливало их относительную канальцевую реабсорцию в условиях хронической свинцовой интоксикации, что способствовало снижению экскреции натрия и кальция, относительно группы животных изолированно получавших ацетат свинца (таб.2).

182 182 Таблица 3 Влияние мелаксена на показатели осмолярности мочи на фоне введения ацетата свинца (М±м) Условия опыта Стат. показатель Osm осм / л Фон М±m 2,406±0,08 Группа 2 М±m 1,56± 0,073 р *) Группа 3 М±m 1,91± 0,055 р *) #) Примечание: (*) достоверное (р 0,001) изменение по сравнению с фоном; (#) достоверное (р 0,05) изменение относительно группы 2; Osm осмолярность мочи. Гистологическое исследование почек позволило выявить наличие выраженных морфологических изменений в группе животных, получавших изолированное введение ацетат свинца (группа 2). Так в почках были выявлены отчетливые дистрофические изменения в клубочках и канальцевом аппарате почек. Морфологические изменения в клубочке характеризовались: увеличением пространства между капсулой Боумена-Шумлянского и сосудистым клубочком (а), наличием измененных клеток эндотелия (б). Изолированное подкожное введение ацетата свинца приводило к увеличению просвета канальцев (в), внутри которых определялось гомогенное содержимое (г). Определялась тотальная зернистая и дигропическая дистрофия клеток канальцевого аппарата почек. Выявлялись участки некробиоза эпителиоцитов канальцев (д), ядра которых находились в состоянии лизиса (рис.1). При морфологическом исследовании почек в группе животных 3 гистологическая картина характеризовалась полным отсутствием некробиотических изменений канальцевого аппарата почек. Проявления гидропической дистрофии (а) были в

183 183 значительной степени менее выражены, чем в группе животных 1. Отмечались участки лимфоидно-гистиоцитарной инфильтрации, что является показателем, характеризующим активность регенераторных процессов (рис. 2). Рис.1. Морфологические изменения почек в условиях интрагастрального введения ацетата свинца. Окраска гематоксилином и эозином, увеличение 80*200*400 Рис.2. Влияние мелаксена на выраженность гистологических изменений почек в условиях интрагастрального введения ацетата свинца. Окраска гематоксилином и эозином, увеличение 80*200*400 Таким образом, из вышеизложенного следует, что применение мелаксена в условиях хронической свинцовой интоксикации, является эффективным способом профилактики токсического действия металла при хроническом отравлении. Литература 1. Быков А. А., Ревич Б. А. Медицина труда и промышленная экология С Кравченко О. К. // Медицина труда и промышленная экология С Лилица Г. А., Заславская Р. М., Калинина Е. В. Клиническая медицина С Османов И. М. Российский вестник перинатологии и педиатрии Т С